Mejorar el desarrollo y el crecimiento de ratas infantiles con parálisis cerebral mediante manipulaciones espinales selectivas

Resumen

Este estudio ilustra el efecto de la manipulación selectiva de la columna vertebral en el crecimiento y desarrollo de ratas lactantes con parálisis cerebral, haciendo hincapié en el procedimiento específico y el protocolo estandarizado. Para evaluar el protocolo, se realizó la medición del peso corporal, la prueba de Rotarod, la puntuación de falla del pie, otras pruebas conductuales y la detección de la hormona del crecimiento.

Resumen

La parálisis cerebral (PC) es una enfermedad pediátrica refractaria con alta prevalencia, alta tasa de discapacidad y difícil tratamiento. Actualmente se utiliza una variedad de tratamientos para la parálisis cerebral. El tratamiento consiste en terapia farmacológica y no farmacológica. La terapia externa de la medicina tradicional china es un método de tratamiento muy distintivo en la terapia no farmacológica. Como una de las terapias externas de la medicina tradicional china, el masaje se utiliza en el tratamiento de la parálisis cerebral y tiene buena eficacia, pequeños efectos secundarios y una gran operatividad. Como parte de la terapia externa de la medicina tradicional china, la manipulación selectiva de la columna vertebral puede promover eficazmente el crecimiento y el desarrollo de ratas lactantes con parálisis cerebral. La operación se dividió principalmente en cuatro pasos: primero, se aplicó el método de frotamiento a la columna vertebral y a ambos lados de la columna vertebral durante 1 min. El método de prensado y amasado se aplicó a la columna vertebral durante 5 min, y a los músculos de ambos lados de la columna vertebral durante 5 min. En segundo lugar, se realizó la presión y el amasamiento de los puntos de acupuntura locales sensibles en la columna vertebral durante 2 minutos. En tercer lugar, la extremidad afectada se trató mediante el método de torsión durante 1 min. En cuarto lugar, el método de frotamiento se aplicó a una línea media desde la frente hasta la parte posterior del cerebro durante 1 minuto. Este estudio tuvo como objetivo utilizar la manipulación selectiva de la columna vertebral para tratar ratas bebés con parálisis cerebral. Se detectó el peso, la prueba de Rotarod, la puntuación de falla del pie y la hormona del crecimiento de ratas lactantes con parálisis cerebral para comprender el efecto de la manipulación selectiva de la columna vertebral en el crecimiento y desarrollo de ratas lactantes con parálisis cerebral. Los resultados mostraron que puede promover el aumento de peso, mejorar la capacidad de equilibrio y la función motora, promover el crecimiento y desarrollo de ratas con parálisis cerebral infantil, promover la secreción de la hormona del crecimiento y aumentar la temperatura de las partes sensibles de la espalda.

Introducción

La parálisis cerebral (PC), causada por un daño no progresivo en el cerebro en el feto o la infancia, es un grupo de trastornos caracterizados por un desarrollo motor y postural anormal¹, trastornos del desarrollo que incluyen aumento lento de peso ^2,3,4 y disfunción motora. La incidencia de parálisis cerebral en China es del 2,48% y la prevalencia es del 2,46‰ (1-6 años)⁵, respectivamente. Estudios extranjeros relataron una prevalencia de 2,4%-3,6%⁶. La parálisis cerebral es una de las principales causas de lesiones físicas y discapacidad en los niños, entre las cuales los trastornos del equilibrio y del movimiento tienen un impacto significativo en las actividades de la vida diaria¹. La parálisis cerebral puede ser causada por parto prematuro, infección, genética, isquemia e hipoxia neonatal, ictericia neonatal y otros factores patogénicos complejos y diversos⁷. El objetivo del tratamiento de la parálisis cerebral es mejorar la función física y la calidad de vida ⁸. Actualmente, los métodos de tratamiento para la parálisis cerebral incluyen la estimulación cerebral^{profunda 9}, el entrenamiento de la marcha asistido por robot¹⁰, la acupuntura de muñeca y tobillo¹¹ y la acupuntura de meridianos combinada con masaje¹².

La medicina tradicional china (MTC) se ha utilizado cada vez más como un tratamiento eficaz para la PC^13,14. El masaje, como parte de ello, también juega un cierto papel. Por ejemplo, la manipulación selectiva de la columna vertebral puede regular el estado de hidroximetilación del ADN para regular el desarrollo neuronal y mejorar^{la función de} aprendizaje y memoria. En el tratamiento de ratas lactantes con parálisis cerebral, la manipulación espinal selectiva puede mejorar la homeostasis inflamatoria de la corteza y el hipocampo mediante la regulación del nivel de metilación de las citocinas inflamatorias TNF-α y la región promotora del gen IL-10¹⁶ y desempeñar un papel terapéutico positivo en la capacidad de equilibrio de las ratas lactantes con parálisis cerebral¹⁶. La manipulación selectiva de la columna vertebral puede mejorar la función cognitiva de ratas lactantes con parálisis cerebral¹⁷. La manipulación selectiva de la columna vertebral fue utilizada en el tratamiento de ratas lactantes con parálisis cerebral, y se observó que también tenía efectos terapéuticos sobre su crecimiento y desarrollo¹⁸.

El propósito de este estudio es ilustrar el efecto de la manipulación selectiva de la columna vertebral en el crecimiento y desarrollo de ratas lactantes con parálisis cerebral mediante la medición del peso corporal, la prueba de Rotarod¹⁹, la puntuación de falla del pie^20,21 y otras pruebas de comportamiento y la detección de la hormona del crecimiento, y proporcionar ideas de investigación para el personal relevante.

Protocolo

Este estudio fue aprobado por el Comité de Ética de Animales Experimentales de la Universidad de Medicina Tradicional China de Yunnan. Todas las operaciones experimentales en animales siguieron el principio de las 3R de reducción, optimización y reemplazo de animales experimentales (Nº R-06202018). En este experimento se utilizaron ratas Sprague Dawley (SD) sanas (14 machos y 7 hembras) de grado libre de patógenos específicos (SPF) con un peso corporal promedio de 250-300 g. Las ratas se criaron en la sala de animales SPF de la Universidad de Medicina Tradicional China de Yunnan, número de certificado: SYXK (Yunnan) K2022-0004. Todas las ratas se alojaron bajo un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas con un ambiente controlado por luz natural a una temperatura ambiente de 22-26 °C y una humedad relativa de 40%-50%. Después de 1 semana de alimentación adaptativa, la relación macho/hembra se mantuvo en 1:2. Después de 1 semana, las ratas preñadas fueron alojadas en una sola jaula, alimentadas normalmente, comiendo y bebiendo libremente. Después del parto natural, se seleccionaron las ratas recién nacidas sanas de las ratas preñadas. Las ratas bebés se dividieron en los grupos Simulado, Control y Tratamiento para observar el efecto de la manipulación espinal selectiva en el crecimiento y desarrollo de ratas bebés con parálisis cerebral. De cada grupo, se seleccionaron 6 cachorros machos para el experimento. El grupo de tratamiento fue tratado con manipulación selectiva de la columna vertebral desde el^5º día después del nacimiento, y el tratamiento se administró durante 6 días seguido de reposo durante 1 día.

