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Características de los cambios en el dolor en ratas con lesión nerviosa dentro de las 24 horas posteriores a la intervención única con Tuina

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DOI:

10.3791/65593

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26 de enero de 2024

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1School of Acupuncture-Moxibustion and Tuina, Beijing University of Chinese Medicine, 2Beijing Hospital

En este artículo

Resumen

Presentamos un protocolo utilizando el simulador de manipulación de tuina para realizar la terapia de tuina "Three-Manipulation and Three-Acupoint" para ratas con lesiones crónicas menores por constricción y evaluar los puntos de tiempo analgésicos efectivos de tuina dentro de las 24 h mediante la prueba de los cambios en el dolor a través del análisis del comportamiento y los cambios en la expresión del factor inflamatorio utilizando un ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas.

Resumen

Se ha demostrado que la tuina, como método de tratamiento externo de la medicina tradicional china, tiene un efecto analgésico sobre el dolor neuropático periférico (pNP) en investigación clínica y básica. Sin embargo, el momento óptimo para el efecto analgésico de la tuina puede variar de acuerdo con las diferentes sensaciones de la lesión, afectando la exploración del mecanismo de inicio de la analgesia de la tuina.

La investigación utilizó ratas modelo de lesión crónica por constricción menor (CCI menor) para simular pNP y utilizó el simulador inteligente de manipulación de tuina para simular los tres métodos (presión puntual, desplumado y amasado) y tres puntos de acupuntura (Yinmen BL37, Chengshan BL57 y Yanglingquan GB34) para realizar la terapia con tuina. El estudio evaluó los cambios en el dolor dentro de las 24 horas y el punto de tiempo óptimo para la eficacia de la analgesia tuina en ratas con modelos de ICC menores mediante la prueba del umbral de sensibilidad al frío (CST), el umbral de extracción mecánica (MWT) y la latencia de extracción térmica (TWL). Además, el estudio evaluó los cambios en la expresión de IL-10 y TNF-α a través de la detección de Elisa. Los resultados muestran que la tuina tiene efectos analgésicos inmediatos y sostenidos. Para los tres umbrales diferentes de sensibilidad a la lesión de CST, MWT, TWL y dos citocinas de IL-10 y TNF-α, la eficacia analgésica de tuina dentro de las 24 h posteriores a la intervención es significativamente diferente en diferentes puntos temporales.

Introducción

El dolor neuropático periférico (pNP) se refiere al dolor causado por una lesión o enfermedad del sistema nervioso somatosensorial periférico, que se manifiesta como una serie de síntomas y signos, con la hiperalgesia como uno de los principales síntomas 1,2. La hiperalgesia es una experiencia intensificada de dolor causada por un estímulo nocivo, que incluye pinchazos, frío y calor3. Se han realizado grandes estudios epidemiológicos, que muestran que el pNP es el más común, con una tasa de prevalencia de 6,9%-10% en el dolor neuropático4. La pNP puede ser causada por múltiples enfermedades, incluyendo lesión del nervio, neuralgia postherpética, polineuropatía diabética dolorosa, esclerosis múltiple, accidente cerebrovascular, cáncer, etc.5. Hoy en día, el principal método para tratar la pNP es la medicación, pero el efecto no es el ideal; y los efectos secundarios son significativos, lo que constituye la razón principal de la alta carga económica para los individuos y la sociedad6.

Tuina es un método de tratamiento externo verde, económico, seguro y eficaz de la medicina tradicional china7. Muchos estudios clínicos han demostrado el efecto analgésico de la tuina sobre el pNP, y estudios básicos han verificado los efectos analgésicos inmediatos y acumulativos de la tuina 8,9. El principal mecanismo analgésico acumulativo de la tuina es reducir los niveles de factores inflamatorios e inhibir la activación de las células gliales10,11. La investigación previa confirmó el efecto analgésico acumulativo de la tuina y encontró genes expresados diferencialmente (DEGs) en los ganglios de la raíz dorsal (DRG) y el asta dorsal espinal (SDH) de ratas con lesión del nervio ciático después de 20 veces de tratamiento con tuina, principalmente relacionadas con la unión a proteínas, la respuesta a la presión y la proyección neuronal12. En estudios recientes, se ha confirmado que la tuina tiene un efecto analgésico inmediato y que la intervención con tuina una sola vez podría aliviar la hiperalgesia de ratas menores con ICC y, especialmente, aliviar la hiperalgesia térmica de manera más efectiva13. Sin embargo, el momento óptimo para el efecto analgésico de la tuina puede variar en función de la sensación de lesión (frío, calor, mecánica), afectando a la exploración del mecanismo de inicio de la analgesia de la tuina.

