En este estudio, un modelo de rata de inducción de periodontitis se presenta a través de una combinación de ligadura retentiva e inyecciones repetitivas de lipopolisacárido derivado de Porphyromonas gingivalis, durante 14 días alrededor de los primeros molares maxilares. Las técnicas de ligadura e inyección de LPS fueron efectivas para inducir peridontitis, lo que resultó en pérdida ósea alveolar e inflamación.
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Artículo de método
Inducción de periodontitis mediante una combinación de ligadura e inyección de lipopolisacáridos en un modelo de rata
En este artículo
Resumen
Resumen
La periodontitis (EP) es una enfermedad inmunoinflamatoria crónica altamente prevalente del periodonto, que resulta en una pérdida de tejido blando gingival, ligamento periodontal, cemento y hueso alveolar. En este estudio, se describe un método simple de inducción de EP en ratas. Proporcionamos instrucciones detalladas para la colocación del modelo de ligadura alrededor de los primeros molares maxilares (M1) y una combinación de inyecciones de lipopolisacárido (LPS), derivado de Porphyromonas gingivalis en el lado mesio-palatino del M1. La inducción de periodontitis se mantuvo durante 14 días, promoviendo la acumulación de biofilm bacteriano y la inflamación. Para validar el modelo animal, la IL-1β, un mediador inflamatorio clave, se determinó mediante un inmunoensayo en el líquido crevicular gingival (GCF), y la pérdida ósea alveolar se calculó mediante tomografía computarizada de haz cónico (CBCT). Esta técnica fue efectiva para promover la recesión gingiva, la pérdida ósea alveolar y un aumento en los niveles de IL-1β en el GCF al final del procedimiento experimental después de 14 días. Este método fue eficaz para inducir la EP, pudiendo así ser utilizado en estudios sobre mecanismos de progresión de la enfermedad y posibles tratamientos futuros.
Introducción
La periodontitis (EP) es la sexta condición de salud pública más prevalente a nivel mundial, afectando aproximadamente al 11% de la población total, siendo una forma avanzada, irreversible y destructiva de enfermedad periodontal 1,2. La EP es un proceso inflamatorio que afecta los tejidos gingival y periodontal, lo que resulta en recesión gingiva, migración apical del epitelio de unión con desarrollo de bolsas y pérdida de hueso alveolar3. Además, la EP está asociada a varias enfermedades sistémicas, como enfermedades cardiovasculares, obesidad, diabetes y artritis reumatoide, para las ....
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Protocolo
NOTA: El protocolo experimental del estudio fue aprobado por el Comité Ético de Experimentación Animal del Instituto de Investigación Sanitaria de las Islas Baleares (CEEA-UIB; número de referencia 163/03/21).
1. Anestesia animal y preparación del procedimiento
- Esterilice todos los instrumentos quirúrgicos (mordazas bucales de aluminio, explorador dental, lanza de diamante, tijeras quirúrgicas, alicates microquirúrgicos, un portaagujas, un tallador de hollenback, un elevador microquirúrgico perióstico y tijeras microquirúrgicas) (5 min a 135 °C) antes de la cirugía.
- Preparar todas las soluciones necesari....
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Resultados
En la Figura 1 se presenta una línea de tiempo de los pasos experimentales. La Figura 2A muestra una imagen de la mandibula, después de la intervención quirúrgica, con colocación de ligaduras alrededor del surco del M1 en el momento 0 del experimento. La Figura 2B muestra cómo, después de 14 días del procedimiento, la ligadura alrededor del M1 ingresa al surco gingival, causando inflamación de la encía y acumulación infiltrante.
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Discusión
Este método describe la inducción de DP en ratas siguiendo una técnica combinada de inyecciones de Pg-LPS y colocación de ligaduras alrededor del M1, revelando que se podrían inducir cambios significativos en los tejidos periodontales y el hueso alveolar en 14 días después de este método.
Durante este procedimiento, se debe prestar atención a diferentes pasos críticos. Durante la anestesia animal y la preparación del procedimiento, evaluar la anestesia adecuada durante el proceso quir.......