1. Establecimiento del modelo de parálisis cerebral

1. Esterilice el microscopio, las tijeras oftálmicas, las pinzas, la sutura, la placa quirúrgica, las tijeras, los hisopos de algodón y los guantes necesarios para la cirugía, y colóquelos en el quirófano.
2. Separe temporalmente a un cachorro de su madre al tercer día de vida, colóquelo en un solo marco y transpórtelo al quirófano estéril.
3. Mide el peso corporal. Incluya ratas lactantes con un peso corporal que oscile entre 7 y 9 g en el estudio, y excluya a aquellas que no se ajustaron al peso corporal. Divida aleatoriamente las ratas bebés en grupos simulados, de control y de tratamiento.
4. Inducir la anestesia con isoflurano a una concentración del 2% y mantener la anestesia al 1% utilizando una máquina de anestesia de gas por inhalación para animales pequeños.
   NOTA: Este experimento es principalmente para observar los efectos de la manipulación selectiva de la columna vertebral en el crecimiento y desarrollo de ratas lactantes con parálisis cerebral. La anestesia se ha llevado a cabo de acuerdo con los requisitos generales durante el proceso de modelado, y la analgesia adicional afectará los resultados de la observación.
   1. Conecte el anestésico de gas para animales pequeños a la fuente de alimentación y abra la válvula conectada a la caja de inducción.
   2. Coloque la rata bebé en la caja de inducción, gire la perilla de ajuste de concentración y ajuste la concentración de isoflurano al 2% para inducir la anestesia.
   3. Cuando la rata bebé esté inconsciente, retírela de la caja de inducción. Colóquelo en la placa de operación y cierre el canal 1 de la máquina de anestesia.
   4. Coloque a la rata bebé en posición supina. Fije la máscara de inhalación de anestesia para mantener la anestesia.
   5. Abra el canal conectado a la máscara de inhalación de anestesia. Mantenga la anestesia girando la perilla de ajuste de concentración y ajustando la concentración de isoflurano al 1%.
      NOTA: Después de la anestesia, evalúe la profundidad del anestésico levantando y pellizcando con fuerza los dedos de los pies y la cola de las ratas bebés. Una falta de respuesta cuando los dedos de los pies y la cola fueron levantados y pellizcados confirma que la profundidad de la anestesia ha alcanzado.
5. Desinfecte la piel del cuello de la rata bebé tres veces con alcohol al 75% y corte una incisión longitudinal de 1 cm en la piel del cuello para exponer el tejido subcutáneo.
   NOTA: La incisión longitudinal de la piel del cuello no causa defectos cutáneos.
6. Corte la piel del cuello izquierdo bajo un microscopio de disección y use pinzas oftálmicas para separar sin rodeos el músculo esternohioideo y el músculo esternomastoideo izquierdo.
   1. Encuentre la arteria carótida común izquierda y el nervio vago, y separe la arteria carótida común izquierda y el nervio vago.
   2. En el grupo Modelo, corte la arteria carótida común izquierda con una pluma de coagulación eléctrica. Limpiar y suturar la incisión del cuello.
   3. En el grupo Sham, separe la arteria carótida común izquierda del nervio vago.
7. Después de la operación, coloque a la rata bebé en el baño de agua termostático en posición prona para la reanimación durante 1 h.
   NOTA: Después de la recuperación natural, el color de la piel de las extremidades y de todo el cuerpo era rojizo. La rata bebé podía mover sus extremidades de forma autónoma y gatear de forma independiente.
8. Colocar las ratas resucitadas de los grupos Control y Tratamiento en una incubadora cerrada a 37 °C en posición prona. Introducir una mezcla de 5% de oxígeno y 95% de nitrógeno gaseoso para inducir hipoxia, y retirar las ratas a las 2 h.
9. Retire la rata bebé que completó el proceso de hipoxia de la caja de hipoxia y colóquela en posición prona en una caja con un contenido normal de oxígeno atmosférico. Colóquelos en un baño de agua termostático a 37 °C durante 1 h. Después de una recuperación completa, transfiera a la rata bebé de regreso a la jaula de la madre.
   NOTA: Después de recuperarse de forma natural, el color de la piel de las extremidades y de todo el cuerpo estaba rojo. Las ratas bebés podían mover sus extremidades de forma autónoma y podían gatear de forma independiente.
10. Coloque la rata infantil del grupo Sham en una caja con un contenido normal de oxígeno atmosférico y coloque la caja en un baño de agua termostático a 37 °C durante 1 h. Después de la recuperación completa, vuelva a colocar a la rata bebé en la jaula de la madre para alimentarla.
    NOTA: Después de recuperarse de forma natural, el color de la piel de las extremidades y de todo el cuerpo estaba rojo. Las ratas bebés podían mover sus extremidades de forma autónoma y podían gatear de forma independiente. Todo el proceso de operación se completó en la sala de operaciones especiales de la sala de animales SPF de la Universidad de Medicina Tradicional China de Yunnan. Durante la reanimación y la hipoxia, el operador observa a la rata bebé en todo momento para evitar la muerte causada por una postura incorrecta. Las ratas hembras lactantes fueron alimentadas con alimento de cría libre de patógenos específicos (SPF), y cuando las crías pudieron alimentarse por sí mismas, las crías fueron destetadas (día postnatal 21) y alimentadas con alimento de mantenimiento SPF.

2. Experimento del reflejo de enderezamiento

1. En el^4º día después del nacimiento (el^2º día después del modelado), realice el experimento del reflejo de enderezamiento para verificar si el modelo fue exitoso (Figura 1 y Tabla 1).
   1. Levanta la cola de la rata bebé, apoya su espalda en una tabla horizontal y usa el pulgar y el índice para asegurar su vientre y cuello. Comprueba si la rata puede volver a su posición normal. La incapacidad de la rata para volver a la posición normal desde la posición anormal debido a la pérdida del reflejo de enderezamiento se registra como un modelo exitoso^16,22.
   2. Registre el tiempo que tarda cada grupo de cachorros en darse la vuelta de la posición supina a la posición prona. Comience a registrar el tiempo en que los dedos pulgar e índice se sueltan simultáneamente en posición supina, permita que la rata bebé se gire a la posición prona y deje de registrar cuando las patas delanteras y traseras estén colocadas en el suelo. Si la rata recién nacida no pudo volver a la posición normal durante más de 20 s, registre el tiempo de enderezamiento como 20 s.

3. Preparación antes de la operación

1. Después del modelado, separe a la rata infantil con parálisis cerebral de su madre y llévela a un quirófano con una temperatura ambiente constante de 22-26 °C durante 2 minutos para que se adapte al entorno circundante.
2. Use guantes desechables para mantener la palma suave y suave y la temperatura entre 36-37 °C.
3. Coloque la rata suavemente en la palma de la mano izquierda. Doble el pulgar izquierdo para cubrir los ojos de la rata durante 2 minutos para formar un campo de visión oscuro para que la rata pueda adaptarse al entorno de la palma del operador. Utilice los dedos índice y medio derecho para manipular.
   NOTA: Cubrir los ojos de la rata bebé puede crear un ambiente oscuro. Esto evitará que la rata bebé se agite debido al entorno inseguro e incierto que afecta los resultados experimentales.

