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Artículo de método

"Avatar", un experimento modificado de bucle de trabajo ex vivo utilizando cepa y activación in vivo

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DOI:

10.3791/65610

18 de agosto de 2023

En este artículo

Resumen

Este artículo detalla la metodología para emular la producción de fuerza muscular in vivo durante experimentos de bucle de trabajo ex vivo utilizando un músculo "avatar" de un roedor de laboratorio para evaluar las contribuciones de los transitorios de deformación y la activación a la respuesta de la fuerza muscular.

Resumen

Los comportamientos de movimiento son características emergentes de los sistemas dinámicos que resultan de la producción de fuerza muscular y la producción de trabajo. La interacción entre los sistemas neurales y mecánicos ocurre en todos los niveles de la organización biológica al mismo tiempo, desde el ajuste de las propiedades de los músculos de las piernas mientras se corre hasta la dinámica de las extremidades que interactúan con el suelo. La comprensión de las condiciones en las que los animales cambian sus estrategias de control neural hacia la mecánica muscular intrínseca («prereflejos») en la jerarquía de control permitiría a los modelos musculares predecir la fuerza muscular in vivo y trabajar con mayor precisión. Para comprender la mecánica muscular in vivo, se requiere una investigación ex vivo de la fuerza muscular y el trabajo en condiciones de deformación y carga dinámicamente variables similares a la locomoción in vivo. Las trayectorias de deformación in vivo suelen presentar cambios bruscos (es decir, transitorios de deformación y velocidad) que surgen de las interacciones entre la activación neuronal, la cinemática musculoesquelética y las cargas aplicadas por el entorno. El objetivo principal de nuestra técnica "avatar" es investigar cómo funcionan los músculos durante cambios bruscos en la velocidad de deformación y la carga, cuando la contribución de las propiedades mecánicas intrínsecas a la producción de fuerza muscular puede ser mayor. En la técnica "avatar", el enfoque tradicional de bucle de trabajo se modifica utilizando trayectorias de deformación medidas in vivo y señales electromiográficas (EMG) de los animales durante los movimientos dinámicos para impulsar los músculos ex vivo a través de múltiples ciclos de estiramiento-acortamiento. Este enfoque es similar a la técnica de bucle de trabajo, excepto que las trayectorias de deformación in vivo se escalan adecuadamente y se imponen a los músculos de ratón ex vivo conectados a un servomotor. Esta técnica permite: (1) emular in vivo la tensión, la activación, la frecuencia de zancada y los patrones de bucle de trabajo; (2) variar estos patrones para que coincidan con las respuestas de fuerza in vivo con mayor precisión; y (3) variar las características específicas de la deformación y/o activación en combinaciones controladas para probar hipótesis mecanicistas.

Introducción

Los animales en movimiento logran impresionantes hazañas atléticas de resistencia, velocidad y agilidad en entornos complejos. La locomoción animal es particularmente impresionante en contraste con las máquinas diseñadas por humanos: la estabilidad y la agilidad de los robots, prótesis y exoesqueletos con patas actuales siguen siendo pobres en comparación con los animales. La locomoción con patas en terreno natural requiere un control preciso y ajustes rápidos para alterar la velocidad y maniobrar las características ambientales que actúan como perturbaciones inesperadas1,2,3....

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Protocolo

Todos los estudios con animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad del Norte de Arizona. Se utilizaron músculos extensores digitales largos (EDL) de ratones de tipo silvestre machos y hembras (cepa B6C3Fe a/a-Ttnmdm/J), con edades comprendidas entre 60 y 280 días, para el presente estudio. Los animales fueron obtenidos de una fuente comercial (ver Tabla de Materiales) y establecidos en una colonia en la Universidad del Norte de Arizona.

1. Selección de la trayectoria de la cepa in vivo y preparación para su uso durante experimentos ex viv....

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Resultados

El objetivo de los experimentos con "avatar" es replicar in vivo producción de fuerza y rendimiento de trabajo tan cercanamente como sea posible durante ex vivo experimentos de bucle de trabajo. En este estudio se eligió utilizar el EDL de ratón como "avatar" del MG de rata porque el EDL de ratón y el MG de rata están compuestos principalmente por músculos de contracción rápida20,21. Ambos músculos son movimientos primarios de la articulación de.......

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Discusión

Si bien los organismos se mueven sin problemas a través de los paisajes, las cargas y tensiones subyacentes que experimentan los músculos varían drásticamente 1,6,23. Tanto durante la locomoción in vivo 1,24 como en los experimentos de "avatar", los músculos se estimulan submáximamente en condiciones cíclicas y no estables. Las relaciones isométricas fuerza-long.......

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Divulgaciones

Todos los autores reconocen que no hay conflicto de intereses.

Agradecimientos

Agradecemos al Dr. Nicolai Konow por proporcionar los datos utilizados en este estudio. Financiado por NSF IOS-2016049 y NSF DBI-2021832.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Sutura de seda trenzada no absorbible 4-0 Mersilk 734H
Cloruro de calcio dihidratado (CaCl2)Sigma-Aldrich1086436Krebs-Henseleit  solución
Dextrosa Sigma-AldrichD9434Krebs-Henseleit  solución
HEPESSigma-AldrichPHR1428Krebs-Henseleit  solución
de ácido hidrothídrico (HCl) Sigma-Aldrich1.37055Krebs-Henseleit  solución
LabView Data Collection de
magnesio (MgSO4)Sigma-AldrichM7506Krebs-Henseleit  solución
de cloruro de potasio (KCl) Sigma-AldrichP3911Krebs-Henseleit  solución
Fosfato de Potasio Monobásico (KH2PO4)Sigma-Aldrich5.43841Krebs-Henseleit  solución
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Bicarbonato de sodio (NaHCO3)Sigma-AldrichS5761Krebs-Henseleit  solución
de cloruro de sodio (NaCl) Sigma-AldrichS9888Krebs-Henseleit  solución
de hidróxido de sodio (NaOH)Sigma-AldrichS5881Krebs-Henseleit  solución
Ratones de tipo salvajeJackson LaboratoryB6C3Fe a/a Ttn mdm/J
Sulfato

Referencias

  1. Dickinson, M. H. How Animals move: an integrative view. Science. 288 (5463), 100-106 (2000).
  2. Sponberg, S., Abbott, E., Sawicki, G. S. Perturbing the muscle work loop paradigm to unravel the neuromechanics of unsteady locomotion. Journal of Experimental Biology

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Reimpresiones y permisos

Etiquetas

M sculo in vivoproducci n de fuerza musculartrayectorias de deformaci nactivaci n neuralmec nica muscularciclos de estiramiento y acortamientose ales electromiogr ficasservomotordin mica de la locomoci n