Los mediadores inflamatorios pueden sensibilizar y activar los receptores del dolor, lo que conduce a una disminución de los umbrales de descarga y secreciones ectópicas, contribuyendo así a la sensibilización periférica14,15. Después de una lesión de los nervios periféricos, el TNF-α es un iniciador de la respuesta inflamatoria, que puede promover la síntesis de factores inflamatorios como la IL-10 y la IL-1β, causando lesión inflamatoria tisular directa, estimulando las terminaciones nerviosas locales y causando dolor 16,17,18. Tuina puede lograr efectos analgésicos al reducir la expresión de factores inflamatorios como TNF-α, IL-10, IL-6 e IL-1β 19,20,21. El estudio seleccionó ratas modelo CCI menores para simular el pNP clínico y seleccionó diferentes puntos de tiempo para las pruebas de comportamiento del dolor por frío, estimulación térmica y mecánica después de una intervención de tuina 1 vez mediante el umbral de sensibilidad al frío (CST), el umbral de extracción mecánica (MWT), la latencia de extracción térmica (TWL), y eligió IL-10 y TNF-α en el suero mediante un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA). Con el fin de seleccionar el punto temporal en el que el efecto analgésico de Tuina es significativo, proporcionando una base para el estudio del mecanismo de inicio de la analgesia de Tuina en la etapa posterior.

Protocolo

El Comité de Protección y Uso Animal de la Universidad de Medicina China de Beijing (BUCM-4-2022082605-3043) aprobó todos los procedimientos utilizados en este estudio.

1. Los animales y el diseño del estudio

  1. Obtener 49 ratas macho Sprague-Dawley (SD) de 8 semanas de edad, con un peso de 200 ± 10 g.
  2. Usando un método de tabla de números aleatorios, divida las ratas en un grupo de operación simulada (n = 7), un grupo modelo (n = 7) e inmediatamente después del grupo tuina (n = 7), 6 h después del grupo tuina (n = 7), 12 h después del grupo tuina (n = 7), 18 h después del grupo tuina (n = 7) y 24 h después del grupo tuina (n = 7).

2. Establecimiento de un modelo de rata de CCI menor (Figura 1)

NOTA: El método de modelación del ICC menor fue el descrito en estudios previos 22,23,24.

  1. Permite la alimentación adaptativa de la rata SD durante 7 días. Deje que la rata ayune durante 2-3 horas antes de modelar.
  2. Coloque la rata en una caja llena con 3-5% de isoflurano para anestesia mediante una máquina de anestesia. Después de la anestesia, aplique un ungüento oftálmico en ambos ojos para evitar que se sequen.
  3. Fije a la rata en posición prona sobre una mesa, afeite el pelaje del área de la articulación de la cadera derecha y desinfecte el área con yodo (Figura 1B).
  4. Confirme el plano quirúrgico de la anestesia mediante un pellizco en el dedo del pie. Realice una incisión en la piel de aproximadamente 0,5-1 cm a lo largo de la dirección de marcha del nervio ciático, separe sin rodeos la capa muscular y exponga completamente el borde inferior del músculo piriforme (Figura 1C).
  5. Ate sin apretar una sutura intestinal de cromo absorbible (tipo 4-0) alrededor del nervio sin interrumpir la circulación sanguínea de los vasos extraneurales. Exponga el nervio ciático de las ratas del grupo simulado durante 3 minutos sin ligadura (Figura 1A, D, E).
  6. Use una jeringa sin aguja para aplicar 1 gota de solución de cloruro de sodio al 0.9% en el nervio ciático para ayudar a restablecerlo. Suturar capa por capa, administrar una cantidad adecuada de fármaco antiinflamatorio como amoxicilina en polvo, suturar la capa muscular con 1 punto y suturar la piel con 2 puntos (Figura 1F).
    NOTA: Desde el paso 2.3 hasta el paso 2.6, mantenga el flujo de isoflurano al 2%-3% hacia la boca y la nariz de las ratas para mantener la anestesia.
  7. Mantén a la rata caliente y espera a que se despierte. Regresa las ratas a la sala de cría.