4. División de las ratas en los grupos de control y tratamiento

1. Al segundo día después del modelado (P5), verifique el modelo mediante la prueba de reflejo de adrizamiento y divida aleatoriamente las ratas recién nacidas en los grupos de control y tratamiento. Realizar manipulación selectiva de la columna vertebral en las ratas infantiles del grupo de tratamiento.
2. Coloque a la rata bebé en posición prona. Asegúrese de que la columna vertebral se mantenga siempre a nivel recto (Figura 2A).
3. Masajee la columna vertebral y ambos lados de la columna vertebral durante 1 minuto usando el método de frotamiento, y use el método de presionar y amasar la columna y los músculos de ambos lados de la columna durante 5 minutos.
   1. Masajee la columna vertebral y la piel de ambos lados usando el método de frotar para relajar a la rata bebé y aliviar su tensión por completo. Asegúrese de que la frecuencia de frotamiento sea de 100 a 120 veces/min durante 1 minuto después de que la rata bebé esté tranquila y sin agitación.
      1. Use el dedo índice, el dedo medio y el dedo anular derechos como superficie de contacto, y haga un movimiento circular de frotamiento sobre la piel superficial de la columna cervical, la columna torácica y la columna lumbar desde la cabeza hasta la cola sin alterar el tejido subcutáneo.
      2. Con el dedo índice derecho, el dedo medio y el dedo anular como superficies de contacto, realice movimientos circulares sobre la superficie de la piel del músculo trapecio, el músculo glúteo superficial, el músculo romboide cervical, el músculo romboide pectoral, el músculo dorsal ancho y el músculo oblicuo externo en orden de la cabeza a la cola de acuerdo con el estándar anatómico animal²³, sin perturbar el tejido subcutáneo.
   2. Trate la columna vertebral primero presionando y amasando durante 5 minutos, seguido de presionando y amasando los músculos de ambos lados de la columna vertebral durante 5 minutos.
      1. Aplique el método de amasado a la columna vertebral a una frecuencia de 120 veces/min durante 5 min. Utilice los dedos índice o medio derecho como superficie de contacto. De la cabeza a la cola, realice un amasado circular en la piel superficial de las vértebras cervicales, torácicas y lumbares, combinado con un prensado hacia abajo (1,77 ± 0,54 N). Asegúrese de que la fuerza llegue a las vértebras cervicales, las vértebras torácicas, las vértebras lumbares y los ligamentos supraespinosos.
      2. Aplique el método de prensado y amasado a los músculos de ambos lados de la columna vertebral a una frecuencia de 120 veces/min durante 5 min. Utilice el dedo índice o el dedo medio derecho como superficie de contacto. De acuerdo con el estándar anatómico animal²³, presione hacia abajo la superficie de la piel del trapecio, el glúteo superficial, el cuello romboidal, el pectoral romboidal, el dorsal ancho y los músculos abdominales oblicuos externos en un movimiento de amasamiento redondo de la cabeza a la cola, con una fuerza de 1,77 ± 0,54 N, de modo que la fuerza llegue al trapecio, el glúteo superficial, el cuello romboidal, el pectoral romboidal, dorsal ancho y músculos abdominales oblicuos externos (Figura 2B)²³.
4. Presione y amase los puntos de acupuntura sensibles de la columna vertebral (como Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu y Feishu²⁴) a una frecuencia de 100-120 veces/min durante 2 min. Usando el dedo índice o medio derecho como superficie de contacto, realice un amasado circular y presione hacia abajo (1,77 ± 0,54 N) en la piel de la superficie de los puntos de acupuntura locales (como Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu y Feishu) en ratas lactantes con parálisis cerebral.
   NOTA: Los puntos de acupuntura fueron seleccionados de acuerdo con el "Mapa de Puntos de Acupuntura Animal" formulado por la Rama de Investigación de Acupuntura Experimental de la Sociedad China de Acupuntura) (Figura 3)²⁵.
5. Estimular localmente la extremidad afectada por el método de torsión a una frecuencia de 25 veces/min durante 1 min.
   1. Con el pulgar y el índice derechos, pellizque la extremidad afectada de la rata infantil con parálisis cerebral, ejerciendo una fuerza simétrica sobre los dos dedos. Asegúrese de que la fuerza sea suave y que la acción sea ligera y suave. Frote el extensor radial derecho del carpo, el extensor común de los dedos, el extensor cubital del carpo, la falange, la articulación interfalángica, el músculo gastrocnemio, el músculo semitendinoso, el hueso metatarsiano y la articulación intermetatarsiana de la rata infantil hacia adelante y hacia atrás.
6. Aplique el método de frotamiento desde la línea media de la frente hasta la parte posterior del cerebro a una frecuencia de 100-120 veces/min durante 1 min. Use el dedo índice derecho como superficie de contacto y use el método de frotar en una línea imaginaria desde la frente hasta la mitad del cerebro posterior de la rata bebé (es decir, una línea de Baihui, Fengfu y Dazhui) (Figura 3).
   NOTA: El masaje se aplica principalmente sobre la piel. Es un movimiento circular sobre la superficie de la piel de la cabeza de la rata bebé con parálisis cerebral. No es necesario que impulse el movimiento muscular subcutáneo de una rata bebé con parálisis cerebral.
7. Al final del procedimiento, deje a la rata bebé sola durante 30 minutos antes de devolverla a la jaula de la rata madre.
   NOTA: Con la edad, el pelo de las ratas infantiles se vuelve grueso, por lo que es necesario eliminar el pelo posterior de todos los grupos de ratas infantiles durante la operación de masaje para evitar afectar el efecto experimental.

5. Detección de la temperatura de los puntos de acupuntura locales

1. Utilice una cámara termográfica infrarroja para detectar la temperatura del área del punto de acupuntura local antes y después de la operación.
   1. Antes del masaje espinal selectivo, conecte la interfaz tipo C del teléfono móvil con la interfaz USB del dispositivo de imágenes infrarrojas con un cable de datos y encienda el botón de encendido.
   2. Haga clic en Analizar para ingresar al terminal de teléfono móvil del software, seleccione Foto para ingresar al modo de foto y haga clic en Imagen en modo de imagen en la esquina inferior derecha.
   3. Enfoque la cámara en las áreas de los puntos de acupuntura de Dazhui, Xinshu y Shenshu (Figura 3) en la espalda de la rata bebé para tomar fotos de temperatura. Haga clic en Foto para completar la captura de la imagen y guardarla en formato JPG.
   4. Conecte el ordenador con un cable de datos y cargue la imagen guardada en un ordenador instalado con el software Fotric para su análisis.
      1. Abra el software Fotric en la PC, abra el archivo local y busque la ubicación de la imagen.
      2. Seleccione el espacio de trabajo Termograma, seleccione la imagen que se va a analizar y entre en la interfaz de análisis.
      3. En la pantalla Análisis , seleccione la imagen en el cuadro Imagen térmica de la derecha y abra el bloqueo.
      4. Seleccione la función de zoom, ajuste el tamaño de la imagen térmica y la imagen de fondo del cuadro de la izquierda para que coincidan, y desactive el bloqueo de la derecha.
      5. Busque el rectángulo Establecer medida en la barra de herramientas en la parte superior y marque el punto de acupuntura que se detectará en la figura.
      6. Haga clic en Informe a la derecha para registrar el valor de temperatura.

