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Artículo de método

Mejorar el desarrollo y el crecimiento de ratas infantiles con parálisis cerebral mediante manipulaciones espinales selectivas

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DOI:

10.3791/65659

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2 de febrero de 2024

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1Yunnan University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Este estudio ilustra el efecto de la manipulación selectiva de la columna vertebral en el crecimiento y desarrollo de ratas lactantes con parálisis cerebral, haciendo hincapié en el procedimiento específico y el protocolo estandarizado. Para evaluar el protocolo, se realizó la medición del peso corporal, la prueba de Rotarod, la puntuación de falla del pie, otras pruebas conductuales y la detección de la hormona del crecimiento.

Resumen

La parálisis cerebral (PC) es una enfermedad pediátrica refractaria con alta prevalencia, alta tasa de discapacidad y difícil tratamiento. Actualmente se utiliza una variedad de tratamientos para la parálisis cerebral. El tratamiento consiste en terapia farmacológica y no farmacológica. La terapia externa de la medicina tradicional china es un método de tratamiento muy distintivo en la terapia no farmacológica. Como una de las terapias externas de la medicina tradicional china, el masaje se utiliza en el tratamiento de la parálisis cerebral y tiene buena eficacia, pequeños efectos secundarios y una gran operatividad. Como parte de la terapia externa de la medicina tradicional china, la manipulación selectiva de la columna vertebral puede promover eficazmente el crecimiento y el desarrollo de ratas lactantes con parálisis cerebral. La operación se dividió principalmente en cuatro pasos: primero, se aplicó el método de frotamiento a la columna vertebral y a ambos lados de la columna vertebral durante 1 min. El método de prensado y amasado se aplicó a la columna vertebral durante 5 min, y a los músculos de ambos lados de la columna vertebral durante 5 min. En segundo lugar, se realizó la presión y el amasamiento de los puntos de acupuntura locales sensibles en la columna vertebral durante 2 minutos. En tercer lugar, la extremidad afectada se trató mediante el método de torsión durante 1 min. En cuarto lugar, el método de frotamiento se aplicó a una línea media desde la frente hasta la parte posterior del cerebro durante 1 minuto. Este estudio tuvo como objetivo utilizar la manipulación selectiva de la columna vertebral para tratar ratas bebés con parálisis cerebral. Se detectó el peso, la prueba de Rotarod, la puntuación de falla del pie y la hormona del crecimiento de ratas lactantes con parálisis cerebral para comprender el efecto de la manipulación selectiva de la columna vertebral en el crecimiento y desarrollo de ratas lactantes con parálisis cerebral. Los resultados mostraron que puede promover el aumento de peso, mejorar la capacidad de equilibrio y la función motora, promover el crecimiento y desarrollo de ratas con parálisis cerebral infantil, promover la secreción de la hormona del crecimiento y aumentar la temperatura de las partes sensibles de la espalda.

Introducción

La parálisis cerebral (PC), causada por un daño no progresivo en el cerebro en el feto o la infancia, es un grupo de trastornos caracterizados por un desarrollo motor y postural anormal1, trastornos del desarrollo que incluyen aumento lento de peso 2,3,4 y disfunción motora. La incidencia de parálisis cerebral en China es del 2,48% y la prevalencia es del 2,46‰ (1-6 años)5, respectivamente. Estudios extranjeros relataron una prevalencia de 2,4%-3,6%6. La parálisis cerebral es una de las principales causas de lesiones físicas y discapacidad en los niños, entre las cuales los trastornos del equilibrio y del movimiento tienen un impacto significativo en las actividades de la vida diaria1. La parálisis cerebral puede ser causada por parto prematuro, infección, genética, isquemia e hipoxia neonatal, ictericia neonatal y otros factores patogénicos complejos y diversos7. El objetivo del tratamiento de la parálisis cerebral es mejorar la función física y la calidad de vida 8. Actualmente, los métodos de tratamiento para la parálisis cerebral incluyen la estimulación cerebralprofunda 9, el entrenamiento de la marcha asistido por robot10, la acupuntura de muñeca y tobillo11 y la acupuntura de meridianos combinada con masaje12.

