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Artículo de método

Impactador automatizado para el modelo de lesión medular contusiva en ratones

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DOI:

10.3791/65656

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19 de enero de 2024

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En este artículo

Resumen

Aquí se presenta un novedoso dispositivo automatizado de contusión por lesión de la médula espinal para ratones, que puede producir con precisión modelos de contusión por lesión de la médula espinal con diversos grados.

Resumen

La lesión de la médula espinal (LME) debida a lesiones traumáticas, como accidentes automovilísticos y caídas, se asocia con una disfunción permanente de la médula espinal. La creación de modelos de contusión de lesión medular por impacto en la médula espinal da lugar a patologías similares a la mayoría de las lesiones medulares en la práctica clínica. Los modelos animales precisos, reproducibles y convenientes de lesión de la médula espinal son esenciales para estudiar la lesión de la médula espinal. Presentamos un novedoso dispositivo automatizado de contusión por lesión de la médula espinal para ratones, el sistema inteligente de lesión de la médula espinal de la Universidad de Guangzhou Jinan, que puede producir modelos de contusión por lesión de la médula espinal con precisión, reproducibilidad y comodidad. El sistema produce con precisión modelos de diversos grados de lesión de la médula espinal a través de sensores de distancia láser combinados con una plataforma móvil automatizada y un software avanzado. Utilizamos este sistema para crear tres niveles de modelos de ratones con lesión de la médula espinal, determinamos sus puntuaciones en la escala de ratón de Basso (BMS) y realizamos ensayos de comportamiento y tinción para demostrar su precisión y reproducibilidad. Mostramos cada paso del desarrollo de los modelos de lesión utilizando este dispositivo, formando un procedimiento estandarizado. Este método produce modelos reproducibles de contrusión por lesión de la médula espinal en ratones y reduce los factores de manipulación humana a través de procedimientos de manipulación convenientes. El modelo animal desarrollado es fiable para estudiar los mecanismos de lesión de la médula espinal y los enfoques de tratamiento asociados.

Introducción

La lesión de la médula espinal generalmente resulta en una disfunción permanente de la médula espinal debajo del segmento lesionado. Es causada principalmente por objetos que golpean la columna vertebral y la hiperextensión de la columna vertebral, como accidentes de tráfico y caídas1. Debido a la limitada disponibilidad de opciones de tratamiento eficaces para la lesión de la médula espinal, la elucidación de la patogénesis de las lesiones de la médula espinal utilizando modelos animales será informativa para el desarrollo de enfoques de tratamiento adecuados. El modelo de contusión de lesión medular causada por impacto en la médula espinal da....

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Protocolo

Los estudios con animales fueron revisados y aprobados por el Comité de Ética de la Universidad de Jinan.

1. Anestesia de animales y laminectomía espinal T10

  1. Para este estudio, se utilizaron ratones C57/6J adultos jóvenes hembras de 8 semanas de edad. Anestesiar a los ratones mediante inyección intraperitoneal de ketamina (100 mg/kg) y diazepam (5 mg/kg). Comprobar si la anestesia es exitosa indicada por la pérdida del reflejo del dolor. Aplique ungüento veterinario en los ojos para evitar la sequedad bajo anestesia.
  2. Afeita el vello de la espalda de los ratones con una afeitadora para revelar la piel. De....

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Resultados

La laminectomía se realizó en 24 ratones hembra (8 semanas de edad) como se describió anteriormente. Los ratones del grupo simulado (n = 6) no fueron sometidos a lesión de la médula espinal, mientras que el resto de los ratones, incluidos el grupo de 0,5 mm (n = 6), el grupo de 0,8 mm (n = 6) y el grupo de 1,1 mm (n = 6) fueron sometidos a diferentes profundidades de pinzamiento de la médula espinal. Las puntuaciones de BMS se registraron regularmente hasta 1 mes después de la operación (Figura 4

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Discusión

La lesión de la médula espinal puede provocar déficits sensoriales y motores, lo que puede provocar graves deficiencias físicas y mentales. En China, la incidencia de lesiones de la médula espinal en diferentes provincias varía de 14,6 a 60,6 por millón18. El aumento de la prevalencia de la LME ejercerá más presión sobre el sistema sanitario. En la actualidad, existen pocas opciones de tratamiento eficaces para la lesión medular, las lesiones debido a que sus mecanismos patológicos y procesos de r.......

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Divulgaciones

Los autores declaran que no hay intereses financieros contrapuestos.

Agradecimientos

Este trabajo contó con el apoyo de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China, Nos. 82102314 (a ZSJ) y 32170977 (a HSL) y la Fundación de Ciencias Naturales de la Provincia de Guangdong, Nos. 2022A1515010438 (a ZSJ) y 2022A1515012306 (a HSL). Este estudio fue apoyado por el Programa de Tecnología de Frontera Clínica del Primer Hospital Afiliado de la Universidad de Jinan, China, Nos. JNU1AF- CFTP- 2022- a01206 (a HSL). Este estudio contó con el apoyo del Proyecto del Plan de Ciencia y Tecnología de Guangzhou, Nos. 202201020018 (a HSL), 2023A04J1284 (a ZSJ) y 2023A03J1024 (a HSL).<....

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
0.01M PBS (polvo, pH7.2-7.4)Solarbio Life SciencesP1010
2,2,2-TribromoetanolMacklin75-80-9
4% paraformaldehído fijador de tejidosBiosharp life scienceBL539A
BiomicroscopioLeicaLCC50 HD
CatWalk Noldus Information TechnologyCatWalk XT 9.1
Cubierta de vidrioCITOTEST Scientific10212432C
Máquina de incrustaciónChangzhou Zhongwei Instrumento electrónicoBMJ-A
Etanol absolutoDAMAO64-17-5
FootFaultScanClever Sys Inc.-
vidrioCITOTEST Scientific80302-2104
Kit de tinción de hematoxilina y eosinaBeyotime BiotechnologyC0105S
taladro de micromolienda FEIYUBIO19-7010
Fijador espinal de ratónRWD Life Science68094
Microtomo de parafinaThermoshandon finesse 325
RotaRod para ratonesUgo Basile47600
Microscopio estereoscópicoKUY NICESZM-7045
Terc-Alcohol amílicoMacklin75-85-4
XilenoFarmacéutico Nacional de China#10023418
Portaobjetos de

Referencias

  1. Venkatesh, K., Ghosh, S. K., Mullick, M., Manivasagam, G., Sen, D. Spinal cord injury: pathophysiology, treatment strategies, associated challenges, and future implications. Cell and Tissue Research. 377 (2), 125-151 (2019).
  2. Chiu, C. W., Cheng, H., Hsieh, S. L.

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Reimpresiones y permisos

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