3. Intervención del simulador de manipulación inteligente de tuina (Figura 2)

NOTA: El tratamiento comenzó el7º día después de que se estableció el modelo.

  1. Ajuste los parámetros del instrumento a una fuerza de estimulación de 4 N, una frecuencia de estimulación de 60 veces/min y una temperatura de 36 °C en la interfaz de operación de la computadora. Coloque la rata en el fijador de ratas y exponga la ubicación de los puntos de acupuntura de las extremidades traseras (Figura 2A, máquina de desarrollo propio, patente No. ZL 2023 20511277.5)25.
  2. Active el instrumento para realizar los métodos de prensado en punta, desplumado y amasado (Tabla 1). Haga clic en el punto de prensado, desplumado y amasado que se muestra en la pantalla de la computadora en la secuencia en los puntos Yinmen (BL37), Chengshan (BL57) y Yanglingquan (GB34) (Tabla 2) en el lado del modelo de la rata del grupo tuina (Figura 2B, C)26.
    1. Para el grupo tuina, realizar una intervención una vez al día durante 1 día, con una fuerza de 4 N, una frecuencia de 60 veces/min y un total de 9 min por punto por método.
    2. Restrinja los grupos simulados y modelo durante 9 minutos, con el mismo número de veces que el grupo tuina.

4. Medición del comportamiento

NOTA: Después de la intervención, se probaron el umbral de sensibilidad al frío (CST), el umbral de extracción mecánica (MWT) y la latencia de extracción térmica (TWL) en los 5 subgrupos tuina, grupo modelo y grupo de operación simulada, respectivamente. El tiempo de prueba para los grupos modelo y simulado es el mismo que para el grupo tuina (es decir, 24 h).

  1. Umbral de sensibilidad al frío (CST)
    1. Coloque la rata en un detector de dolor inteligente de placa fría y caliente con una temperatura superficial de 4 ± 1 °C (haga clic en INICIAR > SET) y cúbrala con una jaula de plástico transparente.
    2. Observe las actividades exploratorias de las ratas durante 5 minutos hasta que se hayan aclimatado a la jaula de plástico transparente.
    3. Observe y registre el número de levantamientos de pies en el lado operativo de la extremidad posterior dentro de los próximos 5 minutos.
      NOTA: No se incluye el número de levantamientos de pies causados por cambios en la actividad o postura de la rata.
  2. Umbral de extracción mecánica (MWT)
    1. Coloque la rata en la superficie inferior como una cuadrícula (0,5 cm × 0,5 cm) en una caja de prueba durante 15-30 minutos antes de la prueba.
    2. Mueva la sonda del dolor (tipo EVF 5) al centro de la región plantar posterior derecha de la rata, aumente linealmente la presión con la mano y registre el umbral que se muestra en la pantalla del instrumento cuando la rata levanta y se lame las patas. Mida continuamente 5 veces, con un intervalo de medición de 10 minutos cada una.
  3. Latencia de extracción térmica (TWL)
    1. Coloque la rata en una caja de prueba con una superficie con fondo de vidrio y deje que se adapte durante 15 minutos antes de comenzar la prueba.
      NOTA: El período latente del reflejo del pie por contracción térmica se detectó utilizando un instrumento de estimulación térmica para el dolor (tipo PL200).
    2. Establecer parámetros: el tiempo máximo de prueba es de 30 s y la intensidad es del 50%. Haga clic en los botones INICIO y dirección.
    3. Mueva la sonda infrarroja al centro de la región plantar posterior derecha de la rata e inicie la detección.
    4. Registre la latencia del reflejo de retracción del pie cuando la rata levanta y lame sus patas. Mida la latencia de forma continua 5 veces, con un intervalo de 10 minutos entre cada medición.