La medicina tradicional china (MTC) se ha utilizado cada vez más como un tratamiento eficaz para la PC13,14. El masaje, como parte de ello, también juega un cierto papel. Por ejemplo, la manipulación selectiva de la columna vertebral puede regular el estado de hidroximetilación del ADN para regular el desarrollo neuronal y mejorarla función de aprendizaje y memoria. En el tratamiento de ratas lactantes con parálisis cerebral, la manipulación espinal selectiva puede mejorar la homeostasis inflamatoria de la corteza y el hipocampo mediante la regulación del nivel de metilación de las citocinas inflamatorias TNF-α y la región promotora del gen IL-1016 y desempeñar un papel terapéutico positivo en la capacidad de equilibrio de las ratas lactantes con parálisis cerebral16. La manipulación selectiva de la columna vertebral puede mejorar la función cognitiva de ratas lactantes con parálisis cerebral17. La manipulación selectiva de la columna vertebral fue utilizada en el tratamiento de ratas lactantes con parálisis cerebral, y se observó que también tenía efectos terapéuticos sobre su crecimiento y desarrollo18.

El propósito de este estudio es ilustrar el efecto de la manipulación selectiva de la columna vertebral en el crecimiento y desarrollo de ratas lactantes con parálisis cerebral mediante la medición del peso corporal, la prueba de Rotarod19, la puntuación de falla del pie20,21 y otras pruebas de comportamiento y la detección de la hormona del crecimiento, y proporcionar ideas de investigación para el personal relevante.

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Protocolo

Este estudio fue aprobado por el Comité de Ética de Animales Experimentales de la Universidad de Medicina Tradicional China de Yunnan. Todas las operaciones experimentales en animales siguieron el principio de las 3R de reducción, optimización y reemplazo de animales experimentales (Nº R-06202018). En este experimento se utilizaron ratas Sprague Dawley (SD) sanas (14 machos y 7 hembras) de grado libre de patógenos específicos (SPF) con un peso corporal promedio de 250-300 g. Las ratas se criaron en la sala de animales SPF de la Universidad de Medicina Tradicional China de Yunnan, número de certificado: SYXK (Yunnan) K2022-0004. Todas las ratas se alojaron bajo un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas con un ambiente controlado por luz natural a una temperatura ambiente de 22-26 °C y una humedad relativa de 40%-50%. Después de 1 semana de alimentación adaptativa, la relación macho/hembra se mantuvo en 1:2. Después de 1 semana, las ratas preñadas fueron alojadas en una sola jaula, alimentadas normalmente, comiendo y bebiendo libremente. Después del parto natural, se seleccionaron las ratas recién nacidas sanas de las ratas preñadas. Las ratas bebés se dividieron en los grupos Simulado, Control y Tratamiento para observar el efecto de la manipulación espinal selectiva en el crecimiento y desarrollo de ratas bebés con parálisis cerebral. De cada grupo, se seleccionaron 6 cachorros machos para el experimento. El grupo de tratamiento fue tratado con manipulación selectiva de la columna vertebral desde el5º día después del nacimiento, y el tratamiento se administró durante 6 días seguido de reposo durante 1 día.

