El modelo de ratón Indicador de Acción de la Hormona Tiroidea se desarrolló para permitir la cuantificación específica del tejido de la acción local de la hormona tiroidea utilizando su maquinaria reguladora endógena. Recientemente, se ha demostrado que el modelo es adecuado para caracterizar sustancias químicas disruptoras endocrinas que interactúan con la economía de la hormona tiroidea, tanto mediante metodologías ex vivo como in vivo .
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Artículo de método
Caracterización in vivo de los efectos químicos disruptores endocrinos a través del indicador de acción de la hormona tiroidea en ratones
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Resumen
Resumen
Las hormonas tiroideas (TH) desempeñan un papel fundamental en el metabolismo celular y la función de los tejidos. La economía de TH es susceptible a las sustancias químicas disruptoras endocrinas (EDC, por sus siglas en inglés) que pueden alterar la producción o la acción de las hormonas. Muchos contaminantes ambientales son alteradores endocrinos, lo que representa una amenaza emergente tanto para la salud humana como para la producción agrícola. Esto ha dado lugar a un aumento de la demanda de sistemas de prueba adecuados para examinar los efectos de los posibles EDC. Sin embargo, las metodologías actuales se enfrentan a desafíos. La mayoría de los sistemas de prueba utilizan marcadores endógenos regulados por múltiples procesos reguladores, a menudo complejos, lo que dificulta la distinción de los efectos directos e indirectos. Además, los sistemas de ensayo in vitro carecen de la complejidad fisiológica del metabolismo y la farmacocinética de los EDC en los mamíferos. Además, la exposición a los EDC ambientales suele implicar una mezcla de múltiples compuestos, incluidos los metabolitos generados in vivo , por lo que no se puede ignorar la posibilidad de interacciones. Esta complejidad dificulta la caracterización de los EDC. El ratón Indicador de Acción de la Hormona Tiroidea (THAI) es un modelo transgénico que lleva un sistema reportero de luciferasa sensible a TH, lo que permite evaluar la acción de TH específica de tejido. Se pueden evaluar los efectos específicos de los tejidos de las sustancias químicas sobre la acción local de la TH cuantificando la expresión del indicador de luciferasa en muestras de tejido. Además, con imágenes in vivo , el modelo de ratón THAI permite realizar estudios longitudinales sobre los efectos de posibles EDC en animales vivos. Este enfoque proporciona una poderosa herramienta para probar la exposición a largo plazo, las estructuras de tratamiento complejas o la abstinencia, ya que permite evaluar los cambios en la acción local de la TH a lo largo del tiempo en el mismo animal. Este informe describe el proceso de mediciones de imágenes in vivo en ratones THAI. El protocolo discutido aquí se centra en el desarrollo y la obtención de imágenes de ratones hiper e hipotiroideos, que pueden servir como controles. Los investigadores pueden adaptar o ampliar los tratamientos presentados para satisfacer sus necesidades específicas, ofreciendo un enfoque fundamental para futuras investigaciones.
Introducción
La señalización de la hormona tiroidea (TH) es un regulador fundamental del metabolismo celular, esencial para el desarrollo normal y el funcionamiento óptimo de los tejidos en la edad adulta1. Dentro de los tejidos, la acción de la TH está finamente controlada por una compleja maquinaria molecular, lo que permite el mantenimiento específico de los niveles locales de TH en cada tejido. Esta autonomía de los diferentes tejidos respecto a los niveles circulantes de TH es de gran importancia 2,3,4.
Numerosas sustancias químicas....
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Protocolo
El presente protocolo fue revisado y aprobado por el Comité de Bienestar Animal del Instituto de Medicina Experimental (PE/EA/1490-7/2017, PE/EA/106-2/2021). Los datos presentados provienen de14 ratones THAI machos de 3 meses de edad FVB/Ant (n = 3-6/grupo). FVB/Antecedentes de hormigas Los animales tailandeses tienden a tener manchas altamente pigmentadas en la piel que pueden distorsionar las mediciones. Por lo tanto, busque manchas pigmentadas en la piel del área fotografiada después de la eliminación del pelo. Los animales no requieren condiciones especiales de alojamiento a menos que el experimento lo requiera específicamente (por ejemplo,....
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Resultados
Generalmente, la radiancia medida oscila entre magnitudes de 105 y 1010 p/s/cm2/sr. Sin embargo, los valores exactos pueden variar entre animales dentro de la misma imagen y en diferentes imágenes. Por lo tanto, comparar datos sin procesar puede ser engañoso. Es crucial establecer señales de control y de fondo en todos los experimentos, por lo que los diseños autocontrolados son muy recomendables.
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Discusión
Las amenazas que plantean los alteradores endocrinos (EDC) para la salud humana son bien reconocidas; sin embargo, la investigación sobre los alteradores endocrinos se enfrenta a enormes desafíos. Estos desafíos son en parte consecuencia de la complejidad del sistema endocrino. Se ha identificado que muchos EDC alteran simultáneamente múltiples sistemas endocrinos22. Además, en el contexto de la economía de la hormona tiroidea (TH), existe una capa adicional de complejidad debido a las diferencias.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por el Proyecto No. El RRF-2.3.1-21-2022-00011, titulado Laboratorio Nacional de Neurociencia Traslacional, se ha implementado con el apoyo del Fondo de Recuperación y Resiliencia de la Unión Europea en el marco del Programa Széchenyi Plan Plus.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 3,5,3'-triyodotironina (T3) | Merck | T2877 | |
| Animales, ratones | THAI ratón | ||
| Gel de protección ocular | Oculotect | 1000 UI/g | |
| Tubo Falcon Thermo | Fisher Scientific | 50 mL | |
| volumen Dieta chow sin yodo Dietas | investigación Imágenes | personalizadas | |
| IVIS Lumina II in vivo sistema | Perkin Elmer-Ketamine | ||
| Vetcentre | E1857 | ||
| Living Image software 4.5 | Perkin Elmer-suministrado | con el instrumento | |
| Cilindro | 250 mL | ||
| metimazol | Merck | M8506 | |
| Tubos de microfuga | Eppendorf | Para diluir materiales de tratamiento | |
| NaClO4 | Merck | 71852 | |
| Na-luciferina, sustrato | Goldbio | 103404-75-7 | |
| NaOH | Merck | 101052833 | |
| Tampón de fosfato solución salina | Chem Cruz | sc-362302 | |
| Pipeta | Gilson | Para diluir materiales de tratamiento | |
| Puntas de pipeta | Axygen | Para diluir los materiales de tratamiento | |
| Crema de afeitar/depiladora/afeitadora | Preferencia personal | ||
| Jeringa | B Braun | 1 mL | |
| volumen Aguja de jeringa | B Braun | 0,3 x 12 mm | |
| Xilacina | Vetcentre | E1852 |
Referencias
- Larsen, P. R., Davies, T. F., Hay, I. D. Williams Textbook of Endocrinology. Wilson, J. D., Foster, D. W., Kronenberg, H. M., Larsen, P. R. , W.B. Saunders Co. 389-515 (1998).
- Gereben, B., et al. Cellular and molecular basis of deiodinase-regulated thyroid hormone signaling. Endocr Rev. 29 (7), 8....
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Reimpresiones y permisos