5. ELISA

  1. Anestesiar a la rata con una dosis de 35 mL/100 g de hidrato de cloro al 4% para la anestesia inyectable intraperitoneal después de las pruebas de comportamiento. Corta la piel y los músculos longitudinalmente a lo largo de la mitad del abdomen de la rata para exponer sus órganos internos.
  2. Use un lastre y un soporte para agujas para la separación pura, identifique la aorta abdominal, tome sangre fresca y guarde una muestra para analizarla. Use un tubo de separación para separar el suero. Tome la muestra de suero para su detección inmediata, o empaquétela por separado y guárdela en un refrigerador a -80 ° C.
    NOTA: Antes de separar, deje que la muestra de sangre se aglunte durante 30 minutos.
  3. Prepare el suero de ratas para el proceso de prueba y guárdelo a temperatura ambiente (RT) durante al menos 30 minutos.
  4. Configure pocillos en blanco y pocillos de muestra estándar para la muestra que se va a analizar. Añada un total de 50 μL de las muestras estándar a la placa enzimática. Agregue primero 40 μL de diluyente y luego agregue 10 μL de muestra al pocillo de muestra que se va a analizar.
    NOTA: Al agregar muestras, es necesario agregarlas al fondo del pocillo marcado con enzimas, asegurándose de que no toquen la pared del pocillo tanto como sea posible, y agitar y mezclar bien suavemente. El pocillo en blanco no contiene muestras ni reactivos marcados con enzimas, y los otros pasos son los mismos. La dilución final de la muestra es de 5 veces.
  5. Después de sellar la placa con una película de sellado, colóquela en una incubadora a 37 °C durante 30 minutos.
  6. Diluir 30 veces la solución de lavado concentrada con agua destilada y reservar.
  7. Retire la película de sellado, vierta el líquido fuera del pozo y agítelo para secarlo. Llene cada pocillo con líquido de lavado, déjelo reposar durante 30 s y luego viértalo. Repite este paso 5 veces y, finalmente, agítalo para secarlo.
  8. Agregue avidina marcada con peroxidasa de rábano picante (100 μL por pocillo).
  9. Agregue 50 μL de revelador de color A a cada pocillo, luego agregue 50 μL de revelador de color B. Agite y mezcle suavemente, y colóquelo en un ambiente de 37 ° C durante 10 minutos en la oscuridad.
  10. Agregue 50 μL de la solución de parada por pocillo para terminar la reacción.
    NOTA: En este punto, el color azul se volverá amarillo.
  11. Ponga a cero los pozos en blanco y mida la densidad óptica (valor OD) de cada pozo en secuencia a una longitud de onda de 450 nm.

Resultados

CST: En comparación con el grupo modelo, el número de levantamientos de pies en el grupo 6 h después de la tuina se redujo significativamente, y la diferencia fue estadísticamente significativa (P < 0,05). En comparación con el grupo simulado, el número de levantamientos de pies en el grupo modelo aumentó significativamente y la diferencia fue estadísticamente significativa (P < 0,05) (Tabla 3, Figura 3).

MWT: En comparación con el grupo modelo, el TMM de cada subgrupo de tuina fue significativamente mayor que el del grupo modelo, excepto 18 h después de tuina, y el TMM de las 24 h después de tuina fue significativamente mayor que el del grupo modelo, con una diferencia estadísticamente significativa (P < 0,05). En comparación con el grupo de operación simulada, el MWT en el grupo modelo fue significativamente menor, con una diferencia estadísticamente significativa (P < 0,01) (Tabla 3, Figura 4).

TWL:
En comparación con el grupo modelo, hubo un aumento significativo inmediatamente después de la tuina, 6 h después de la tuina y 18 h después de la tuina, con una diferencia estadísticamente significativa. En comparación con el grupo de operación simulada, el grupo modelo disminuyó significativamente, con una diferencia estadísticamente significativa (P < 0,01) (Tabla 3, Figura 5)

ELISA
IL-10: En comparación con el grupo modelo, hubo una disminución significativa a las 6 h y 24 h después de la tuina, con una diferencia estadísticamente significativa (P < 0,01) (Tabla 4, Figura 6).

TNF-α: En comparación con el grupo modelo, hubo una disminución significativa inmediatamente después de tuina (**P < 0,01), 6 h después de tuina (**P < 0,01) y 24 h después de tuina (**P < 0,05), con una diferencia estadísticamente significativa (Tabla 4, Figura 6)

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Figura 1: Establecimiento de un modelo de rata con ICC menor. (A) Una sutura intestinal crómica (4-0). (B) Preparación de la piel. (C) Incisión. (D) Exponer el nervio ciático. (E) Sutura intestinal crómica reabsorbible (tipo 4-0) alrededor del nervio. (F) Suturar la capa muscular y la piel. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

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Figura 2: Tratamiento del simulador de manipulación inteligente de tuina. (A) El simulador de manipulación inteligente de tuina (patente No. ZL, ZL, 2023, 20511277.5). B) Las posiciones de Yinmen (BL37), Chengshan (BL57) y Yanglingquan (GB34). (C) Estimulante Yinmen (BL37). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