1. Establecimiento del modelo de parálisis cerebral

  1. Esterilice el microscopio, las tijeras oftálmicas, las pinzas, la sutura, la placa quirúrgica, las tijeras, los hisopos de algodón y los guantes necesarios para la cirugía, y colóquelos en el quirófano.
  2. Separe temporalmente a un cachorro de su madre al tercer día de vida, colóquelo en un solo marco y transpórtelo al quirófano estéril.
  3. Mide el peso corporal. Incluya ratas lactantes con un peso corporal que oscile entre 7 y 9 g en el estudio, y excluya a aquellas que no se ajustaron al peso corporal. Divida aleatoriamente las ratas bebés en grupos simulados, de control y de tratamiento.
  4. Inducir la anestesia con isoflurano a una concentración del 2% y mantener la anestesia al 1% utilizando una máquina de anestesia de gas por inhalación para animales pequeños.
    NOTA: Este experimento es principalmente para observar los efectos de la manipulación selectiva de la columna vertebral en el crecimiento y desarrollo de ratas lactantes con parálisis cerebral. La anestesia se ha llevado a cabo de acuerdo con los requisitos generales durante el proceso de modelado, y la analgesia adicional afectará los resultados de la observación.
    1. Conecte el anestésico de gas para animales pequeños a la fuente de alimentación y abra la válvula conectada a la caja de inducción.
    2. Coloque la rata bebé en la caja de inducción, gire la perilla de ajuste de concentración y ajuste la concentración de isoflurano al 2% para inducir la anestesia.
    3. Cuando la rata bebé esté inconsciente, retírela de la caja de inducción. Colóquelo en la placa de operación y cierre el canal 1 de la máquina de anestesia.
    4. Coloque a la rata bebé en posición supina. Fije la máscara de inhalación de anestesia para mantener la anestesia.
    5. Abra el canal conectado a la máscara de inhalación de anestesia. Mantenga la anestesia girando la perilla de ajuste de concentración y ajustando la concentración de isoflurano al 1%.
      NOTA: Después de la anestesia, evalúe la profundidad del anestésico levantando y pellizcando con fuerza los dedos de los pies y la cola de las ratas bebés. Una falta de respuesta cuando los dedos de los pies y la cola fueron levantados y pellizcados confirma que la profundidad de la anestesia ha alcanzado.
  5. Desinfecte la piel del cuello de la rata bebé tres veces con alcohol al 75% y corte una incisión longitudinal de 1 cm en la piel del cuello para exponer el tejido subcutáneo.
    NOTA: La incisión longitudinal de la piel del cuello no causa defectos cutáneos.
  6. Corte la piel del cuello izquierdo bajo un microscopio de disección y use pinzas oftálmicas para separar sin rodeos el músculo esternohioideo y el músculo esternomastoideo izquierdo.
    1. Encuentre la arteria carótida común izquierda y el nervio vago, y separe la arteria carótida común izquierda y el nervio vago.
    2. En el grupo Modelo, corte la arteria carótida común izquierda con una pluma de coagulación eléctrica. Limpiar y suturar la incisión del cuello.
    3. En el grupo Sham, separe la arteria carótida común izquierda del nervio vago.
  7. Después de la operación, coloque a la rata bebé en el baño de agua termostático en posición prona para la reanimación durante 1 h.
    NOTA: Después de la recuperación natural, el color de la piel de las extremidades y de todo el cuerpo era rojizo. La rata bebé podía mover sus extremidades de forma autónoma y gatear de forma independiente.
  8. Colocar las ratas resucitadas de los grupos Control y Tratamiento en una incubadora cerrada a 37 °C en posición prona. Introducir una mezcla de 5% de oxígeno y 95% de nitrógeno gaseoso para inducir hipoxia, y retirar las ratas a las 2 h.
  9. Retire la rata bebé que completó el proceso de hipoxia de la caja de hipoxia y colóquela en posición prona en una caja con un contenido normal de oxígeno atmosférico. Colóquelos en un baño de agua termostático a 37 °C durante 1 h. Después de una recuperación completa, transfiera a la rata bebé de regreso a la jaula de la madre.
    NOTA: Después de recuperarse de forma natural, el color de la piel de las extremidades y de todo el cuerpo estaba rojo. Las ratas bebés podían mover sus extremidades de forma autónoma y podían gatear de forma independiente.
  10. Coloque la rata infantil del grupo Sham en una caja con un contenido normal de oxígeno atmosférico y coloque la caja en un baño de agua termostático a 37 °C durante 1 h. Después de la recuperación completa, vuelva a colocar a la rata bebé en la jaula de la madre para alimentarla.
    NOTA: Después de recuperarse de forma natural, el color de la piel de las extremidades y de todo el cuerpo estaba rojo. Las ratas bebés podían mover sus extremidades de forma autónoma y podían gatear de forma independiente. Todo el proceso de operación se completó en la sala de operaciones especiales de la sala de animales SPF de la Universidad de Medicina Tradicional China de Yunnan. Durante la reanimación y la hipoxia, el operador observa a la rata bebé en todo momento para evitar la muerte causada por una postura incorrecta. Las ratas hembras lactantes fueron alimentadas con alimento de cría libre de patógenos específicos (SPF), y cuando las crías pudieron alimentarse por sí mismas, las crías fueron destetadas (día postnatal 21) y alimentadas con alimento de mantenimiento SPF.

