Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.

Artículo de método

Técnica quirúrgica para la ganglionectomía cervical superior en un modelo murino

8.1K visualizaciones

⸱

DOI:

10.3791/64527

⸱

2 de diciembre de 2022

En este artículo

Resumen

El presente protocolo describe un modelo murino de ablación de inervación adrenérgica mediante la identificación y resección del ganglio cervical superior.

Resumen

Cada vez hay más pruebas que sugieren que el sistema nervioso simpático desempeña un papel importante en la progresión del cáncer. La inervación adrenólica regula la secreción de las glándulas salivales, el ritmo circadiano, la degeneración macular, la función inmunitaria y la fisiología cardíaca. La simpatectomía quirúrgica murina es un método para estudiar los efectos de la inervación adrenérgica al permitir una ablación adrenérgica completa y unilateral, evitando la necesidad de una intervención farmacológica repetida y los efectos secundarios asociados. Sin embargo, la simpatectomía quirúrgica en ratones es técnicamente desafiante debido al pequeño tamaño del ganglio cervical superior. En este estudio se describe una técnica quirúrgica para identificar y resecar de forma fiable el ganglio cervical superior para extirpar el sistema nervioso simpático. La identificación y extirpación exitosas del ganglio se validan mediante la obtención de imágenes de los ganglios simpáticos fluorescentes utilizando un ratón transgénico, la identificación del síndrome de Horner posterior a la resección, la tinción de marcadores adrenérgicos en los ganglios resecados y la observación de una inmunofluorescencia adrenenérgica disminuida en los órganos diana después de la simpatectomía. Este modelo permite futuros estudios de la progresión del cáncer, así como de otros procesos fisiológicos regulados por el sistema nervioso simpático.

Introducción

Múltiples estudios han reportado que los nervios en el microambiente tumoral desempeñan un papel activo en el apoyo a la progresión tumoral. Se ha demostrado que la ablación de los nervios simpáticos adrenérgicos perjudica el desarrollo y la diseminación tumoral en el cáncer de próstata y gástrico in vivo 1,2,3, mientras que el bloqueo farmacológico de los receptores adrenérgicos inhibe el crecimiento tumoral en el cáncer de cabeza y cuello4. También se ha descrito afectación neural simpática en la progresión del carcinoma de páncreas, cuello ....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Protocolo

Los procedimientos con animales descritos aquí fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales del Memorial Sloan Kettering Cancer Center. Aquí se utilizaron ratones NSG machos y hembras de ocho semanas de edad. Los animales se obtuvieron de una fuente comercial (ver Tabla de Materiales). Los instrumentos se esterilizan, se desinfecta la superficie de trabajo quirúrgico, se desinfecta la superficie de la piel del animal y el cirujano usa guantes estériles durante todo el procedimiento.

1. Preparación de los ratones y configuración preoperatoria

  1. El día antes de la cirugía,....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Resultados

Este protocolo describe la extirpación quirúrgica de la SCG en un modelo de ratón. La figura 2 ilustra los puntos de referencia anatómicos, incluyendo el CCA, la vena yugular anterior y el SCG. Con la disección (Figura 2A), se puede ver la vena yugular anterior derecha discurriendo a lo largo del borde lateral de la tráquea. Como se encuentra más profundo que la vena yugular anterior, la CCA izquierda y su bifurcación en la arteria carótida interna (ACI) y la ar.......

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Discusión

Este protocolo describe un modelo murino para la ablación quirúrgica unilateral de la entrada de SCG. Esta técnica permite estudiar los efectos de la inervación adrenérgica en diversos entornos. Además, el ganglio simpático resecado también puede cultivarse en cultivo de matrigel 3D para experimentos in vitro 30.

Los estudios que involucran SCGx se han realizado principalmente en ratas, ya que su anatomía más grande permite una visualización y disección anatómi.......

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Q. W. recibió el apoyo de NIH T32CA009685. R. J. W. recibió el apoyo de NIH R01CA219534. Las instalaciones centrales del Memorial Sloan Kettering Cancer Center contaron con el apoyo de los NIH P30CA008748.

....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Anticuerpo anti-tirosina hidroxilasaEMD MilliporeAB152
Lágrimas Artificiales Lubricante Ungüento oftálmicoAkorn59399-162-35
Curity 2 x 2 pulgadas Esponja de gasa de 8 capas, estérilCovidien1806
Derf PortaagujasThomas Scientific1177K00
Microscopio
Pinzas Dumont #5/45Herramientas de ciencia fina11251-35
Pinzas de #7b DumontHerramientas de ciencia fina11270-20
ETHILON Sutura de nylonEthicon698H
Tijeras finas - ToughCutFine Science Tools14058-09
Cinta quirúrgica hipoalergénica3M Blenderm70200419342
Induction Cámara, 2Litros VetEquip941444
IsofluranoBaxter1001936060
NairChurch & Dwight Co., Inc40002957agente químico depilatorio
NORADRENALINE RESEARCH ELISALabor Diagnostika Nord (Rocky Mountain Diagnostics)BA E-5200
NSG RatónJackson LaboratorioJAX:005557
Povidona YodadaHisopo PDIS41350
Webcol Preparaciones de AlcoholCovidien5110
de disección

Referencias

  1. Magnon, C., et al. Autonomic nerve development contributes to prostate cancer progression. Science. 341 (6142), 1236361(2013).
  2. Zhao, C. M., et al. Denervation suppresses gastric tumorigenesis. Science Translational Medicine. 6 (250), 115(2014....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Reimpresiones y permisos

Etiquetas

Simpatectomía quirúrgicasistema nervioso simpáticoablación adrenérgicatinción de tirosina hidroxilasamicroscopía de fluorescenciasíndrome de Hornercuantificación de norepinefrinaglándula salival submandibular