Este protocolo describe un método robusto de injerto de plántulas que no requiere experiencia previa o capacitación y puede ejecutarse a un costo muy bajo utilizando materiales fácilmente accesibles en la mayoría de los laboratorios de biología molecular.
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Artículo de método
Injerto de plántulas escalable, flexible y rentable
En este artículo
Resumen
Resumen
El injerto de plántulas en etapa temprana se ha convertido en una herramienta popular en genética molecular para estudiar las relaciones raíz-brote dentro de las plantas. El injerto de plántulas en etapa temprana de la pequeña planta modelo, Arabidopsis thaliana, es técnicamente desafiante y requiere mucho tiempo debido al tamaño y la fragilidad de sus plántulas. Una creciente colección de métodos publicados describe esta técnica con diferentes tasas de éxito, dificultad y costos asociados. Este documento describe un procedimiento simple para hacer un dispositivo de injerto reutilizable interno utilizando mezcla de elastómero de silicona, y cómo usar este dispositivo para el injerto de plántulas. En el momento de esta publicación, cada dispositivo de injerto reutilizable cuesta solo $ 0.47 en materiales consumibles para producir. Usando este método, los principiantes pueden tener sus primeras plántulas injertadas con éxito en menos de 3 semanas de principio a fin. Este procedimiento altamente accesible permitirá a los laboratorios de genética molecular de plantas establecer el injerto de plántulas como una parte normal de su proceso experimental. Debido al control total que los usuarios tienen en la creación y diseño de estos dispositivos de injerto, esta técnica podría ajustarse fácilmente para su uso en plantas más grandes, como el tomate o el tabaco, si se desea.
Introducción
El injerto es una antigua técnica hortícola que se convirtió en una práctica agrícola establecida por 500 BCE1. El injerto de diferentes variedades de plantas de cultivo para mejorar los rendimientos fue el primer uso de esta técnica, y continúa siendo utilizado para este propósito hoy en día. En la última década, el injerto ha atraído una cantidad creciente de atención como una herramienta para que los biólogos moleculares estudien la señalización a larga distancia en plantas 2,3,4,5. Si bien injertar plantas adultas....
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Protocolo
1. Preparación del dispositivo
- Haga el dispositivo de injerto de silicona fundiendo una solución de elastómero de silicona en una placa de Petri cuadrada (100 mm x 100 mm). Prepare 15 ml de la solución de elastómero, siguiendo las instrucciones del fabricante.
NOTA: Los kits de elastómero de silicona generalmente incluyen un líquido a base de silicona y un agente de curado, que cuando se mezclan permiten que la silicona se solidifique. - Prepare la placa de Petri cuadrada colocando cuatro piezas rectas de alambre de 29 G en la placa de Petri cuadrada, equidistantes entre sí (Figura 1A). Asegúrese de que el cable q....
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Resultados
Se probaron varios aspectos del diseño de la tira de injerto para identificar las condiciones óptimas de injerto que requerían la menor cantidad de habilidad técnica (Tabla 1). Todos los ensayos de injerto se completaron en medio MS de sacarosa al 0,5%, que se ha informado previamente como un medio de injerto ideal11,12.
El crecimiento óptimo de las plántulas no se puede lograr con la germinación en la tira
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Discusión
Resumen y significado
La formación de una unión de injerto es crucial para el injerto exitoso, que requiere un contacto directo y sin interrupciones entre el portainjerto y el vástago. El tamaño en miniatura y la fragilidad de las plántulas de plantas pequeñas como Arabidopsis hacen que sea técnicamente difícil cumplir con este requisito. Una técnica desarrollada en los primeros métodos de injerto de plántulas de Arabidopsis fue insertar tanto el vástago como el portainjerto en un co.......
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Divulgaciones
Los autores declaran no tener conflictos de intereses.
Agradecimientos
Gracias a Javier Brumos por la formación inicial y la orientación en el injerto de plántulas de Arabidopsis .
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Tubos cónicos de 15 mL VWR | International Inc | 10026-076 | |
| ACETONE (HPLC & Disolvente certificado por ACS) 4 L | VWR | BJAH010-4 | |
| BactoAgar | Sigma A1296-500g | ||
| Dow SYLGARD 184 Kit Encapsulante de Silicona Transparente 0,5 kg | Dow | 2646340 | |
| D-Sacarosa (Biología Molecular), 1 kg | Fisher Scientific | BP220-1 | |
| Tubos Eppendorf Snap-Cap Microcentrífuga Flex-Tube (1,5 mL), paquete de 500 | Fisher Scientific | 20901-551 / 05-402 | |
| Mango de bisturí de estilo de alta precisión #4 de Fisherbrand | Fisher Scientific | 12-000-164 | |
| Cinta de autoclave sin plomo de Fisherbrand | Fisher Scientific | 15-901-111 | |
| Placas de Petri cuadradas de Fisherbrand | Fisher Scientific FB0875711A | ||
| Leica Zoom 2000 Microscopio estereoscópico | Central | L-Z2000 | |
| Cinta de microporos | 3M | B0082A9FEM | |
| Murashige y Skoog Medio basal | Sigma | M5519-10L | |
| Parafilm | Genesee Scientific | 16-101 | |
| hidróxido de potasio | VWR International Inc | AA13451-36 | |
| Redi-earth Plug and Seedling Mix | Sun Gro Horticulture | SUN239274728CFLP | |
| Scotts Osmocote Plus | Hummert International | 7630600 | |
| Diseño quirúrgico n.º 22 Hoja de bisturí de carbono | Fisher Scientific | 22-079-697 | |
| Tween 20, 500 mL | Pinza de BP337500 | ||
| Fisher Scientific DUMONT STYL55 DUMOXEL POLS 110 MM | VWR | 102091-580 |
Referencias
- Mudge, K., Janick, J., Scofield, S., Goldschmidt, E. E. A history of grafting. Horticultural Reviews. 35, 437-493 (2009).
- Holbrook, N. M., Shashidhar, V. R., James, R. A., Munns, R. Stomatal control in tomato with ABA-deficient roots: Response of grafted plants to soil dry....
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Reimpresiones y permisos