2. Experimento del reflejo de enderezamiento

  1. En el4º día después del nacimiento (el2º día después del modelado), realice el experimento del reflejo de enderezamiento para verificar si el modelo fue exitoso (Figura 1 y Tabla 1).
    1. Levanta la cola de la rata bebé, apoya su espalda en una tabla horizontal y usa el pulgar y el índice para asegurar su vientre y cuello. Comprueba si la rata puede volver a su posición normal. La incapacidad de la rata para volver a la posición normal desde la posición anormal debido a la pérdida del reflejo de enderezamiento se registra como un modelo exitoso16,22.
    2. Registre el tiempo que tarda cada grupo de cachorros en darse la vuelta de la posición supina a la posición prona. Comience a registrar el tiempo en que los dedos pulgar e índice se sueltan simultáneamente en posición supina, permita que la rata bebé se gire a la posición prona y deje de registrar cuando las patas delanteras y traseras estén colocadas en el suelo. Si la rata recién nacida no pudo volver a la posición normal durante más de 20 s, registre el tiempo de enderezamiento como 20 s.

3. Preparación antes de la operación

  1. Después del modelado, separe a la rata infantil con parálisis cerebral de su madre y llévela a un quirófano con una temperatura ambiente constante de 22-26 °C durante 2 minutos para que se adapte al entorno circundante.
  2. Use guantes desechables para mantener la palma suave y suave y la temperatura entre 36-37 °C.
  3. Coloque la rata suavemente en la palma de la mano izquierda. Doble el pulgar izquierdo para cubrir los ojos de la rata durante 2 minutos para formar un campo de visión oscuro para que la rata pueda adaptarse al entorno de la palma del operador. Utilice los dedos índice y medio derecho para manipular.
    NOTA: Cubrir los ojos de la rata bebé puede crear un ambiente oscuro. Esto evitará que la rata bebé se agite debido al entorno inseguro e incierto que afecta los resultados experimentales.

