Alimentación por membrana artificial contra garrapatas para Ixodes scapularis

Resumen

Aquí se presenta un método para alimentar garrapatas con sangre in vitro a través de un sistema de membrana artificial para permitir la congestión parcial o total de una variedad de etapas de la vida de las garrapatas.

Resumen

Las garrapatas y sus enfermedades asociadas son un tema importante de estudio debido a su salud pública y carga veterinaria. Sin embargo, los requisitos de alimentación de las garrapatas durante el estudio y la crianza pueden limitar las preguntas experimentales o la capacidad de los laboratorios para investigar las garrapatas y sus patógenos asociados. Un sistema de alimentación por membrana artificial puede reducir estos problemas y abrir nuevas vías de investigación que pueden no haber sido posibles con los sistemas tradicionales de alimentación animal. Este estudio describe un sistema de alimentación por membrana artificial que ha sido refinado para el éxito de la alimentación y la congestión para todas las etapas de la vida de Ixodes scapularis . Además, el sistema de alimentación por membrana artificial descrito en este estudio se puede modificar para su uso con otras especies de garrapatas a través del simple refinamiento del grosor de la membrana deseado. Los beneficios de un sistema de alimentación por membrana artificial se ven contrarrestados por la intensidad de mano de obra del sistema, los factores ambientales adicionales que pueden afectar el éxito de la alimentación y la necesidad de refinar la técnica para cada nueva especie y etapa de vida de las garrapatas.

Introducción

Las enfermedades transmitidas por garrapatas tienen un fuerte impacto en la salud de los seres humanos y los animales en todo el mundo, siendo responsables de más de dos tercios de todas las enfermedades asociadas a vectores en los Estados Unidos desde 2004 hasta 2016¹. Además, el número de casos ha ido creciendo en los últimos años, con más personas y ganado afectados por garrapatas y sus enfermedades asociadas ^2,3. Si bien es probable que haya numerosas causas para la tendencia al alza en el número de casos, el clima cambiante es un factor importante ^3,4

Protocolo

1. Preparación de la cámara de membrana de garrapatas

1. Prepare una superficie plana y no porosa, como un plano de base metálica recubierta de vidrio o cerámica de un soporte para brazos, limpiándola con etanol al 70% y luego cúbrala con una sola capa de envoltura de plástico, asegurándose de que la envoltura de plástico sea plana y sin burbujas ni arrugas (ver Figura 1A).
2. Pegue papel de limpieza de lentes de rayón 100% a la superficie preparada. Asegúrese de que sea plano y ligeramente tenso con cinta adhesiva en los cuatro lados del papel. Dos piezas de papel para lentes de 4 pulgadas x 6 se pueden con....

Resultados

Una alimentación exitosa depende de si se desea una congestión parcial o total. Alimentado con éxito I. scapularis se vuelve un tono de gris metálico para adultos y se separa por sí solo de la membrana. Sin embargo, si son al menos del tamaño de un guisante, pueden desprenderse de la membrana al terminar la alimentación. Para las etapas inmaduras de I. scapularis , el tamaño de las garrapatas completamente hinchadas varía, y debido a que, a diferencia de los adultos, no exhiben un cambio de color, el de.......

Discusión

La alimentación artificial por membrana de garrapatas proporciona una herramienta útil para una variedad de procedimientos experimentales, pero no es probable que reemplace la alimentación animal para todas las aplicaciones. Mantener grandes colonias de garrapatas en todas las etapas de la vida sin alimentación animal es generalmente insostenible. En cambio, el sistema de alimentación artificial es valioso para otros fines, como infectar garrapatas con patógenos no apoyados por huéspedes modelo, evaluar los impactos de d.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
00-10 Dureza Silicona	Smooth-On	Ecoflex 00-10	Tamaño de prueba de Smooth-On
Store 00-50 Dureza Silicona	Smooth-On	Ecoflex 00-50	Tamaño de prueba de Smooth-On Store
30 Dureza Silicona	Molde Smooth-On	Star 30	Tamaño de prueba de Smooth-On Store Placas de
cultivo celular de 6 pocillos	Corning Incorporated	3516
Trifosfato de adenosina (ATP)	Millipore Sigma	A1852-1VL	Se utiliza para hacer una solución acuosa de 3 mM de ATP que ha sido filtrada mediante un filtro de 0,2 micómetros
Sangre bovina	HemoStat	DBB500	Desfibrinada mecánicamente; 500 mL suelen ser suficientes para un experimento
Clingwrap	Fisherbrand	22-305654
Papel de filtro	Fisherbrand	09-790-2C	Autoclave y deje enfriar antes de usar. También puede utilizar la calidad fina en lugar de la media
Fluon (politetrafluoroetileno acuoso)	Bioquip	2871	Disponible de otras fuentes como https://canada-ant-colony.com/products/fluon-ptfe-10ml
Glucosa	Millipore Sigma	G8270-100G
Hexano	Millipore Sigma	139386-100ML
Papel para lentes	Fisherbrand	11-995	100% rayón
Nistatina	Gold Biotechnology	N-750-10
Parafilm	Fisherbrand	S37440
Penicilina/estreptomicina/fungizona	Gibco	15240-096	O genérico equivalente con concentración como la siguiente (10.000 unidades/mL de penicilina, 10.000 y micro; g/mL de estreptomicina, y 25 µ g/mL de anfotericina B)
Fagoestimulante	Hecho en casa		Recolectado de alimentaciones anteriores de garrapatas
Tubo de policarbonato	McMaster-Carr	8585K204	Corte a 45 mm de longitud, 1,25 pulgadas de diámetro exterior, 1 pulgada de diámetro interior. El corte requiere una muela abrasiva de sierra tronzadora.
Juntas tóricas de goma	McMaster-Carr	9452K38	5 mm de grosor, 1,25 pulgadas de diámetro interior
Pinza de tacto suave	VWR	470315-238
Súper pegamento			cianoacrilato pegamento
papel Unryu		de suministros de arte	fibra de morera 10 g/m2. Comprado en la tienda de suministros de arte Wet Paint, St. Paul, MN, EE. UU.