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Figura 3: Resultados del umbral de sensibilidad al frío (CST) de las ratas en cada grupo. *P < 0,05, en comparación con el grupo modelo, #P <0,05, en comparación con el grupo simulado. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

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Figura 4: Resultados del umbral de extracción mecánica (MWT) de las ratas en cada grupo. *P <0,05, en comparación con el grupo modelo, #P < 0,05, en comparación con el grupo simulado. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

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Figura 5: Resultados de la latencia de extracción térmica (TWL) de las ratas en cada grupo. *P < 0,05, **P < 0,01, en comparación con el grupo modelo; #P <0.05, ##P < 0.01, en comparación con el grupo simulado. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

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Figura 6: Cambios en los niveles séricos de IL-10 y TNF-α de ratas en cada grupo (Media ± DE, n = 7), "*P<0.05, *P<0.01, en comparación con el grupo modelo. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Tres métodosMétodosClasificacionesFunciones
Prensado puntualCalentamiento y desbloqueoCalentamiento de meridianos y desbloqueo de colaterales
DesplumeRelajaciónActuar sobre el tronco nervioso y tratar el entumecimiento o el dolor en las extremidades
AmasaduraRelajaciónAliviar los espasmos musculares

Tabla 1: Tres métodos de estimulación.

Tres puntos de acupunturaPuntos de acupunturaMeridianosNerviosMusculatura
Yinmen (BL37)Meridiano de la vejiga de Foot-TaiyangTronco del nervio ciáticoMúsculo bíceps femoral
Chengshan(BL57)Nervio tibialMúsculo gastrocnemio
Yanglingquan(GB34)Vesícula biliar Meridiano del pie-ShaoyangNervio peroneo comúnMúsculos tibiales anteriores

Tabla 2: Tres puntos de acupuntura utilizados en este estudio.

FingirModeloTuina
0 h6 h12 h18 h24 h
CST12,8 ± 2,3825 ± 5.15#19,6 ± 10,9913,2 ± 2,49*16,4 ± 8,4117 ± 5.5719 ± 8.34
MWT69,47 ± 10,3540.63 ± 9.65##44,19 ± 10,7246,58 ± 9,4742,83 ± 11,4140,1 ± 5,5948,33 ± 8,7*
TWL12.06 ± 3.458.16 ± 2.09##12,09 ± 3,86**10,07 ± 2,7*9,44 ± 2,5210,42 ± 2,49**9,72 ± 2,29

Tabla 3: Resultados de CST, MWT y TWL de ratas en cada grupo (Media ± DE, n = 7). *P<0.05, **P<0.01, en comparación con el grupo de modelos; #P<0.05, ##P<0.01, en comparación con el grupo simulado.

FingirModeloTuina
0 h6 h12 h18 h24 h
IL-1055,10 ± 1,37**70,27 ± 6,2267,28 ± 1,2861,41 ± 3,36**67,98 ± 1,8569,03 ± 6,2957,16 ± 1,30**
TNF-α311,52 ± 13,45**339,33 ± 24,50309,47 ± 8,37**309,99 ± 14,95**334,62 ± 21,85319,22 ± 10,38316,24 ± 8,72*

Tabla 4: Cambios en los niveles séricos de IL-10 y TNF-α de ratas en cada grupo (Media ± DE, n = 7, pg/mL). *P < 0,05, **P < 0,01, en comparación con el modelo de grupo (*P < 0,05, **P < 0,01).

Discusión

El estudio utilizó el modelo CCI menor para simular la pNP causada por una lesión clínica del nervio ciático. El modelo menor de ICC implica la compresión y restricción continua y crónica del tronco nervioso a través de la ligadura, acompañada de la hinchazón gradual de la ligadura, lo que resulta en edema dentro del nervio ciático y forma de dolor crónico estable en 3-5 días27,28. En el estudio preliminar, el grupo de investigación encontró que el grupo del modelo CCI menor era más estable que el grupo del modelo clásico al7º día después del modelado, lo que lo hace más adecuado para el diseño experimental a corto plazo. Por lo tanto, elegimos este punto de tiempo para la intervención de Tuina.