4. División de las ratas en los grupos de control y tratamiento

  1. Al segundo día después del modelado (P5), verifique el modelo mediante la prueba de reflejo de adrizamiento y divida aleatoriamente las ratas recién nacidas en los grupos de control y tratamiento. Realizar manipulación selectiva de la columna vertebral en las ratas infantiles del grupo de tratamiento.
  2. Coloque a la rata bebé en posición prona. Asegúrese de que la columna vertebral se mantenga siempre a nivel recto (Figura 2A).
  3. Masajee la columna vertebral y ambos lados de la columna vertebral durante 1 minuto usando el método de frotamiento, y use el método de presionar y amasar la columna y los músculos de ambos lados de la columna durante 5 minutos.
    1. Masajee la columna vertebral y la piel de ambos lados usando el método de frotar para relajar a la rata bebé y aliviar su tensión por completo. Asegúrese de que la frecuencia de frotamiento sea de 100 a 120 veces/min durante 1 minuto después de que la rata bebé esté tranquila y sin agitación.
      1. Use el dedo índice, el dedo medio y el dedo anular derechos como superficie de contacto, y haga un movimiento circular de frotamiento sobre la piel superficial de la columna cervical, la columna torácica y la columna lumbar desde la cabeza hasta la cola sin alterar el tejido subcutáneo.
      2. Con el dedo índice derecho, el dedo medio y el dedo anular como superficies de contacto, realice movimientos circulares sobre la superficie de la piel del músculo trapecio, el músculo glúteo superficial, el músculo romboide cervical, el músculo romboide pectoral, el músculo dorsal ancho y el músculo oblicuo externo en orden de la cabeza a la cola de acuerdo con el estándar anatómico animal23, sin perturbar el tejido subcutáneo.
    2. Trate la columna vertebral primero presionando y amasando durante 5 minutos, seguido de presionando y amasando los músculos de ambos lados de la columna vertebral durante 5 minutos.
      1. Aplique el método de amasado a la columna vertebral a una frecuencia de 120 veces/min durante 5 min. Utilice los dedos índice o medio derecho como superficie de contacto. De la cabeza a la cola, realice un amasado circular en la piel superficial de las vértebras cervicales, torácicas y lumbares, combinado con un prensado hacia abajo (1,77 ± 0,54 N). Asegúrese de que la fuerza llegue a las vértebras cervicales, las vértebras torácicas, las vértebras lumbares y los ligamentos supraespinosos.
      2. Aplique el método de prensado y amasado a los músculos de ambos lados de la columna vertebral a una frecuencia de 120 veces/min durante 5 min. Utilice el dedo índice o el dedo medio derecho como superficie de contacto. De acuerdo con el estándar anatómico animal23, presione hacia abajo la superficie de la piel del trapecio, el glúteo superficial, el cuello romboidal, el pectoral romboidal, el dorsal ancho y los músculos abdominales oblicuos externos en un movimiento de amasamiento redondo de la cabeza a la cola, con una fuerza de 1,77 ± 0,54 N, de modo que la fuerza llegue al trapecio, el glúteo superficial, el cuello romboidal, el pectoral romboidal, dorsal ancho y músculos abdominales oblicuos externos (Figura 2B)23.
  4. Presione y amase los puntos de acupuntura sensibles de la columna vertebral (como Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu y Feishu24) a una frecuencia de 100-120 veces/min durante 2 min. Usando el dedo índice o medio derecho como superficie de contacto, realice un amasado circular y presione hacia abajo (1,77 ± 0,54 N) en la piel de la superficie de los puntos de acupuntura locales (como Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu y Feishu) en ratas lactantes con parálisis cerebral.
    NOTA: Los puntos de acupuntura fueron seleccionados de acuerdo con el "Mapa de Puntos de Acupuntura Animal" formulado por la Rama de Investigación de Acupuntura Experimental de la Sociedad China de Acupuntura) (Figura 3)25.
  5. Estimular localmente la extremidad afectada por el método de torsión a una frecuencia de 25 veces/min durante 1 min.
    1. Con el pulgar y el índice derechos, pellizque la extremidad afectada de la rata infantil con parálisis cerebral, ejerciendo una fuerza simétrica sobre los dos dedos. Asegúrese de que la fuerza sea suave y que la acción sea ligera y suave. Frote el extensor radial derecho del carpo, el extensor común de los dedos, el extensor cubital del carpo, la falange, la articulación interfalángica, el músculo gastrocnemio, el músculo semitendinoso, el hueso metatarsiano y la articulación intermetatarsiana de la rata infantil hacia adelante y hacia atrás.
  6. Aplique el método de frotamiento desde la línea media de la frente hasta la parte posterior del cerebro a una frecuencia de 100-120 veces/min durante 1 min. Use el dedo índice derecho como superficie de contacto y use el método de frotar en una línea imaginaria desde la frente hasta la mitad del cerebro posterior de la rata bebé (es decir, una línea de Baihui, Fengfu y Dazhui) (Figura 3).
    NOTA: El masaje se aplica principalmente sobre la piel. Es un movimiento circular sobre la superficie de la piel de la cabeza de la rata bebé con parálisis cerebral. No es necesario que impulse el movimiento muscular subcutáneo de una rata bebé con parálisis cerebral.
  7. Al final del procedimiento, deje a la rata bebé sola durante 30 minutos antes de devolverla a la jaula de la rata madre.
    NOTA: Con la edad, el pelo de las ratas infantiles se vuelve grueso, por lo que es necesario eliminar el pelo posterior de todos los grupos de ratas infantiles durante la operación de masaje para evitar afectar el efecto experimental.

