HPLC junto con huellas dactilares químicas para el reconocimiento de múltiples patrones para identificar la autenticidad de Clematidis armandii caulis

Summary

Aquí, presentamos un protocolo para establecer la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), junto con el reconocimiento químico de huellas dactilares multipatrón, que proporciona una nueva estrategia para identificar eficazmente las variedades genuinas de Clematidis Armandii Caulis y sus adulterantes.

Abstract

Un método para identificar los materiales medicinales chinos y sus adulterantes relacionados se construyó tomando como ejemplo Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, una medicina tradicional china universalmente utilizada). Se analizaron y compararon diez lotes de variedades genuinas de Chuanmutong y cinco lotes de adulterantes relacionados con la base de las huellas dactilares de cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) combinadas con quimiometría, incluido el análisis de conglomerados (CA), el análisis de componentes principales (PCA) y el análisis ortogonal de discriminación parcial de mínimos cuadrados (OPLS-DA). Además, se determinó el contenido de β-sitosterol. Se estableció la huella dactilar química de control de Chuanmutong y se identificaron 12 picos comunes. La similitud entre la huella digital de 10 lotes de variedades genuinas de Chuanmutong y la huella digital de control fue de 0.910-0.989, mientras que la similitud de cinco lotes de adulterantes fue de solo 0.133-0.720. Sobre la base de los picos comunes en el cromatograma, 15 lotes de muestras se clasificaron en tres niveles de contenido por PCA, y se agregaron en cuatro categorías por CA, logrando una clara distinción entre Chuanmutong auténtico y adulterantes de Chuanmutong. Además, se encontraron siete componentes diferenciales que pueden identificar efectivamente Chuanmutong auténtico y adulterantes de Chuanmutong a través de OPLS-DA. El contenido de β-sitosterol de 10 lotes de variedades genuinas de Chuanmutong fue de 97.53-161.56 μg / g, mientras que el contenido de β-sitosterol de los cinco lotes de adulterantes varió mucho, entre los cuales el contenido de β-sitosterol de Clematis peterae Hand.-Mazz. y Clematis gouriana Roxb. var. finetii Rehd. et Wils. fue significativamente menor que la de las variedades auténticas de Chuanmutong. El contenido del componente del índice HPLC y el método de reconocimiento de huellas dactilares químicas de múltiples patrones establecido en este estudio proporcionan una nueva estrategia para identificar eficazmente los materiales medicinales chinos auténticos y los adulterantes relacionados.

Introduction

Chuanmutong, Caulis seco de Clematis armandii Franch. o Clematis montana Buch.-Ham., es una medicina tradicional china comúnmente utilizada en clínicas ^1,2,3. Se utiliza para tratar problemas urinarios, edema, llagas en la lengua y la boca, disminución de la secreción de leche, rigidez articular y dolor muscular causado por el calor húmedo⁴. Chuanmutong siempre se ha obtenido a partir de variedades silvestres, distribuidas principalmente en el suroeste de China, especialmente en Sichuan, donde la mejor calidad se puede encontrar

Protocol

1. Métodos de detección química de huellas dactilares

1. Condiciones cromatográficas
   1. Preparar la fase móvil acetonitrilo (A)/agua (B). Establezca un programa de degradado de la siguiente manera en el software HPLC: 0-20 min, 3%A-10%A; 20-25 min, 10%A-13%A; 25-65 min, 13%A-25%A; 65-75 min, 25%A-40%A; 75-76 min, 40%A-3%A; 76-85 min, 3%A-3%A.
   2. Mantener el caudal de la fase móvil a 1,0 mL/min.
   3. Realizar la separación cromatográfica en una columna C18 (250 mm x 4,6 mm, 5 μm) mantenida a 30 °C.
   4. Ajuste el volumen de inyección a 10 μL.
   5. Detectar las muestras a una longitud de onda de 205 nm.
      NOTA: Para....