6. Detección de la función de equilibrio motor de ratas lactantes con parálisis cerebral

1. Utilice la prueba conductual de Rotarod¹⁹ para detectar la función motora de las ratas en los grupos Simulado, Control y Tratamiento a los 61^{días después} del nacimiento.
   1. Configuración de parámetros: Inicie el interruptor de encendido, seleccione Hacer experimento para ingresar al siguiente paso, seleccione Positivo, Ratas, Tiempo de 5 minutos para ingresar al siguiente paso y seleccione Tiempo de cuenta: 10 s, Velocidad: 10 rpm.
   2. Luego, coloque las ratas en la pista de atletismo y comience la prueba haciendo clic en Correr después de que se mantengan firmes. Ajuste el estado de ejecución de cada ejecución a ON. Entrene a cada rata una vez durante 5 minutos y luego comience a realizar la prueba tres veces.
   3. Después del entrenamiento, coloque a las ratas bebés en la pista de atletismo rotarod. Una vez que esté estable, haga clic en Ejecutar y ajuste el estado de ejecución a ACTIVADO. Al final de 5 minutos, seleccione Fecha para registrar el tiempo y la velocidad de cada rata que cae de la pista de rotación por primera vez, es decir, los datos de tiempo de ejecución.
2. Utilice la prueba de falla del pie^20,21 para evaluar la función motora del equilibrio de la extremidad delantera derecha de los grupos Simulado, Control y Tratamiento a los 61^{días después} del nacimiento.
   1. Coloque las ratas bebés en el extremo inicial de la escalera horizontal y grabe un video de ellas cruzándola hasta el otro extremo (100 cm de largo y la distancia entre cada escalera es de 2 cm). Después de una sesión de entrenamiento, realice la prueba formal tres veces para cada rata en un intervalo de 5 minutos.
   2. Observe la extremidad delantera derecha cuando el animal cruza la escalera utilizando la reproducción a baja velocidad para hacer una puntuación, como se muestra en el estándar de puntuación (Tabla 2).

7. Western blot

1. Realizar el análisis de Western blot de las muestras de tejido como se describió anteriormente²⁶.
   NOTA: La cantidad de lisado se determinó de acuerdo con el tamaño del bloque de tejido. Los anticuerpos utilizados fueron los siguientes: anticuerpo primario contra la hormona del crecimiento (0,5 μg [0,5 ng/carril]); anticuerpo anti-receptor de la hormona del crecimiento (1/1000); anticuerpo anti-beta actina de referencia interna (1/2000) para anticuerpos primarios; Cabra anti-ConejoIgG H&L (HRP) (1/10000) para anticuerpo secundario.

8. Detectar la fuerza de la mano

1. Use el dispositivo utilizado para detectar la fuerza de manipulación en la mano utilizada para el masaje. Coloque el dedo utilizado para masajear a la rata bebé con el chip sensor del dispositivo y encienda el botón de encendido .
2. Conecte la interfaz del disco duro que almacena el software del probador manual al ordenador e introduzca la dirección IP dedicada del comprobador manual en el cuadro de entrada de URL .
3. Instale el cliente SpringVR en el equipo, haga clic para entrar en la interfaz de colección y seleccione el patrón de dedo en la esquina inferior derecha para probar la fuerza de manipulación.
4. Seleccione la opción Presión y haga clic en Iniciar para comenzar a registrar la fuerza manual del operador durante la operación. El software registrará automáticamente la intensidad de la manipulación y generará una tabla de datos en el disco local donde se encontrarán los datos en el nombre de archivo PressureSensor .

9. Estadísticas de datos

NOTA: Se utilizó el software SPSS26.0 para el análisis estadístico, Graphpad Prism9.0.0 para la producción de gráficos de barras e Image J para el análisis del valor de gris de las bandas de proteínas.

1. Analice y presente todos los datos como media ± desviación estándar (media ± DE).
   NOTA: El estándar de prueba fue α = 0.05, y P ≤ 0.05 se consideró estadísticamente significativo. Se utilizó la prueba de Fisher porque los datos se analizaron mediante análisis de varianza y normalidad y se ajustaron a las características normales de distribución y homogeneidad de la varianza.

Resultados

La manipulación selectiva de la columna vertebral puede promover el aumento de peso corporal en ratas lactantes con parálisis cerebral.
Durante el tratamiento, se midió el peso corporal en los días postnatales 3, 14, 28, 42 y 61 (Figura 4, Tabla 3). Al tercer día después del nacimiento, el peso corporal del grupo Sham fue de 5,53 ± 0,035 g, y el peso corporal del grupo control fue de 3,15 ± 0,43 g. El peso corporal del grupo de tratamiento fue de 4,42 ± 0,13 g, y no fue significativamente diferente del de los grupos simulado y control antes del modelado.

En el día 14 postnatal, el peso corporal del grupo Sham fue de 35,97 ± 1,019 g, el peso corporal del grupo Control fue de 28,00 ± 0,7403 g, y el peso corporal del grupo Tratamiento fue de 33,78 ± 3,705 g. No hubo diferencias significativas en el peso corporal entre los grupos de tratamiento y simulado. El peso del grupo Tratamiento en comparación con el grupo Control fue estadísticamente significativo (P < 0,01).

A los 28^{días después} del nacimiento, el peso corporal del grupo Sham fue de 104,9 ± 3,534 g, el peso corporal del grupo control fue de 80,35 ± 6,767 g, y el peso corporal del grupo de tratamiento fue de 96,73 ± 7,638 g. Se comparó el grupo de tratamiento con el grupo control y fue estadísticamente significativo (p < 0,01).

En el día postnatal 42, el peso corporal del grupo Sham fue de 194,1 ± 4,333 g, el peso corporal del grupo control fue de 138,0 ± 6,029 g, y el peso corporal del grupo de tratamiento fue de 173,9 ± 5,433 g. Hubo una diferencia estadísticamente significativa en el peso corporal entre los grupos de tratamiento y control (P < 0,0001).

En el día postnatal 61, el peso corporal del grupo Sham fue de 321,5 ± 5,675 g, el peso corporal del grupo Control fue de 230,3 ± 5,198 g, y el peso corporal del grupo Tratamiento fue de 268,9 ± 15,22 g. P < 0,0001 se consideró estadísticamente significativo. Hubo una diferencia estadísticamente significativa en el peso corporal entre los grupos de tratamiento y control a P < 0,0001.

