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Artículo de método

Uso de nicotina en un modelo de ratón expuesto a sílice para promover la transición epitelio-mesenquimal pulmonar

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DOI:

10.3791/65127

3 de marzo de 2023

* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Este estudio describe un modelo de ratón para estudiar el efecto sinérgico de la nicotina en la progresión de la fibrosis pulmonar en ratones experimentales de silicosis. El modelo de ratón de doble exposición simula la progresión patológica en el pulmón después de la exposición simultánea a la nicotina y la sílice. Los métodos descritos son simples y altamente reproducibles.

Resumen

El tabaquismo y la exposición a la sílice son comunes entre los trabajadores ocupacionales, y es más probable que la sílice dañe los pulmones de los fumadores que de los no fumadores. El papel de la nicotina, el principal ingrediente adictivo de los cigarrillos, en el desarrollo de la silicosis no está claro. El modelo de ratón empleado en este estudio fue simple y fácil de controlar, y simuló eficazmente los efectos de la ingestión crónica de nicotina y la exposición repetida a la sílice sobre la fibrosis pulmonar a través de la transición epitelio-mesénquima en seres humanos. Además, este modelo puede ayudar en el estudio directo de los efectos de la nicotina sobre la silicosis y evitar los efectos de otros componentes en el humo del cigarrillo.

Después de la adaptación ambiental, los ratones fueron inyectados por vía subcutánea con 0,25 mg/kg de solución de nicotina en la piel suelta sobre el cuello todas las mañanas y noches a intervalos de 12 h durante 40 días. Además, el polvo de sílice cristalina (1-5 μm) se suspendió en solución salina normal, se diluyó hasta obtener una suspensión de 20 mg/ml y se dispersó uniformemente mediante un baño de agua ultrasónico. Los ratones anestesiados con isoflurano inhalaron 50 μL de esta suspensión de polvo de sílice a través de la nariz y fueron despertados mediante un masaje torácico. La exposición a sílice se administró diariamente en los días 5-19.

El modelo de ratón de doble exposición fue expuesto a nicotina y luego a sílice, lo que coincide con el historial de exposición de los trabajadores que están expuestos a ambos factores nocivos. Además, la nicotina promovió la fibrosis pulmonar a través de la transformación epitelio-mesenquimal (EMT) en ratones. Este modelo animal se puede utilizar para estudiar los efectos de múltiples factores en el desarrollo de la silicosis.

Introducción

La exposición a la sílice en los trabajadores es inevitable en algunos entornos ocupacionales, y una vez expuestos a la sílice, el deterioro progresa incluso después de la eliminación del medio ambiente. Además, la mayoría de estos trabajadores fuman, y los cigarrillos tradicionales contienen miles de sustancias químicas, siendo el principal componente adictivo la nicotina. Los cigarrillos electrónicos se están volviendo cada vez más populares en los grupos de edad más jóvenes2; Estos cigarrillos electrónicos actúan como un sistema de administración de nicotina y aumentan el acceso a la nicotina, lo que aumenta la suscep....

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Protocolo

Todos los procedimientos se llevaron a cabo de acuerdo con las pautas emitidas por la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio de los Institutos Nacionales de Salud (la 8ª edición del NRC) y fueron aprobados por el Comité de Ética Animal de la Universidad de Ciencia y Tecnología de Anhui.

1. Preparación animal

  1. Aloja 32 ratones machos C57/BL6 de 8 semanas de edad en un laboratorio con un ciclo de luz/oscuridad de 12 h. Asegúrese de que los ratones tengan libre acceso a comida y agua.
  2. Después de 2 semanas de aclimatación al medio ambiente, cuando los ratones de 10 semanas de edad pesan entre 2....

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Resultados

Se estableció un modelo de ratón para estudiar la nicotina combinada con la exposición a la sílice para investigar el papel potencial de la nicotina en la progresión de la silicosis en ratones. La Figura 1 muestra el procedimiento experimental para utilizar un modelo de ratón de doble exposición, que combinó una inyección de nicotina con la instilación nasal de una suspensión de sílice. Los cambios patológicos de los ratones de cada grupo se observaron mediante tinción HE. Los ratones expues.......