Results

Huella cromatográfica de Chuanmutong y análisis de similitud (SA)
Los valores de RSD del tiempo de retención relativo de precisión, repetibilidad y estabilidad fueron inferiores a 0,46%, 1,65% y 0,53%, respectivamente; los valores de RSD del área pico relativa fueron inferiores a 4,23%, 3,56% y 3,96%, respectivamente. Como se muestra en las Figuras 1A, B, hubo 12 picos comunes distintos (desde el pico 1 hasta el pico 12) en las huellas dactilares de HPLC .......

Discussion

La recolección de muestras para la investigación es el primer paso clave para construir el reconocimiento de múltiples patrones en la identificación de la autenticidad de los materiales medicinales chinos. A través de la investigación de mercado, descubrimos que Sichuan Ya'an, Liangshan y Leshan son las principales áreas de producción de recursos silvestres de Chuanmutong. Las variedades relacionadas del mismo género también tienen la misma distribución geográfica ^6,20.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Ácido acético	Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China	2017381038
Acetonitrilo	Sigma-Aldrich   Trading Co., Ltd., Shanghái, China	WXBD5243V
β-Sitosterol	Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China	20210201
Columna C18	Yuexu Material Technology Co., Ltd., Shanghai, China	Welch Ultimate LP
Chuanmutong	Guoqiang Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China	19020103	CMT-1
Chuanmutong	Hongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China	200701	CMT-2
Chuanmutong	Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China	200701	CMT-3
Chuanmutong	Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China	200901	CMT-4
Chuanmutong	Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China	210701	CMT-5
Chuanmutong	Haobo Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China	210401	CMT-6
Chuanmutong	Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China	200901	CMT-7
Chuanmutong	Wusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., Sichuan, China	201201	CMT-8
Chuanmutong	Limin Piezas herbales chinas Co., Ltd., Sichuan, China	201001	CMT-9
Chuanmutong	Yuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China	210501	CMT-10
Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang	Madzi Bridge, Municipio de Sanlang, Condado de Tianquan, Sichuan, China	-	CC
Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils.	Aldea de Heilin, municipio de Qiliping, condado de Hongya, Sichuan, China	-	DC
Clematis peterae Mano.-Mazz.	Aldea de Huangmu, municipio de Huangmu, condado de Hanyuan, Sichuan, China	-	DE
Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils	Mixedang Mountain, Municipio de Huangwan, Condado de Emei, Sichuan, China	-	XS
Clematis finetiana Levl. et Vaniot.	Aldea de Wannian, municipio de Huangwan, condado de Emei, Sichuan, China	-	Balanza electrónica SMT
	Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Shanghai,   China	FA1204
Ergosterol	Meisai Biological Technology Co., Ltd, Chongqing, China	20210201
Etanol	Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China	2021112602
Acetato de etilo	Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China	2017042043
Ácido fórmico	Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China	2016062901
Cromatografía líquida de alta resolución	Agilent, EE. UU.	1260
IBM SPSS Statistics versión 26.0	International Business Machines Corporation, USA-Methanol
	Sigma-Aldrich  Trading Co., Ltd., Shanghái, China	WXBD6409V
Metanol	Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China	202010302
Alcohol n-butílico	Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China	2020071047
Éter de petróleo	Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China	2020090125
Ácido fosfórico	Comeo Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China	20200110
SESCF-TCM versión 2012	Comisión Nacional de la Farmacopea,	China-http://114.247.108.158:8888/login
Estigmasterol	Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China	20210201
Triclorometano	Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., Shanghai, China	20200214
Umetrics Versión SIMCA 14.1.0.2047	Umetrics,	Suecia-https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-download Máquina de
agua ultrapura	Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd., Sichuan, China	UPH-II-10T
Limpiador ultrasónico	Kunshan Hechuang Ultrasound Instrument Co., Ltd., Jiangsu, China	KH3200E