La manipulación selectiva de la columna vertebral puede mejorar la función efectiva del equilibrio motor de la parálisis cerebral.
A los 61^{días del} parto, una vez finalizado el tratamiento, se realizó la prueba de rotarod por fatiga. El primer tiempo de caída de cada grupo fue de 296,1 ± 1,65 s en el grupo Sham, 102,7 ± 7,73 s en el grupo Control y 220,1 ± 8,04 s en el grupo Tratamiento. Hubo diferencia significativa entre los grupos Simulado y Control (P < 0,0001). La diferencia entre el grupo de tratamiento y el grupo control fue estadísticamente significativa (P < 0,0001), y la diferencia entre el grupo de tratamiento y el grupo simulado fue estadísticamente significativa (P < 0,0001) (Figura 5, Tabla 4)

A los 61^{días después} del nacimiento, tras el final del tratamiento, las puntuaciones de falta pie de los grupos Simulado y Control fueron de 5,53 ± 0,03 y 3,15 ± 0,43, respectivamente. La puntuación del grupo Tratamiento, 4,42 ± 0,13, fue significativamente menor que la del grupo Simulado (P < 0,0001). La puntuación del grupo Tratamiento fue significativamente mayor que la del grupo Control (P < 0,0001). En comparación con el grupo Tratamiento y el grupo Simulado, la diferencia fue estadísticamente significativa (P < 0,0001) (Figura 6, Tabla 5).

La manipulación selectiva de la columna vertebral puede regular el nivel de secreción de la hormona del crecimiento en la parálisis cerebral.
Se tomaron muestras de tejido en el día 32 postnatal, y se seleccionó el hipotálamo de ratas con parálisis cerebral para Western blot, y se seleccionaron los anticuerpos primarios y secundarios correspondientes: Los anticuerpos utilizados fueron anticuerpo primario anti-hormona de crecimiento, anticuerpo anti-receptor de hormona de crecimiento, anticuerpo anti-beta actina de referencia interna para anticuerpos primarios y anti-IgG H&L (HRP) de cabra (1/10000) para anticuerpo secundario. La manipulación selectiva de la columna vertebral puede promover el crecimiento y desarrollo de ratas lactantes con parálisis cerebral mediante la regulación de la expresión de la hormona del crecimiento (GH) y del receptor de la hormona del crecimiento (GHR) (Figura 7, Tabla 6)²⁶.

Promover el crecimiento y desarrollo de ratas lactantes con parálisis cerebral puede mejorar el contenido de serotonina y norepinefrina en el hipocampo, mejorando así la capacidad de aprendizaje y la memoria²⁷.

La manipulación selectiva de la columna vertebral puede mejorar eficazmente la temperatura del punto de acupuntura local (Figura 8, Tabla 7).
Se utilizaron imágenes térmicas infrarrojas para detectar la temperatura del área del punto de acupuntura local antes y después del tratamiento en el grupo de tratamiento. Se encontró que la temperatura se mantuvo entre 32.92 ± 0.55 °C antes del tratamiento, 36.32 ± 0.15 °C inmediatamente después del tratamiento y 35.32 ± 0.28 °C 2 min después del tratamiento. La temperatura fue de 34.61 ± 0.17 °C 5 min después del final del tratamiento y de 34.28 ± 0.60 °C 10 min después del final del tratamiento. Las diferencias fueron estadísticamente significativas en comparación con la temperatura inmediata antes del final del tratamiento y el área del punto de acupuntura local 2 min, 5 min y 10 min después del tratamiento (P < 0,05). Después de la manipulación selectiva de la columna vertebral, la temperatura del área del punto de acupuntura local en el grupo de tratamiento aumentó y se mantuvo hasta cierto punto.

Figura 1: Reflejo de enderezamiento. (A) Representación esquemática del experimento del reflejo de enderezamiento. La prueba del reflejo de enderezamiento se realizó el^4º día después del nacimiento (el segundo día después del modelado) para verificar el éxito del modelado. (B) Gráfico de barras de la prueba de reflejos de adrizamiento en cada grupo (n = 6, media ± DE). Nota: ns indica P > 0,05 y ninguna diferencia estadística. indica un P < 0,0001, lo que indica una diferencia altamente significativa. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figura 2: Manipulación selectiva de la columna vertebral. (A) Manipulación de las crías antes de la manipulación. Las ratas bebés se colocaban en la palma de la mano del operador y se mantenían en silencio, que era el ambiente en el campamento. (B) Representación de la manipulación selectiva de la columna vertebral. Presiona y amasa los músculos de ambos lados de la columna vertebral. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figura 3: Mapa de los puntos de acupuntura en el dorso de una rata humana frente a una rata SD. (A) Humana y (B) rata SD. C7: séptima vértebra cervical; GV14: Dazhui (GV14), localización: entre la séptima vértebra cervical y la primera vértebra torácica, línea media dorsal; T3: tercera vértebra torácica; BL13: Feishu (BL13), ubicación: entre las dos costillas por debajo de la tercera vértebra torácica; T5: quinta vértebra torácica; BL15: Punto Xinshu, ubicado entre los dos lados de la costilla inferior de la quinta vértebra torácica; T7: séptima vértebra torácica; BL17: Punto Geshu, ubicación: costillas inferiores e inferiores de la séptima vértebra torácica; BL18: Punto Ganshu, ubicación: costillas inferiores e inferiores de la séptima vértebra torácica; T11: undécima vértebra torácica; GV6: Punto de Jizhong, ubicado entre la undécima y la duodécima apófisis espinosa de la vértebra torácica; BL20: Punta de Pishu, situada entre las dos costillas por debajo de la duodécima vértebra torácica; L2: segunda columna lumbar; GV4: Mingmen (GV4), localización: la línea media dorsal, la depresión bajo la segunda apófisis espinosa lumbar; BL23: Punto Shenshu, situado a ambos lados de la segunda columna lumbar. GV20: Baihui (GV20), localización: hueso parietal mediano; GV16, punto Fengfu, ubicación: depresión dorsal de la articulación occipito-atlantoaxial detrás de la cresta occipital. La ubicación de los puntos de acupuntura en el cuerpo humano es muy consistente con la ubicación de los puntos de acupuntura en los animales desde la posición anatómica. El punto de respuesta anormal estaba cerca del punto de proyección de la superficie corporal inervada. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figura 4: Gráfico de barras de la medición del peso en cada grupo (n = 6, media ± DE). Nota: ns P >0,05, sin diferencia estadística; **P < 0,01, ***P < 0,001,****P < 0,0001, la diferencia fue estadísticamente significativa. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figura 5: Gráfico de barras del tiempo de la primera caída de la prueba de Roat-rod en cada grupo (n = 6, Media ± DE). Nota: ****P < 0.0001, la diferencia fue estadísticamente significativa. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figura 6: Gráfico de barras de las puntuaciones de falla del pie en cada grupo (n = 6, media ± DE). Nota: ****P < 0,0001, la diferencia fue estadísticamente significativa. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figura 7: Bandas de Western blot de GH y receptor de GH. Se utilizó Western blot para detectar la secreción de hormona del crecimiento a nivel biológico molecular en cada grupo, y se observó el efecto de la manipulación espinal selectiva sobre la hormona del crecimiento. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figura 8: Monitoreo de temperatura antes y después del tratamiento. (Panel superior) Imágenes térmicas tomadas por una cámara termográfica infrarroja. La temperatura (°C) del área del punto de acupuntura local se registró mediante una cámara termográfica infrarroja antes y después del tratamiento con tuina. (A) Antes del tratamiento con tuina. (B) Temperatura inmediatamente al final del tratamiento. (C) Temperatura del punto de acupuntura local 2 min después del tratamiento. (D) Temperatura del punto de acupuntura local 5 min después del final del tratamiento. (E) temperatura del punto de acupuntura local 10 min después del tratamiento. (Panel inferior) Gráfico de barras de control de temperatura antes y después del tratamiento (n = 3, media ± DE). *P < 0,05, P < 0,01, * * * * * *P < 0,001, * * * *P < 0,0001, la diferencia es estadísticamente significativa. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Grupo	Número de casos (n)	Reflejo/s de adrizamiento
Fingir	6	0,77 ± 0,10
Control	6	19.00 ± 2.04*
Tratamiento	6	19.77 ± 0.55#

Tabla 1: Estadísticas de tiempo del reflejo de enderezamiento en ratas lactantes con parálisis cerebral (Media ± DE; n = 6). Las crías de cada grupo fueron sometidas a la prueba del reflejo de enderezamiento el^4º día después del nacimiento (el^2º día después del modelado) para verificar si el modelo era exitoso. * En comparación con el grupo Sham, P < 0,0001; # en comparación con el grupo de control, P < 0,0001.