La investigación previa ha verificado que el simulador inteligente de manipulación de tuina (animal) puede aliviar eficazmente el dolor en ratas con lesión del nervio ciático después de 20 sesiones de tratamiento con tuina utilizando el "Tri-Método y Tri-Acupunto"29,30,31. Además, el grupo de investigación descubrió que la tuina una vez puede aliviar eficazmente los síntomas de hipersensibilidad al dolor de las ratas menores con ICC, especialmente la hiperalgesia térmica13. El estudio adopta los métodos de prensado puntual, desplumado y amasado como los tres métodos de tratamiento. El método de prensado de puntos es una técnica de calentamiento y desbloqueo que tiene la función de calentar meridianos y desbloquear colaterales. El método de desplumado es una técnica de relajación que actúa sobre el tronco nervioso y puede tratar el entumecimiento o el dolor en las extremidades. El método de amasamiento es una técnica de relajación que puede aliviar los espasmos musculares, eliminar la fatiga y aliviar el dolor en la zona lesionada (Tabla 1). El estudio selecciona Yinmen (BL37), Chengshan (BL57) y Yanglingquan (GB34) como los tres puntos de acupuntura para el tratamiento (Tabla 2). De acuerdo con el principio de selección de puntos de acupuntura a lo largo de los meridianos y localmente en acupuntura y moxibustión, tres puntos de acupuntura pertenecen al meridiano de la vejiga de Foot-Taiyang y al meridiano de la vesícula biliar de foot-Shaoyang. Según la localización del nervio anatómico, Yinmen (BL37) se encuentra en el nervio ciático y sus ramas, Chengshan (BL57) se encuentra en el nervio tibial y Yanglingquan (GB34) se encuentra en el nervio peroneo común. De acuerdo con la ubicación anatómica del músculo, los tres puntos de acupuntura se encuentran alrededor del músculo bíceps femoral, el músculo gastrocnemio y los músculos tibiales anteriores (Tabla 2). Por lo tanto, a través de la intervención de los tres métodos y los tres puntos de acupuntura, se pueden estimular las áreas relevantes de acupunto-nervio-músculo. En este estudio, después de formar dolor crónico estable y una intervención con tuina, se detectaron cambios conductuales en el dolor, verificando aún más que tuina tiene un efecto analgésico inmediato y tiene diferentes puntos de tiempo de significación terapéutica para diferentes receptores de lesión, proporcionando apoyo terapéutico para el siguiente paso en el estudio del mecanismo de inicio de la analgesia tuina.

El estudio utilizó CST, MWT y TWL como indicadores para explorar la eficacia de tuina para diferentes sensaciones de lesión. Las manifestaciones clínicas del dolor inducido en la pNP incluyen principalmente hiperalgesia y alodinia, es decir, dolor inducido por estimulación fría y caliente y dolor mecánico inducido por tacto4. Actualmente, los indicadores clásicos de investigación cuantitativa del comportamiento para estas dos sensaciones de dolor son CST, MWT y TWL. En las pruebas CST, la prueba de placa fría, el probador inteligente de dolor de placa fría y caliente ZH-6C utilizado en este experimento, es relativamente objetiva, menos afectada por los factores ambientales circundantes, tiene temperatura constante y tiene alta precisión32,33. En la investigación básica, los filamentos de Von Frey se utilizan comúnmente para estimar el MWT, que es uno de los indicadores clásicos para evaluar el dolor neuropático. Está dirigido principalmente al dolor acupuntural inducido por estimulación mecánica para evaluar el dolor mecánico inducido por el tacto en roedores34,35. La prueba de Hargreaves utiliza un estimulador de dolor térmico para detectar y evaluar la respuesta de los roedores a la sensibilidad al dolor térmico y se utiliza para evaluar la recuperación de la sensibilidad al dolor o la respuesta al dolor térmico después de una lesión nerviosa para observar si las patas traseras del animal tienen una reacción de constricción debido al calor. El instrumento detecta el movimiento de las patas traserasdel animal 36, y el controlador apagará automáticamente el temporizador de parada infrarrojo34, que se conoce como TWL. Los experimentos muestran que la sensibilidad de las ratas modelo CCI menores a TWL es óptima38. Por lo tanto, el método de investigación cuantitativa para el comportamiento de ratas modelo CCI menores esta vez es utilizar un experimento de placa fría, un aparato de punción mecánica electrónica y un aparato de perforación térmica para detectar.