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Divulgaciones
Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses.
Agradecimientos
Este trabajo ha contado con el apoyo de la Fundació Universitat-Empresa de les Illes Balears (convocatoria Prueba de concepto 2020), del Instituto de Salud Carlos III, Ministerio de Economía y Competitividad, cofinanciado por el Fondo Social Europeo del FSE y el Fondo Europeo de Desarrollo Regional FEDER (contrato con M.M.B; FI18/00104) y por la Direcció General d'Investigació, Conselleria d'Investigació, Govern Balear (contrato con M.M.F.C; FPI/040/2020). Los autores agradecen a la Dra. Anna Tomás y María Tortosa su ayuda en la cirugía experimental y plataforma de IdISBa. Finalmente, gracias a la Facultad de Odontología de ADEMA por el acceso al escáner CBCT.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Punto de papel adsorbente m ordm; 30 | Proclinc | 8187 | |
| Aprotinin | Sigma-Aldrich | A1153 | |
| Atipamezol | Dechra | 573751.5 | Revanzol 5 mg/mL |
| Ligadura de seda trenzada (5/0) | Laboratorio Arago Sl | 613112 | |
| Buprenorfina | Richter pharma | 578816.6 | Bupaq 0.3 mg/mL |
| Escáner de tomografía computarizada de haz cónico (CBCT) | MyRay | hyperion X9 | Modelo Hyperion X9 |
| CTAn software | SkyScan | Versión 1.13.4.0 | |
| Dental explorer | Proclinc | 99743 | |
| Fresa en forma de lanza de diamante; | Dentaltix | IT21517 | |
| Dieta de mantenimiento de alimentos | Sodispain | ROD14 | |
| Plataforma quirúrgica calefactada | PetSavers | ||
| Hollenback carver | Hu-FRIEDY | ||
| Aguja hipodérmica | BD | 300600 | 25G x 5/8" - 0,5 x 16 MM |
| Isoflurano | Karizoo | Isoflutek 1000mg/g | |
| Ketamina | Dechra | 581140.6 | Anesketin 100 mg/mL |
| Lipopolisacárido derivado de P.Gingivalis | InvivoGen | TLRL-PGLPS | |
| Metanol | Fisher Scientific M | /4000/PB08 | |
| Micro aguja holter | Fehling Surgical Instruments | KOT-6 | |
| Alicates microquirúrgicos | KLS Martin | 12-384-06-07 | |
| tijeras microquirúrgicas | S& T instrumental microquirúrgico | SDC-15 RV | |
| Monitor iMEC 8 Vet | Mindray | ||
| Inmunoensayo de perlas multiplex | Procartaplex, Thermo fisher Scientific | PPX-05 | |
| Paraformaldehído (PFA) | Sigma-Aldrich | 8187151000 | |
| Elevador microquirúrgico perióstico | Dentaltix | CU19112468 | |
| fenilmetilsulfonilo fluoruro (PMSF) | Roche | 10837091001 | |
| Solución tampón de fosfato (PBS) | Capricorn Scientific | PBS-1A | |
| PhosSTOP | Roche | 4906845001 | Comprimido comercial de inhibidor de la fosfatasa |
| Frasco de plástico | SPL Lifesciencies | 60015 | 1.5mL |
| solución salina | Cinfa | 204024.3 | |
| Microscopio estereoscópico | Zeiss | Model SteREO Discovery.V12 | |
| Lupas quirúrgicas led light | Zeiss | ||
| Tijeras quirúrgicas | Zepf Surgical | 08-1701-17 | |
| Jeringa | BD plastipak | 303172 | 1mL |
| Micromotor dental veterinario | Eickemeyer | 174028 | |
| Xilacina | Calier | 20102-003 | Xilagesic 20 mg/mL |
Referencias
- Carvalho, J. D. S., et al. Impact of citrus flavonoid supplementation on inflammation in lipopolysaccharide-induced periodontal disease in mice. Food and Function. 12 (11), 5007-5017 (2021).
- Nazir, M. A.
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Reimpresiones y permisos
