Este protocolo presenta un sistema optimizado de bioensayo de hojas sueltas para evaluar la efectividad de hongos entomopatógenos (EPF) contra el pulgón de la mostaza (Lipaphis erysimi (Kalt.)), un insecto partenogenético. El método describe el proceso de recopilación de datos durante los experimentos con placas de Petri, lo que permite a los investigadores medir de manera consistente la virulencia de EPF contra pulgones de la mostaza y otros insectos partenogenéticos.
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Artículo de método
Evaluación del efecto afidicida de hongos entomopatógenos contra insectos partenogenéticos, pulgón de la mostaza, Lipaphis erysimi (Kalt.)
En este artículo
Resumen
Resumen
El pulgón de la mostaza (L. erysimi) es una plaga que infesta varios cultivos crucíferos y transmite virus de plantas. Para lograr un manejo ecológico de plagas, los hongos entomopatógenos (EPF) son agentes potenciales de control microbiano para controlar esta plaga. Por lo tanto, es necesario realizar un cribado de virulencia de los aislados de EPF en condiciones de placa de Petri antes de la aplicación en campo. Sin embargo, el pulgón de la mostaza es un insecto partenogenético, lo que dificulta el registro de datos durante los experimentos con placas de Petri. Para abordar este problema, se desarrolló un sistema modificado para bioensayos de hojas separadas, utilizando un micropulverizador para inocular conidios en pulgones y evitar ahogamientos al facilitar el secado al aire después de la suspensión de esporas. El sistema mantuvo una alta humedad relativa durante todo el período de observación, y el disco foliar permaneció fresco durante más de diez días, lo que permitió la reproducción partenogenética de los pulgones. Para evitar la acumulación de crías, se implementó un proceso de eliminación diaria con un pincel para pintar. Este protocolo demuestra un sistema estable para evaluar la virulencia de los aislados de EPF contra pulgones de la mostaza u otros pulgones, lo que permite la selección de aislados potenciales para el control de pulgones.
Introducción
El pulgón de la mostaza (L. erysimi) es una plaga notoria que infesta una variedad de cultivos crucíferos, causando importantes pérdidas económicas1. Si bien se han recomendado varios insecticidas sistemáticos para combatir las infestaciones de pulgones, el uso frecuente de estos insecticidas plantea preocupaciones sobre la resistencia a los plaguicidas 2,3. Por lo tanto, en términos de manejo ecológico de plagas, los hongos entomopatógenos (EPF) podrían servir como una estrategia de control alternativa adecuada. El EPF es un patógeno de insectos con la capacidad de infectar a ....
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Protocolo
NOTA: El diagrama de flujo completo se muestra en la Figura 1.
1. Recolección y mantenimiento del pulgón de la mostaza
- Recolección de pulgones de la mostaza
- Voltee las hojas y verifique visualmente si hay infestación de pulgones de la mostaza en los cultivos crucíferos en el campo.
- Registre la información del sitio de muestreo (es decir, GPS) y la(s) planta(s) huésped(es), y confirme el historial de aplicaciones de insecticidas con los agricultores.
- Use un aspirador de insectos o un pincel fino para pintar (consulte la Tabla de materiales)....
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Resultados
El diagrama de flujo presentado ilustra la condición estable de los pulgones de la mostaza desde la recolección en el campo hasta el cribado de virulencia. El mantenimiento de pulgones procedentes de la recolección en campo garantizó un aumento estable de las colonias de pulgones con un suministro adecuado de alimentos. Los pulgones recolectados en el campo se confirmaron como pulgones de la mostaza mediante el uso de marcadores moleculares, incluido el tamaño del amplicón de PCR y la secuenciación de LeCO1. El cribado d.......
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Discusión
Las crucíferas, un grupo de hortalizas, suelen estar infestadas por múltiples especies de pulgones, como el pulgón de la mostaza (L. erysimi) y el pulgón de la col (Brevicoryne brassicae)26. Ambas especies han sido reportadas en Taiwán27, y es posible que coexistan en el sitio de recolección. Para distinguir especies de pulgones estrechamente relacionadas, este estudio empleó una técnica de identificación molecular utilizando un juego de cebadores multiple.......
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Divulgaciones
Los autores declaran que no existe ningún conflicto de intereses en este trabajo.
Agradecimientos
Esta investigación fue apoyada por 109-2313-B-005-048-MY3 del Ministerio de Ciencia y Tecnología (MOST).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 10 μ L Asa de inoculación | NEST Scientific | 718201 | |
| 100 bp DNA Ladder III | Geneaid | DL007 | |
| 2x SuperRed PCR Master Mix | Biotools | TE-SR01 | |
| 50 mL tubo de centrífuga | Bioman Scientific | ET5050-12 | |
| 6 cm Placa de Petri | Alpha Plus Scientific | 16021 | |
| 6 mm aspirador de insectos | MegaView Science | BA6001 | |
| Papel de filtro de 70 mm NO.1 | Toyo Roshi Kaisha | ||
| 70% etanol | |||
| 9 cm Placa de Petri | Alpha Plus Scientific | 16001 | |
| Agar | Bioman Scientific | AGR001.1 | Grado de microbiología |
| Agarosa | Bioman Scientific | PB1200 | |
| BioGreen Tampón de gel de ADN seguro | Bioman Scientific | SDB001T | |
| Chromas | Technelysium | ||
| GeneDoc | |||
| GenepHlow Kit de gel/PCR | Geneaid | DFH300 | https://www.geneaid.com/data/files/1605861013102532959.pdf |
| Gene-Spin Kit de aislamiento de ADN genómico | Protech Technology | PT-GD112-V3 | http://www.protech-bio.com/UserFiles/file/Gene-Spin%20Genomic%20DNA%20Kit.pdf |
| Hemocitómetro | Paul Marienfeld | 640030 | |
| Hojas de Komatsuna (Brassica rapa var. perviridis) | Tai Cheng Farm | 1-010-300410 | |
| Micropulverizador | |||
| MiniAmp Termociclador | Thermo Fisher Scientific | A37834 | |
| Pulgón de la mostaza (Lipaphis erysimi) | |||
| Pincel para pintar | Tian Cheng brush company | 4716608400352 | |
| Parafilm M | Bemis | PM-996 | |
| Mortero de pellets | Bioman Scientific | GT100R | |
| Sabouraud Caldo de dextrosa | HiMedia | MH033-500G | |
| SPSS Estadísticas | IBM | ||
| TAE buffer 50x | Bioman Scientific | TAE501000 | |
| Tween 80 | PanReac AppliChem | 142050.1661 |
Referencias
- Ghosh, S., Roy, A., Chatterjee, A., Sikdar, S. R. Effect of regional wind circulation and meteorological factors on long-range migration of mustard aphids over indo-gangetic plain. Scientific Reports. 9, 5626(2019).
- Dhillon, M. K., Singh, N., Yadava, D. K.
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Reimpresiones y permisos
