Aquí, presentamos un protocolo para la inyección intracardíaca de células de cáncer de próstata humano para generar un modelo de ratón con lesiones de metástasis óseas.
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Artículo de método
Inyección intracardíaca de células de cáncer de próstata humano para crear un modelo de ratón xenoinjerto de metástasis ósea
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En este artículo
Resumen
Resumen
Como la neoplasia maligna masculina más común, el cáncer de próstata (CP) ocupa el segundo lugar en mortalidad, principalmente debido a una tasa de metástasis ósea del 65% al 75%. Por lo tanto, es esencial comprender el proceso y los mecanismos relacionados con la metástasis ósea del cáncer de próstata para desarrollar nuevas terapias. Para ello, un modelo animal de metástasis ósea es una herramienta esencial. Aquí, informamos procedimientos detallados para generar un modelo de ratón con metástasis ósea a través de la inyección intracardíaca de células de cáncer de próstata. Un sistema de imágenes de bioluminiscencia puede determinar si las células de cáncer de próstata se han inyectado con precisión en el corazón y controlar la metástasis de las células cancerosas, ya que tiene grandes ventajas en el seguimiento del desarrollo de lesiones metastásicas. Este modelo replica el desarrollo natural de las células cancerosas diseminadas para formar micrometástasis en el hueso e imita el proceso patológico de la metástasis ósea del cáncer de próstata. Proporciona una herramienta eficaz para una mayor exploración de los mecanismos moleculares y los efectos terapéuticos in vivo de esta enfermedad.
Introducción
El cáncer de próstata es el cáncer más frecuente en hombres en 112 países y ocupa el segundo lugar en mortalidad en los países con mayor índice de desarrollo humano 1,2. La mayoría de las muertes en pacientes con cáncer de próstata son causadas por metástasis, y alrededor del 65%-75% de los casos desarrollarán metástasis óseas 3,4. Por lo tanto, se necesitan urgentemente la prevención y el tratamiento de las metástasis óseas del cáncer de próstata para mejorar el resultado clínico de los pacientes con cáncer de próstata. El modelo animal de metástasis ....
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Protocolo
Los ratones atímicos machos BALB/c machos de seis a ocho semanas de edad (n = 10) fueron alojados en jaulas de ratones ventilados individualmente (5 ratones/jaula) en una sala de animales libre de patógenos específicos (SPF) bajo las condiciones de ciclo de luz/oscuridad de 12 h, con libre acceso a alimento SPF y agua estéril. Los ratones fueron alimentados adaptativamente durante una semana antes de los experimentos. Todos los experimentos con animales fueron aprobados por el comité de bienestar animal de la Universidad de Medicina Tradicional China de Shanghai.
1. Preparación celular
- El día de la inyección de cé....
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Resultados
Las imágenes de bioluminiscencia ofrecen enormes ventajas en el monitoreo del desarrollo de lesiones metastásicas para un modelo de inyección intracardíaca. Poco después de la inyección de células cancerosas (dentro de las 24 h), se utilizaron imágenes de bioluminiscencia para visualizar las células cancerosas que ingresan a la circulación general (Figura 3A). La señalización obvia de bioluminiscencia en todo el cuerpo se verá cuando las células cancerosas se inyecten correctamente en la cir.......
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Discusión
La inyección intracardíaca de células de cáncer de próstata humano para generar metástasis óseas es un modelo de ratón ideal para explorar las funciones y mecanismos de la metástasis ósea del cáncer de próstata y evaluar la eficacia terapéutica. Los estudios han demostrado que el daño óseo probablemente ocurre en la tibia proximal y el fémur distal17, lo que puede deberse a su alta vascularización y actividad metabólica.
Dado que la metástasis ósea es una lesión metastá.......
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Divulgaciones
Todos los autores declaran que no hay intereses financieros en conflicto.
Agradecimientos
Este trabajo está respaldado por subvenciones del Programa Nacional de Investigación y Desarrollo Clave de China (2018YFC1704300 y 2020YFE0201600), la Fundación Nacional de Ciencias de la Naturaleza (81973877 y 82174408), los proyectos de investigación dentro del presupuesto de la Universidad de Medicina Tradicional China de Shanghai (2021LK047) y el Centro de Innovación Colaborativa de Shanghai de Transformación Industrial de Preparación de MTC Hospitalaria.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Jeringas y agujas de 1 mL | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd | 20200411 | Las células se inyectaron en los ventrículos de los ratones |
| Máquina de anestesia | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | R500IP | Equipo para anestesiar ratones |
| Contador automático de células | Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd | IC1000 | Para el recuento de células |
| BALB/c ratones atímicos | Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd. | Macho | de 6-8 semanas de edad, ratones machos |
| Sistema de imagen de bioluminiscencia | Shanghai Baitai Technology Co., Ltd | Vieworks | Para rastrear el crecimiento tumoral y la metástasis pulmonar si las células inyectadas están marcadas con luciferasa |
| Tubo de centrífuga (15 mL, 50 mL) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 430790, Corning | |
| Solución EDTA | Wuhan Xavier Biotechnology Co., Ltd | G1105 | Para la descalcificación de la tisura ósea |
| F-12 | medio Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 21700075, GIBCO | Medio de cultivo celular |
| Solución de formalina | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | BL539A | Para la fijación de la muestra de cada ratón |
| Isoflurano | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | VETEASY | Para anestesia |
| Lipofectamina 2000 | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 11668027, Thermo fisher | Reactivo de transfección de plásmidos |
| Línea celular PC-3 | Banco de células de la Academia China de Ciencias | TCHu 158 | cáncer de próstata |
| Solución salina tamponada con fosfato | Beyotime Biotechnology | ST447 | Lavar las células de osteosarcoma humano |
| Tripsina (0.25%) | Shanghai YueNian Biotechnology Co. , Ltd | 25200056, Gibco | Para separar las células |
| Vector (pLV-luciferasa) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | VL3613 | Plásmido para el |
| sistema de imágenes de rayos X | Brook (Beijing) Technology Co., Ltd | FX PRO | Para obtener imágenes de rayos X para detectar el crecimiento tumoral |
| μ CT80 | Shenzhen Fraun Technology Service Co., Ltd | Scanco Medical AG, Suiza | Para la detección de la destrucción ósea. El mico-CT está equipado con 3DCalc, reconstrucción de conos, y μ Software de visualización de modelos CT Ray V3.4A. |
Referencias
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Fuchs, H. E., Jemal, A. Cancer Cancerstatistics, 2021. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (1), 7-33 (2021).
- Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimat....
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Reimpresiones y permisos