Puntuación	Norma de evaluación
1	Cuando la rata joven se coloca en la escalera horizontal, el pie se desliza al soportar peso, lo que afecta la marcha
2	Cuando la rata joven se coloca en la escalera, el pie se desliza al soportar peso, pero no afecta la marcha
3	Cuando la rata joven se coloca en la escalera horizontal, la rata mueve el pie rápidamente al siguiente escalón de la escalera soportando el peso
4	Cuando la rata joven se coloca en la escalera horizontal, la rata coloca el pie parcialmente y se mueve a través de la escalera soportando el peso
5	Cuando la rata joven se coloca en la escalera horizontal, la rata pone su pie en un escalón y rápidamente se mueve a otro escalón
6	Cuando la rata joven se coloca en la escalera horizontal, la rata coloca las almohadillas de sus patas correctamente y soportando completamente el peso del cuerpo

Tabla 2: Tabla estándar de puntuación de la prueba de falla del pie

Hora (día)	Número de casos (n)	Grupo
		Fingir	Control	Tratamiento
P3	6	8,52 ± 0,27	8,60 ± 0,08	8,45 ± 0,28D
Pág. 14	6	35,97 ± 1,01	28,00 ± 0,74*	33,78 ± 3,70Ñ
Pág. 28	6	104,9 ± 3,53	80,35 ± 6,76*	96,73 ± 7,63Ñ
Pág. 42	6	194,1 ± 4,33	138,0 ± 6,02*	173,9 ± 5,43#D
Pág. 61	6	321,5 ± 5,67	230,3 ± 5,19*	268,9 ± 15,22#D

Tabla 3: Resultados de la prueba de peso de cada grupo (Media ± DE) (g). Nota: Ñ En comparación con el grupo control, P < 0,01; ° En comparación con el grupo Sham, P < 0,01; à En comparación con el grupo control, P < 0,001; * En comparación con el grupo Sham, P < 0,0001; # En comparación con el grupo de control, P < 0,0001; D En comparación con el grupo Sham, P < 0,0001.

Grupo	Número de casos (n)	Varilla de rotura/tiempo/s
Fingir	6	296,1 ± 1,65
Control	6	102,7 ± 7,73*
Tratamiento	6	220,1 ± 8,04#D

Tabla 4: Prueba de Rotarod de ratas recién nacidas en cada grupo (Media ± DE) (s). Nota: * En comparación con el grupo Sham, P < 0,0001; # En comparación con el grupo de control, P < 0,0001; D En comparación con el grupo Sham, P < 0,0001.

Grupo	Número de casos (n)	Puntuación de falta con el pie
Fingir	6	5,53 ± 0,03
Control	6	3,15 ± 0,43*
Tratamiento	6	4,42 ± 0,13#D

Tabla 5: Puntuaciones de Foot-fault de cada grupo (Media ± DE). Nota: * En comparación con el grupo Sham, P < 0,0001; # En comparación con el grupo de control, P < 0,0001; D En comparación con el grupo Sham, P < 0,0001.

Grupo	GH	GHR
Fingir	2.325 ± 0.830	1.469 ± 0.265
Control	1.563 ± 0.070#	1.563 ± 0.070Ñ
Tratamiento	2,471 ± 0,956*	2.471 ± 0.956&

Tabla 6: Datos del valor de gris de la banda de Western blot de la hormona del crecimiento y del receptor de la hormona del crecimiento (n = 10). GH:* La comparación por pares entre el grupo de tratamiento y el grupo de control (P = 0,020 < 0,05) mostró diferencia estadísticamente significativa; # La comparación por pares entre el grupo Sham y el grupo Control (P = 0,022 < 0,05) mostró diferencia significativa; La comparación por pares entre el grupo de tratamiento y el grupo simulado no mostró significación estadística (p = 0,076 > 0,05); La comparación entre el grupo de tratamiento y el grupo de control (P = 0,024 < 0,05) mostró diferencia significativa; Ñ La comparación por pares entre el grupo Sham y el grupo Modelo (P = 0,021 < 0,05) mostró diferencia estadísticamente significativa; La comparación por pares entre el grupo de tratamiento y el grupo simulado no mostró significación estadística (p = 0,085 > 0,05).

Tiempo de terapia	Número de casos (n)	Temperatura
Antes del tratamiento	3	32,92 ± 0,55
Inmediatamente	3	36,32 ± 0,15*
Después de 2 min	3	35.32 ± 0.28#
Después de 5 min	3	34,61 ± 0,17Ñ
Después de 10 min	3	34.28 ± 0.60Dà

Tabla 7: Resultados del control de temperatura antes y después del tratamiento (Media ± DE) (°C). Nota: * En comparación con los que estaban antes del tratamiento, P < 0,0001; # En comparación con la que existía antes del tratamiento, P < 0,001; D En comparación con 0 min después del tratamiento, P <0,001; Ñ En comparación con antes del tratamiento, P < 0,01; à En comparación con el pretratamiento, P < 0,05.

Discusión

Debido a que la isquemia y la hipoxia son factores patogénicos importantes de la parálisis cerebral, el método internacionalmente reconocido para establecer el modelo de parálisis cerebral se combina con la hipoxia para preparar el modelo de parálisis cerebral 16,28,29,30. Cuando la parálisis cerebral se desarrolla, causa un retraso global del desarrollo, incluyendo el peso y la función motora, que puede estar relacionado con el nivel de secreción de hormona del crecimiento³¹. La manipulación selectiva de la columna vertebral se utilizó para tratar ratas lactantes con parálisis cerebral. Se controló el peso corporal durante el tratamiento y se realizaron pruebas de comportamiento como la prueba de Rotarod, la puntuación de falla del pie y la hormona del crecimiento. Se observó la temperatura de los puntos de acupuntura locales antes y después del tratamiento. Después de establecer el modelo de isquemia-hipoxia, la rata lactante con parálisis cerebral perdió peso. Aun así, con la extensión del masaje, se encontró que el aumento de peso del grupo de tratamiento fue significativamente mejor que el del grupo de control. También tenía ventajas obvias en la regulación de la secreción de la hormona del crecimiento. Estos resultados indican que la manipulación selectiva de la columna vertebral puede mejorar eficazmente el crecimiento y el desarrollo de ratas lactantes con parálisis cerebral. Además, debido a que se utilizó la arteria carótida común izquierda para establecer el modelo de isquemia y coagulación combinadas con hipoxia, debe haber daño en la corteza izquierda, lo que lleva a un deterioro de la función motora. Después del tratamiento, se utilizó la prueba de Rotarod y el Foot-fault score para detectar la capacidad conductual de ratas lactantes con parálisis cerebral 32,33,34. Se encontró que la función motora de las ratas con parálisis cerebral mejoró después de la manipulación selectiva de la columna^{vertebral 35}. La manipulación selectiva de la columna vertebral puede mejorar eficazmente el crecimiento, el desarrollo y la función motora de las ratas lactantes con parálisis cerebral.

