Este protocolo proporciona un método rápido para determinar la compatibilidad e incompatibilidad del polen en cultivares de cítricos.
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Artículo de método
Determinación de las relaciones de autocompatibilidad e intercompatibilidad en cítricos mediante polinización manual, microscopía y análisis de genotipo S
En este artículo
Resumen
Resumen
Los cítricos utilizan la autoincompatibilidad basada en S-RNasa para rechazar el autopolen y, por lo tanto, requieren árboles polinizadores cercanos para una polinización y fertilización exitosas. Sin embargo, la identificación de variedades adecuadas para servir como polinizadores es un proceso que requiere mucho tiempo. Para resolver este problema, hemos desarrollado un método rápido para identificar cultivares de cítricos compatibles con la polinización que utiliza electroforesis en gel de agarosa y tinción de azul de anilina. La compatibilidad del polen se determina en función de la identificación de genotipos S mediante la extracción de ADN total y la realización de ensayos de genotipado basados en PCR con cebadores específicos. Además, los estilos se recolectan 3-4 días después de la polinización manual y se realiza la tinción de azul de anilina. Finalmente, el estado de crecimiento de los tubos polínicos se observa con un microscopio de fluorescencia. La compatibilidad e incompatibilidad del polen se puede establecer observando si el crecimiento del tubo polínico es normal o suprimido, respectivamente. Debido a su simplicidad y rentabilidad, este método es una herramienta eficaz para determinar la compatibilidad e incompatibilidad del polen de diferentes variedades de cítricos para establecer grupos de incompatibilidad y relaciones de incompatibilidad entre diferentes cultivares. Este método proporciona información esencial para la selección exitosa de árboles polinizadores adecuados y, por lo tanto, facilita el establecimiento de nuevos huertos y la selección de padres apropiados para los programas de reproducción.
Introducción
La autoincompatibilidad (IS) es un mecanismo genéticamente controlado presente en aproximadamente el 40% de las especies de angiospermas. En este proceso, el pistilo rechaza el polen de una planta con el mismo genotipo SI y, por lo tanto, impide la autofertilización 1,2. Ma jia pummelo es una variedad local en la provincia de Jinagsu, China, con las excelentes cualidades de fruta grande y rosada, un rico contenido de jugo, un sabor agridulce y una cáscara gruesa3. Aunque la IS promueve el cruzamiento, afecta negativamente el rendimiento y la calidad de las frutas4
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Protocolo
1. Preparación para la tinción de azul de anilina
- Prepare los siguientes reactivos y herramientas para el experimento: un pincel polinizador, pinzas, un lápiz, papel sulfato, una bolsa de polinización, bolsas con cierre hermético, clips, formaldehído, ácido acético glacial, etanol absoluto, tubos de centrífuga, pinzas, goteros de pegamento, portaobjetos, cubreobjetos, bisturís y polietilenglicol.
- Preparar un medio de germinación in vitro que contenga 0,02% de MgSO4, 0,01% KNO 3, 0,03% de Ca(NO 3)2, 0,01% deH3 BO 3, 20% de PEG-4000 y 15% de sacarosa. Ajuste e....
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Resultados
Para los experimentos realizados aquí, se seleccionaron flores maduras, se recolectaron las anteras, se secaron en un horno y el polen se germinó a 28 ° C durante 12 h. La viabilidad del polen y las tasas de germinación se cuantificaron como se muestra en la Figura 1.
Los cítricos se polinizaron manualmente, y la compatibilidad e incompatibilidad del polen se evaluó mediante tinción de azul de anilina y microscopía de fluorescencia. El polen compatible podría germ.......
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Discusión
En los cultivos frutales, tanto la partenocarpia como la IS son rasgos importantes porque allanan el camino para las frutas sin semillas, un rasgo muy apreciado por los consumidores. La autoincompatibilidad promueve el rechazo del autopolen y, por lo tanto, previene la endogamia20. Entre los cítricos, el pummelo es una variedad autoincompatible7. Casi el 40% de todas las especies de angiospermas exhiben SI21. Este rasgo evita el cuajado de la fruta, .......