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Discusión

Es necesario un modelo animal de doble exposición para investigar el papel y los posibles mecanismos de la exposición simultánea a la nicotina y al dióxido de silicio cristalino. Este modelo se logró en este trabajo a través de la inyección subcutánea de nicotina y el goteo nasal de sílice. Para garantizar el éxito de la inyección de nicotina, el operador debe familiarizarse con el agarre de los ratones, ya que agarrar la piel de la parte posterior del cuello podría ser doloroso para ellos. Por lo tanto, es importante pe.......

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Divulgaciones

Todos los autores declaran no tener conflictos de intereses.

Agradecimientos

Este estudio contó con el apoyo del Programa de Innovación de Sinergia Universitaria de la Provincia de Anhui (GXXT-2021-077) y el Fondo de Innovación de Posgrado de la Universidad de Ciencia y Tecnología de Anhui (2021CX2120).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Fijador neutro de formalina al 10%Nanchang Yulu Experimental Equipment Co.
desinfectante de alcoholXintai Kanyuan Productos de desinfección Co.
BSA, Fracción VBeyotime BiotechnologyST023-200g
CD206 Anticuerpo monoclonalProteintech60143-1-IG
Solución de recuperación de antígeno de citratobiosharp ciencias de la vidaBL619A
dimetilbencenoquímica de Asia Occidental (Shandong) Co
Kitde ensayo de proteínas BCA mejoradoBeyotime BiotechnologyP0009
GAPDH Anticuerpo policlonalProteintech10494-1-AP
Hematoxilina y eosina (H& E)Beyotime BiotechnologyC0105S
Sustrato HRPMillipore CorporationP90720
HRP-conjugado Affinipure Goat Anti-Mouse IgG(H+L)ProteintechSA00001-1
HRP-conjugado Affinipure Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)ProteintechSA00001-2
ImmPACT[R] DAB EqV Peroxidasa (HRP)Sustrato Vector LaboratoriosSK-4103-100
Kit de tinción tricrómico de MassonSolarbioG1340
MetanolMacklin
NicotinaSigmaN-3876
salina tamponada con fosfato (PBS) BiosharpBL601A
Solución salina fisiológica El Primer Hospital Popular de la ciudad
PMSFBeyotime BiotecnológicoST505
Microscopio de fluorescencia positivaOlympusCorporationBX53 + DP74
Peso molecular de proteína de color preteñido  Rotulador, o color preteñido escalera de proteínasBeyotime BiotechnologyP0071
Membranas de PVDFMillipore3010040001
tampón de lisis RIPABeyotime BiotechnologyP0013B
SDS-PAGE kit de preparación de gelBeyotime BiotechnologyP0012A
Dióxido de silicioSigma#BCBV6865
TGF- y beta;Biossbs-0086R
Vimentina Anticuerpo policlonalProteintech10366-1-AP
strong>Nombre del material/equipoNúmero de catálogo deempresaTubo
0,5 mLBiosharpBS-05-M
Baño de metal termostático oscilatorio Máquina
Precisión (Changzhou) Equipo Médico Co.PBM-A
Rebanadora de parafinaJinhua Kratai Instruments Co.
PipetasEppendorf
Microscopio de luz polarizadaOlympusBX51
Balanza de precisiónAcculabALC-110.4
RODI IOT sistema de purificación de agua multifuncional inteligenteRSJRODI-220BN
Scilogex SK-D1807-E Agitador 3DScilogex
Pequeño máquina de anestesia animalAnhui Yaokun Biotech Co., Ltd.ZL-04A Puntas
de pipeta universalesKIRGENKG1011
Puntas de pipeta universalesKIRGENKG1212
Puntas de pipeta universalesKIRGENKG1313
Vortex  Mezcladores VWR
strong>Nombre del material/equipo
Adobe Illustrator
ImageJ
Photoshop
Prism7.0
Tecnología solución de Huainan< la de de inclusión de parafina Abson <

Referencias

  1. Wonnacott, S. Presynaptic nicotinic ACh receptors. Trends in Neurosciences. 20 (2), 92-98 (1997).
  2. Berry, K., et al. Association of electronic cigarette use with subsequent initiation of tobacco cigarettes in US youths. JAMA Network Open.

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Reimpresiones y permisos

Etiquetas

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