Artículo de método

Disección de ratones del sistema nervioso central y periférico completo

DOI:

10.3791/64974

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24 de febrero de 2023

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1Department of Biochemistry and Functional Genomics, Université de Sherbrooke, 2Department of Dermatology, University of Texas Southwestern Medical Center at Dallas, 3Department of Pathology, Université de Sherbrooke, 4Centre de Recherche du Centre Hospitalier de Universitaire de Sherbrooke, Université de Sherbrooke, 5Simmons Comprehensive Cancer Center, University of Texas Southwestern Medical Center at Dallas, 6UTSW Comprehensive Neurofibromatosis Clinic, University of Texas Southwestern Medical Center at Dallas, 7Hamon Center for Regenerative Science and Medicine, University of Texas Southwestern Medical Center at Dallas

* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

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Aquí, presentamos un protocolo para completar la disección de los sistemas nerviosos central y periférico de ratones. Los tejidos disecados se analizan más a fondo en aplicaciones posteriores, como la toma de imágenes macroscópicas o la histología.

Resumen

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Los modelos animales representan el caballo de batalla del campo de la neurociencia. A pesar de esto, hoy en día, todavía no existe un protocolo paso a paso para diseccionar un sistema nervioso completo de roedores, ni existe un esquema completo que lo represente y que esté disponible libremente. Solo se dispone de métodos para extraer el cerebro, la médula espinal, un ganglio específico de la raíz dorsal y el nervio ciático (por separado). Aquí, proporcionamos imágenes detalladas y un esquema del sistema nervioso murino central y periférico. Más importante aún, describimos un procedimiento sólido para realizar su disección. El paso de predisección de 30 minutos permite aislar el sistema nervioso intacto dentro de la vértebra con músculos libres de vísceras y piel. A continuación, se realiza una disección de 2 a 4 horas bajo un microscopio de disección para exponer la médula espinal y los nervios torácicos, y finalmente despegar todo el sistema nervioso central y periférico de la canal. Este protocolo representa un importante avance en el estudio de la anatomía y fisiopatología del sistema nervioso a nivel global. Por ejemplo, los ganglios de la raíz dorsal disecados de un modelo de ratones con neurofibromatosis tipo I se pueden procesar posteriormente para la histología a fin de desentrañar los cambios en la progresión tumoral.

Introducción

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El objetivo general de este método es aislar el sistema nervioso central y periférico de un ratón en una sola pieza. Actualmente no existe un protocolo para diseccionar todo el sistema nervioso de un roedor para estudiarlo a nivel global. Los neurocientíficos suelen utilizar el nervio ciático como sustituto de cualquier nervio periférico1, y los ganglios L3 a L52 como sustituto de cualquier ganglio. Con estos métodos, es imposible concluir si los resultados son específicos para el nervio o ganglio en particular. Como se sabe que al menos algunas patologías nerviosas no afectan a todos lo....

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Protocolo

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Los protocolos utilizados en este estudio han sido aprobados por el Comité Institutionnel des Animaux de l'Université de Sherbrooke, una institución certificada por el Consejo Canadiense de Cuidado Animal.

1. Preparación para la microdisección (predisección)

  1. Realizar anestesia con isoflurano al 5%, seguida de eutanasia con isoflurano al 2% y 10 psi de CO2 hasta que no haya signos vitales.
    NOTA: No realice luxación cervical, ya que esto daña la médula espinal y los ganglios cervicales.
  2. Coloque el ratón sacrificado boca arriba (vista anterior) sobre una alm....

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Resultados

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Los roedores han sido fundamentales para nuestra comprensión de la biología y la fisiopatología del sistema nervioso10. Curiosamente, ningún método presenta la disección completa del sistema nervioso central y periférico de un roedor para evaluar la anatomía y la variación patológica en un modelo en tiempo real 1,2,11. La Figura 1 presenta una descripción general de los pasos.......

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Discusión

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Para evitar que los músculos y los nervios se sequen, la carcasa debe remojarse en PBS cada 10 minutos. Al dislocar las extremidades inferiores (paso 1.12.6), es importante tener siempre a la vista el plexo del nervio ciático y la L2 para evitar dañarlo/desgarrarlo. Al diseccionar el cerebro (paso 1.14.4), es fundamental evitar profundizar demasiado para no dañar el cerebro. Al diseccionar los ganglios de la raíz dorsal y los nervios periféricos en general, es fundamental utilizar minipi.......

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Divulgaciones

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Los autores declararon no tener conflictos de intereses.

Agradecimientos

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JPB es un becario de investigación FRSQ J1 y recibió el Premio de Investigación de Investigadores Tempranos del Departamento de Defensa de los Estados Unidos. LQL tiene un Premio a la Carrera para Científicos Médicos del Burroughs Wellcome Fund y la Cátedra Thomas L. Shields, M.D. en Dermatología.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Mini-pinzas DumontFine Science Tools#11200-10
Tijeras Bonn ExtraFine Science Tools#14084-08
Formalina 10%Fischer Scientific#22-046-361
PBS 1xBioShopCanada#PBS404.500
Pinzas anatómicas estándarFine Science Tools#91100-12
Tijeras quirúrgicasFine Science Tools#140001-12
Tijeras de resorte VannasKent Scientific#INS600124

Referencias

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  1. Bala, U., Tan, K. L., Ling, K. H., Cheah, P. S. Harvesting the maximum length of sciatic nerve from adult mice: a step-by-step approach. BMC Reserach Notes. 7, 714(2014).
  2. Sleigh, J. N., Weir, G. A., Schiavo, G. A simple....

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