El masaje tradicional chino se basa en los puntos de acupuntura y el sistema de meridianos. El diseño de este experimento es principalmente observar la influencia del masaje tradicional chino en el crecimiento y desarrollo de ratas bebés con parálisis cerebral. El tratamiento de masaje se realiza principalmente en el meridiano de la vejiga de las líneas laterales del pie-taiyang y el meridiano Du, pero a diferencia de la acupuntura, hay una ubicación clara del punto de estimulación. El masaje es un tipo de estimulación facial en la que se utilizan los dedos del operador para la operación abdominal, y la superficie de contacto tiene un cierto rango de área, un diámetro circular de aproximadamente 1,0 cm. Los meridianos también tienen un cierto rango; sin embargo, la superficie de contacto del dedo humano es más ancha que el área del punto de acupuntura de la rata SD. Esto significa que hay un procedimiento operativo inevitable en algunos lugares que no son puntos de acupuntura. Por lo tanto, no establecimos un grupo de masaje no meridiano por separado como control al asignar los grupos para este estudio.

El masaje selectivo de la columna vertebral selecciona la columna vertebral y los músculos de ambos lados de la columna vertebral para estimularlos durante la operación, lo que puede aliviar los espasmos musculares locales, promover la circulación sanguínea local y mejorar la función del área de inervación correspondiente para lograr el efecto de aliviar el meridiano y los colaterales y la regulación y el tratamiento generales. Encarna plenamente la integración del concepto holístico de la medicina tradicional china, la teoría de los meridianos de la medicina tradicional china y el principio de la inervación del nervio espinal, y tiene en cuenta el conjunto mientras lleva a cabo el tratamiento local de la parálisis cerebral⁸.

En el procedimiento, el método de masaje en la columna vertebral y los músculos y ligamentos a ambos lados del tratamiento, es decir, el meridiano Du y el meridiano de la vejiga de la primera y segunda líneas laterales de la estimulación del masaje, pueden desempeñar un papel en la conexión de los puntos de acupuntura de la espalda, la médula espinal y el cerebro. Por lo tanto, cuando realizamos operaciones de manipulación en los puntos traseros de una rata bebé, podemos estimular los puntos posteriores y los meridianos para que fluyan el qi y la sangre, regular las funciones de las vísceras del cuerpo y, por lo tanto, afectar las funciones de la médula espinal y el cerebro para promover el crecimiento y desarrollo de la rata bebé. En general, al estimular el meridiano Du y el meridiano de la vejiga de las líneas laterales primera y segunda del pie-taiyang, se puede movilizar el Yang de todo el cuerpo y se puede mejorar la resistencia general a las enfermedades del cuerpo, lo que refleja el concepto general de la Medicina Tradicional China 16,26,35,36,37,38 . El meridiano Du se origina en la parte inferior del abdomen del cuerpo humano y llega a la parte superior de la cabeza a lo largo de la columna vertebral, regulando el Yang qi del cuerpo humano³⁶. El meridiano de la vejiga de Foot-Taiyang corre principalmente a lo largo de ambos lados del vaso gobernador, y los puntos de back-shu de cinco órganos zang se encuentran en la primera línea lateral del meridiano de la vejiga de Foot-Taiyang, involucrado en el tratamiento de enfermedades de los órganos zangfu^39,40. Los meridianos y las colaterales se dividen en colaterales flotantes, colaterales diminutos y regiones cutáneas. Por lo tanto, cuando realizamos el procedimiento en la piel posterior de una rata bebé con parálisis cerebral, podemos operar a lo largo de la dirección de los meridianos y estimular eficazmente las colaterales flotantes, las colaterales diminutas y las regiones cutáneas. Por lo tanto, al estimular los puntos de acupuntura y los meridianos para que corran el qi y la sangre, la función de las vísceras del cuerpo se regula y da como resultado el aumento de peso de^{los cachorros}.

Encontramos puntos de reacción en forma de cordón en el meridiano de la vejiga urinaria del pie-taiyang en la espalda de los niños con parálisis cerebral, y se utilizó termografía infrarroja para detectar la temperatura anormal de algunos puntos de acupuntura. Combinado con el principio de inervación del nervio espinal, encontramos que estos puntos de reacción estaban cerca de los puntos de proyección en la superficie de la inervación nerviosa, lo que también es consistente con el principio de resección selectiva de la raíz del nervio espinal para el tratamiento de la parálisis cerebral (Figura 3)⁴¹. Los puntos de acupuntura infunden meridianos, qi y sangre y conectan la superficie del cuerpo y los órganos zang-fu^42,43. Por lo tanto, en el tratamiento de ratas lactantes con parálisis cerebral, se utiliza la manipulación espinal selectiva para operar los puntos de acupuntura de la espalda, activando los puntos de acupuntura locales, desbloqueando los meridianos, el qi y la sangre, y los puntos de acupuntura se encuentran en un estado sensible al calor⁴⁴. Después de la operación y el tratamiento, aún se puede mantener una cierta temperatura.

El uso del método de giro en la extremidad derecha puede aliviar el espasmo del tejido muscular local, disminuir los meridianos locales y mejorar la disfunción local. Finalmente, elegimos realizar una terapia de masaje en la cabeza porque la cabeza es la cabeza de todo el Yang, donde convergen la esencia del qi y la sangre de los cinco órganos del zang-fu. El tratamiento de esta parte puede reconciliar el Yin y el Yang y lograr el efecto de una rehabilitación general^16,18. En conclusión, la manipulación selectiva de la columna vertebral puede mejorar eficazmente el peso corporal, la función motora y la hormona del crecimiento de ratas lactantes con parálisis cerebral para promover el crecimiento y el desarrollo.

Todavía hay algunos puntos importantes a los que prestar atención durante la operación. En primer lugar, hay que tener en cuenta que la rata bebé debe adaptarse a la temperatura de la palma de la mano y que la condición de agitación es estable antes del tratamiento. Los operadores deben usar guantes desechables para evitar el abandono de ratas hembras debido a anomalías después del contacto directo con la piel de los operadores. Antes de la operación, los operadores deben estar capacitados de manera uniforme en sus manipulaciones y pueden operar después de pasar la evaluación. Aquí, utilizamos un probador de manipulación específico para probar y garantizar la estandarización de la operación. Debido a que observamos cambios de peso durante el crecimiento en ratas lactantes con parálisis cerebral, la manipulación debe ser revisada regularmente. Al presionar y amasar, la presión hacia abajo debe ser vertical y la fuerza debe ser de ligera a pesada, estable y continua para que la sensación de estimulación pueda llegar completamente al tejido profundo del cuerpo. No use la violencia rápida. El rango de amasado debe ser pequeño y grande, y la fuerza debe ser ligera y pesada primero. El rango de amasado debe ser pequeño y grande, y la fuerza debe ser ligera y pesada primero. La operación del método de amasado debe llegar a la capa de músculos y ligamentos. La fuerza manual fue de 1,77 ± 0,54 N cuando fue monitoreada por el probador manual. Por el contrario, solo se trata la superficie de la piel cuando se realiza el frotamiento. Además, la piel de las ratas bebés con parálisis cerebral es delicada y un funcionamiento inadecuado puede provocar daños en la piel.

