Cirugía y pruebas conductuales en el modelo de transposición del neuroma tibial en ratas

Resumen

Este protocolo describe el modelo de transposición del neuroma tibial, que implica una lesión del nervio tibial con posterior transposición del extremo del nervio proximal hacia una posición subcutánea pretibial o lateral. Las pruebas conductuales del dolor neuroma y la hiperalgesia plantar se cuantifican utilizando monofilamentos de Von Frey.

Resumen

La transposición del neuroma tibial (TNT) es un modelo de rata en el que la alodinia en el sitio del neuroma (nervio tibial) se puede evaluar independientemente a partir de la alodinia en la superficie plantar de la pata trasera inervada por el nervio sural intacto. Este modelo de TNT es adecuado para probar terapias para el dolor del neuroma, como la superioridad potencial de ciertas terapias quirúrgicas que ya se utilizan en la clínica, o para evaluar nuevos fármacos y su efecto sobre ambas modalidades de dolor en el mismo animal. En este modelo, se produce una lesión distal (neurotmesis) en el nervio tibial, y el extremo del nervio proximal se transpone y fija por vía subcutánea y pretibial para permitir evaluaciones del sitio del neuroma con un monofilamento de Von Frey de 15 g. Para evaluar la alodinia sobre el nervio sural, los monofilamentos de Von Frey se pueden usar a través del método arriba-abajo en la región lateral plantar de la pata trasera. Después de cortar el nervio tibial, la hipersensibilidad mecánica se desarrolla en el sitio del neuroma dentro de 1 semana después de la cirugía y persiste al menos hasta 12 semanas después de la cirugía. La alodinia en la superficie plantar inervada sural se desarrolla dentro de las 3 semanas posteriores a la cirugía en comparación con la extremidad contralateral. A las 12 semanas, se forma un neuroma en el extremo proximal del nervio tibial cortado, indicado por dispersión y remolino de axones. Para la cirugía modelo TNT, se deben seguir múltiples pasos (micro) quirúrgicos críticos, y se recomienda alguna práctica quirúrgica bajo anestesia terminal. En comparación con otros modelos de dolor neuropático, como el modelo de lesión nerviosa preservada, la alodinia sobre el sitio del neuroma se puede probar de forma independiente a partir de la hipersensibilidad del nervio sural en el modelo TNT. Sin embargo, el sitio del neuroma solo se puede probar en ratas, no en ratones. Los consejos e instrucciones proporcionados en este protocolo pueden ayudar a los grupos de investigación que trabajan en el dolor a implementar con éxito el modelo TNT en sus instalaciones.

Introducción

Cada herida, que varía desde simples laceraciones hasta amputaciones de extremidades completas, se acompaña de diversos grados de lesión de nervios periféricos. Tal lesión nerviosa puede resultar en la formación de un neuroma, un enredo desorganizado de fibras nerviosas que brotan. Los neuromas se vuelven dolorosos en el 8% -30% de los pacientes, afectando gravemente su calidad de vida 1,2,3,4,5. Después de la amputación de la extremidad, el dolor del neuroma se desarrolla en el 50% ....

Protocolo

Esta investigación se realizó de acuerdo con el IVD (Instantie voor Dierenwelzijn Utrecht) y las directrices para la investigación con animales, número de proyecto AVD1150020198824.

1. Mediciones de referencia de Von Frey

1. Antes de la cirugía, realice mediciones basales de acuerdo con el procedimiento de prueba de Von Frey, descrito a continuación en las secciones 5 y 6.

2. Anestesia y preparación

NOTA: Este estudio se realizó en 15 ratas Sprague Dawley macho que tenían 12 semanas de edad.

1. Anestesiar a los animales por inducció....

Resultados

La evaluación en el sitio del neuroma mostró una mayor sensibilidad a la aplicación del monofilamento de von Frey de 15 g. Al inicio del estudio, las ratas respondieron típicamente al 10% -15% (± 13%) de las 25 aplicaciones de un monofilamento de 15 g. La tasa de respuesta aumentó a 45%-50% (± 24%) 1 semana después de la cirugía TNT. En el lado contralateral, el número de respuestas después de la cirugía fue similar al basalente (Figura 2A). Alrededor del 20% de las ratas no desarrollaron un.......

Discusión

Pasos críticos en el protocolo
El modelo TNT consiste en cortar el nervio tibial y transponerlo lateral y subcutáneamente a una ubicación pretibial para permitir pruebas de sensibilidad del neuroma, además de la hiperalgesia plantar sobre el nervio sural. En el modelo TNT, es clave que el lugar del neuroma sea visible para los investigadores. Por lo tanto, se prefiere una cepa de rata albina porque las suturas subcutáneas son fácilmente visibles a través de la piel y el color de la sutura debe ser pre.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Aesthesio	Linton Instrumentación	514007 hasta 514015	0,6 g hasta 15 g monofilamentos
Carprofeno	Farmacia Veterinaria Local	n/a	La farmacia veterinaria local hace la dilución de caprofeno
Bastoncillos de algodón	Nobamed	974255
Electrocautery Fine	Science Tools	18010-00
Etanol 70%	Interchema BV
Ethilon 4.0	Johnson & Johnson	1854G	IMPORTANTE: el color debe ser azul o negro
Ethilon 8.0	Johnson & Johnson	BV130-5
Isoflo, isoflurano Zoetis	Dechra Productos veterinarios	B506
Jaulas de fondo de malla	StoeltingCo	57816 y 57824
Micro pinzas	Fine Science Tools	11251-35
Micro soporte de agujas	Fine Science Tools	12076-12
Micro tijeras	Fine Science Tools	15019-10
Micro pinzas	Fine Science Tools	11254-20
NaCl 0.9%	Trademed	H7 1000-FRE
Portaagujas	Fine Science Tools	12004-16
Pomada oftálmica	Farmacia veterinaria local	n/a	La farmacia veterinaria local fabrica el ungüento oftálmico
Bisturí	Fine Science Tools	10003-12
Tijeras	Fine Science Tools	14001-12
Microscopio quirúrgico estereoscópico	Leica	A60 F
Hoja estéril con orificio	Evercare OneMed	1555-01
Cuchilla quirúrgica nr.15	Herramientas de Ciencias Finas	10015-00
Pinzas	Herramientas de Ciencias Finas	11617-12

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