Los puntos de tiempo significativos de los efectos curativos sobre las diferentes sensaciones nociceptivas después de la intervención temprana de tuina son diferentes. Actualmente, se han realizado exploraciones preliminares sobre la eficacia clínica y el mecanismo de la analgesia tuina. Nuestra investigación previa se centró principalmente en el mecanismo analgésico después de un cierto número de tuina. En los últimos 2 años, se han realizado investigaciones sobre el mecanismo analgésico en la etapa inicial de tuina para explorar cómo se inicia la analgesia tuina. En este estudio, se utilizaron "tres métodos y tres puntos de acupuntura" para intervenir una vez en ratas modelo CCI menores. A continuación, se seleccionaron 5 puntos de tiempo para la detección de CST, MWT y TWL para observar los cambios de temperatura y la sensación táctil mecánica de ratas modelo CCI menores. Este estudio utilizó ELISA para detectar cambios en los niveles séricos de IL-10 y TNF-α de ratas después de las pruebas de comportamiento. Los resultados mostraron que después de una intervención con tuina, en comparación con el grupo modelo, ambos mejoraron inmediatamente. Esto confirmó una vez más los resultados de investigaciones anteriores de que la tuina tenía un efecto analgésico inmediato. Sin embargo, para los diferentes tipos de sensaciones de dolor, los puntos de tiempo en los que el efecto analgésico es significativo no son los mismos. En cuanto a la TSC, hubo significación estadística a las 6 h después de la tuina; En cuanto al TMM, hubo significación estadística a las 24 h después de la tuina; En cuanto a la TWL, hubo significación estadística significativa a las 6 h después de la tuina, y significación estadística significativa inmediatamente y 18 h después de la tuina; En cuanto al nivel sérico de IL-10, hubo una disminución significativa a las 6 h después de la tuina y a las 24 h después de la tuina, con una diferencia estadísticamente significativa. En cuanto al nivel sérico de TNF-α, hubo una disminución significativa inmediatamente después de la tuina, 6 h después de la tuina y 24 h después de la tuina, con una diferencia estadísticamente significativa. Indica que, si bien el efecto analgésico de la tuina puede mantenerse, hay un retraso significativo en el punto de tiempo de eficacia para el dolor inducido por la estimulación fría y el dolor mecánico inducido por el tacto, y es inmediatamente efectivo y tiene una eficacia más significativa y duradera para el dolor inducido por la estimulación térmica. Nuestro laboratorio está explorando más a fondo los cambios en proteínas y genes relacionados con las proteínas de potencial receptor transitorio (TRP) y genes relacionados con la sensibilidad al frío, al calor y a la mecánica, así como otros factores inflamatorios como el TGF-β y la IL-6, para explorar más a fondo el mecanismo de iniciación analgésica de la tuina.

En resumen, a partir de los resultados de este estudio, se puede inferir que los puntos temporales en los que pueden funcionar las proteínas o vías afectadas por la tuina pueden ser diferentes, lo que da lugar a diferentes puntos temporales de efectos analgésicos significativos. Se necesita más investigación en profundidad para explorar el mecanismo de inicio de la analgesia de tuina y proporcionar una base para la investigación de la eficacia clínica de la tuina.

Divulgaciones

Los autores no declaran conflictos de intereses, financieros o de otro tipo.

Agradecimientos

Los autores han recibido financiación para la investigación, redacción y publicación de este artículo de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (Nos. 82074573 y 82274675) y la Fundación de Ciencias Naturales de Beijing (No. 7232278).

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Máquina de anestesiaRuiwode Life Technology Co., Ltd., Shenzhen, ChinaR500Equipo relacionado con la anestesia respiratoria animal
Sutura intestinal crómicaShandong Boda Medical Products Co., Ltd., ChinaBD210903Una sutura quirúrgica absorbible hecha principalmente de proteína de colágeno procesada de los intestinos de cabras jóvenes sanas
Instrumento electrónico de Von FreyBioseb, EE. UU.BIO-EVF5Un instrumento para detectar el umbral de retiro mecánico
Detector inteligente de dolor de placa fría y calienteAnhui Zhenghua Biological Instrument Equipment Co., Ltd, China.ZH-6CUn instrumento para detectar el umbral de sensibilidad al frío
IsofluranoRuiwode Life Technology Co., Ltd., Shenzhen, ChinaR510-22-10anestésico
Molecular Devices (Shanghai) Co., Ltd.SpectraMax M2Un instrumento para detectar la densidad óptica (OD)
Dispositivo de analgesia térmicaChengdu Techman Software Co., Ltd., ChinaPL-200Un instrumento para detectar la latencia de extracción térmica
Un lector de microplacas de longitud de onda completa multifunción

Referencias

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