Como tratamiento externo de la medicina tradicional china, la manipulación selectiva de la columna vertebral es un complemento eficaz a los métodos de tratamiento existentes de la parálisis cerebral, y es un método de tratamiento diversificado de la parálisis cerebral. Considera tanto el tratamiento integral como el local, que puede dar a los niños con parálisis cerebral una rehabilitación integral y puede traer mejores beneficios económicos y efectos sociales a la familia y a la sociedad de los niños. Sin embargo, esta técnica también tiene algunas deficiencias porque los operadores tienen diferentes comprensiones y dominio de la técnica, el grado de unidad de la técnica es bajo, puede ocurrir una desviación del efecto terapéutico y el efecto curativo no es exacto. El siguiente paso es hacer que la manipulación alcance un estándar uniforme. Aunque hemos confirmado que la manipulación selectiva de la columna vertebral afecta positivamente al crecimiento y desarrollo de ratas lactantes con parálisis cerebral y puede desempeñar un papel terapéutico mediante la regulación de la homeostasis inflamatoria, aún queda por estudiar su mecanismo de acción sobre la neuroplasticidad y la regeneración de la sustancia blanca.

Debido a la certeza del efecto curativo y a la teoría científica de la manipulación selectiva de la columna vertebral, basada en la teoría de la operación de la manipulación selectiva de la columna vertebral, este conjunto de manipulaciones puede extenderse para tratar otras enfermedades pediátricas, como el retraso del crecimiento de los niños, el retraso del desarrollo del lenguaje, etc. Proporcionar ideas de investigación enriquece el sistema de tratamiento para la mayoría de los trabajadores médicos e investigadores. Por lo tanto, este artículo es propicio para popularizar y aplicar la técnica.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Placas de 96 pocillos	Beijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD	11510	Determinación de la concentración de proteínas
Anti-beta Actina Anticuerpo Abacm		Ab8227	Dilución: 1/2000
Anti-Hormona del crecimiento Anticuerpo	Abacm	Ab126882	0.5 µ g (0,5 ng/carril)
Anticuerpo anti-receptor de la hormona del crecimiento	Abacm	Ab202964	Dilución: 1/1000
Microscopio quirúrgico básico	Shanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTD	SM-101	La arteria carótida común se aisló bajo microscopio durante
el modelado BCA desarrollador	Biyuntian Biological Engineering Co., LTD	P0010	Determinación de la concentración
de proteínasSistema de imágenes de quimioluminiscencia	Shanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., LTD	100240073	Imágenes de bandas de proteínas
Marcador prefabricado en color de carga directa	Beijing Kangrunchengye Biotechnology Co., LTD (GenStar)	M221	Western Blot
DK-30Máquina automática de hielo de nieve	Henan Brothers instrument equipment Co., LTD	SHDX0023
	de sustrato luminiscente ECL para la fabricación de hieloBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD	BL520B	Convertir imágenes latentes en película expuesta en imágenes visibles
Baño de agua termostático calentado eléctricamente	TAISITE INSTRUMENT	DK-98-II	Las ratas jóvenes fueron resucitadas después de modelar
Balanzas electrónicas	Kunshan YoukeWEI ELECTRONIC Technology Co. LTD	CN-LQC10002	Se midió
el peso corporal de las ratas jóvenesPluma de coagulación eléctrica blanca pequeña alemana hemostática	Haohang	L55× W125&tiempos; H37	Se utilizó para coagular la arteria carótida común izquierda
Guante	Jiangsu YANGzi LiDE Medical Device Co. LTD	Q/320684 YZYL001-2017	Para la operación de masaje
Glycine	Beijing Soleibao Technology Co., Ltd.	Cat#G8200	Solución electroforética, Configurar el fluido de transferencia
Cabra Anti-RabbitIgG H& L (HRP)	Abacm	Ab6721	Dilución: 1/10000
Máquina de agua ultrapura de laboratorio inteligente	Chongqing huachuag water treatment engineering co., LTD	N/A	Filtración (15 L)
Isoflurano	Shandong Ante Animal Husbandry Technology Co. LTD	15198	La anestesia se mantuvo por inducción en ratas jóvenes
LinkIR	FOTIRC	V1.3.2.134	Software de análisis de imágenes infrarrojas
Molinillo de tejidos de alta velocidad y baja temperatura	Wuhan Servicebio technology CO., LTD	SKZ3F20200191	Molienda de tejidos
Metanol	Guangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd	20220519	Configurar el fluido
de transferencia Mini-PROTEAN Tetra	Bole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd	552BR 233193
Espectrofotómetro de microplacas de espectro multiskan de electroforesis	TECAN	Spark	Se detectaron la absorbancia y concentración de proteína tisular
Guantes inteligentes con detección de presión	Jinan Super Sense Intelligent Technology Co. LTD	Miiglove	Se utiliza para medir la fuerza de manipulación del operador
Membrana PVDF	MerckMillipore Corporation	IPVH00010	Western Blot
Centrífuga refrigerada	Hettich Precision Technology (Zhuhai) Co., LTD	MIKRO 220R	Centrífuga
Cámara termográfica tres en uno	FOTIRC	226S (384 x 288)	Medición de temperatura
Lisado RIPA	Beijing Solaibao Technology Co., LTD (Solarbio)	R0010	Tejido lítico
Oscilador termostático de baño de agua con pantalla digital SHA-CA	Changzhou Aohua Instrument Co. LTD	SHA-CA	Se utilizaron ratas jóvenes en hipoxia
Aparato de rotarod de fatiga de seis ratas	Shanghai Duoyi Industry Co., LTD	DO01104RT703	Se detectó la función motora de CP
Leche descremada en polvo	Guangzhou Saiguo Biotechnology Co., LTD (BIOFROXX)	1172GR500	Alimento líquido confinante
SPF para cría	SPF(Beijing)biotechnology co., Ltd.	A1EC30005A1S4285266	Las ratas hembras lactantes fueron alimentadas con
alimento de mantenimiento SPF	SPF (Beijing) biotechnology co., Ltd.	A1EC30005A1S4285267	Los cachorros fueron alimentados después del destete
Placa quirúrgica	Shanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTD	51002	La mesa de operaciones modelo se estableció en ratas jóvenes
TS-200 Agitador orbital	Haimen Qilin Bell Manufacturing Co., Ltd.	TS-8S	Fijación en gel
Tween 80	MedChemExpress	HY-Y1819	Configurar TBST
ZS-MV Máquina de anestesia portátil	ZHONGSHI SCIENCE & TECNOLOGÍA	ZS-MV-I	Se indujo y mantuvo la anestesia en animales de experimentación