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Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este proyecto fue apoyado financieramente por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (32122075, 32072523).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| etanol absoluto | Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd | 10009218 | |
| azul de anilina | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | ||
| Ácido bórico, H3BO3 | Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd | 10004818 | |
| botella marrón | Labgic Technology Co., Ltd | ||
| Nitrato de calcio tetrahidrato, Ca(NO3 )2 | Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd | 80029062 | |
| Tubo centrífugo | Labgic Technology Co., Ltd | ||
| tubos de centrífuga | Labgic Technology Co., Ltd | ||
| CTAB | GEN-VIEW SCIENTIFIC INC | 57-09-0(CAS) | |
| Caída | Jiangsu Songchang Medical Equipment Co., Ltd | ||
| Ácido etilendiaminotetraacético, EDTA | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | Pinzas de 10009617 | |
| LUXIANZI Biotechnology Co., Ltd | |||
| formaldehído | Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd | 10010018 | |
| Molino rápido de muestras totalmente automático | Shanghai Jingxin Industrial Development Co., Ltd | Tissuelyser-96 | |
| ácido | acético glacialSinopharm Chemical ReagentCo., Ltd | 10000218 | |
| Tubo de molienda | Shanghai Jingxin Industrial Development Co., Ltd | ||
| Alcohol isoamílico | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 10003218 | |
| Alcohol isopropílico | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 80109218 | |
| etiqueta | M& G Chenguang Papelería Co., Ltd. | ||
| Leica DMi8 | Shanghái Leica Co., Ltd | 21903797 | |
| Sulfato de magnesio heptahidratado, MgSO4 | Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd | 10013018 | |
| MICROSCOPIO Cubierta de vidrio | Zhejiang Shitai Industrial Co., Ltd | ||
| NaCl | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 10019318 | |
| clips | M& G Chenguang Papelería Co., Ltd. | ||
| lápiz | M& G Chenguang Papelería Co., Ltd. | ||
| cepillo polinizador | Shanghai Yimei Plastics Co., Ltd | ||
| Polietilenglicol, PEG 6000 | Beijing Dingguo Changsheng Biotechnology Co., Ltd | DH229-1 | |
| Polietilenglicol, PEG-4000 | Guangzhou saiguo biotech Co., Ltd | 1521GR500 | |
| Hidróxido de potasio, KOH | Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd | 10017008 | |
| Nitrato de potasio, KNO3 | Sinopharm Reactivo químicoCo., Ltd | 10017218 | |
| Bisturí | Jiangsu Songchang Equipo médico Co., Ltd | ||
| Portaobjetos | Zhejiang Shitai Industrial Co., Ltd | ||
| Hidróxido de sodio, NAOH | Sinopharm Reactivo químico Co., Ltd | 10019718 | |
| Sacarosa | Sinopharm Reactivo químicoCo., Ltd | ||
| papel de sulfato | Taizhou Jinnong Termostato de malla de fábrica | ||
| agua | Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co., Ltd | L-909193 | |
| Triclorometano | Sinopharm Reactivo químico Co., Ltd | 10006818 | |
| Fosfato tripotásico tribásico trihidratado, K3PO4 | Shanghai Lingfeng Reactivo químico Co., Ltd | 20032318 | |
| Tris-HCl | GEN-VIEW SCIENTIFIC INC | 1185-53-1 | |
| bolsas con cierre hermético | M& G Chenguang Papelería Co., Ltd. | ||
| β-Mercaptoetanol | GEN-VIEW SCIENTIFIC INC | 60-24-2(CAS) |
Referencias
- Matsumoto, D., Tao, R. Recognition of S-RNases by an S locus F-box like protein and an S haplotype-specific F-box like protein in the Prunus-specific self-incompatibility system. Plant Molecular Biology. 100 (4-5), 367-378 (2019).
- Goldberg, E. E., et al.
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Reimpresiones y permisos