5. Detección de la temperatura de los puntos de acupuntura locales

  1. Utilice una cámara termográfica infrarroja para detectar la temperatura del área del punto de acupuntura local antes y después de la operación.
    1. Antes del masaje espinal selectivo, conecte la interfaz tipo C del teléfono móvil con la interfaz USB del dispositivo de imágenes infrarrojas con un cable de datos y encienda el botón de encendido.
    2. Haga clic en Analizar para ingresar al terminal de teléfono móvil del software, seleccione Foto para ingresar al modo de foto y haga clic en Imagen en modo de imagen en la esquina inferior derecha.
    3. Enfoque la cámara en las áreas de los puntos de acupuntura de Dazhui, Xinshu y Shenshu (Figura 3) en la espalda de la rata bebé para tomar fotos de temperatura. Haga clic en Foto para completar la captura de la imagen y guardarla en formato JPG.
    4. Conecte el ordenador con un cable de datos y cargue la imagen guardada en un ordenador instalado con el software Fotric para su análisis.
      1. Abra el software Fotric en la PC, abra el archivo local y busque la ubicación de la imagen.
      2. Seleccione el espacio de trabajo Termograma, seleccione la imagen que se va a analizar y entre en la interfaz de análisis.
      3. En la pantalla Análisis , seleccione la imagen en el cuadro Imagen térmica de la derecha y abra el bloqueo.
      4. Seleccione la función de zoom, ajuste el tamaño de la imagen térmica y la imagen de fondo del cuadro de la izquierda para que coincidan, y desactive el bloqueo de la derecha.
      5. Busque el rectángulo Establecer medida en la barra de herramientas en la parte superior y marque el punto de acupuntura que se detectará en la figura.
      6. Haga clic en Informe a la derecha para registrar el valor de temperatura.

6. Detección de la función de equilibrio motor de ratas lactantes con parálisis cerebral

  1. Utilice la prueba conductual de Rotarod19 para detectar la función motora de las ratas en los grupos Simulado, Control y Tratamiento a los 61días después del nacimiento.
    1. Configuración de parámetros: Inicie el interruptor de encendido, seleccione Hacer experimento para ingresar al siguiente paso, seleccione Positivo, Ratas, Tiempo de 5 minutos para ingresar al siguiente paso y seleccione Tiempo de cuenta: 10 s, Velocidad: 10 rpm.
    2. Luego, coloque las ratas en la pista de atletismo y comience la prueba haciendo clic en Correr después de que se mantengan firmes. Ajuste el estado de ejecución de cada ejecución a ON. Entrene a cada rata una vez durante 5 minutos y luego comience a realizar la prueba tres veces.
    3. Después del entrenamiento, coloque a las ratas bebés en la pista de atletismo rotarod. Una vez que esté estable, haga clic en Ejecutar y ajuste el estado de ejecución a ACTIVADO. Al final de 5 minutos, seleccione Fecha para registrar el tiempo y la velocidad de cada rata que cae de la pista de rotación por primera vez, es decir, los datos de tiempo de ejecución.
  2. Utilice la prueba de falla del pie20,21 para evaluar la función motora del equilibrio de la extremidad delantera derecha de los grupos Simulado, Control y Tratamiento a los 61días después del nacimiento.
    1. Coloque las ratas bebés en el extremo inicial de la escalera horizontal y grabe un video de ellas cruzándola hasta el otro extremo (100 cm de largo y la distancia entre cada escalera es de 2 cm). Después de una sesión de entrenamiento, realice la prueba formal tres veces para cada rata en un intervalo de 5 minutos.
    2. Observe la extremidad delantera derecha cuando el animal cruza la escalera utilizando la reproducción a baja velocidad para hacer una puntuación, como se muestra en el estándar de puntuación (Tabla 2).

7. Western blot

  1. Realizar el análisis de Western blot de las muestras de tejido como se describió anteriormente26.
    NOTA: La cantidad de lisado se determinó de acuerdo con el tamaño del bloque de tejido. Los anticuerpos utilizados fueron los siguientes: anticuerpo primario contra la hormona del crecimiento (0,5 μg [0,5 ng/carril]); anticuerpo anti-receptor de la hormona del crecimiento (1/1000); anticuerpo anti-beta actina de referencia interna (1/2000) para anticuerpos primarios; Cabra anti-ConejoIgG H&L (HRP) (1/10000) para anticuerpo secundario.

8. Detectar la fuerza de la mano

  1. Use el dispositivo utilizado para detectar la fuerza de manipulación en la mano utilizada para el masaje. Coloque el dedo utilizado para masajear a la rata bebé con el chip sensor del dispositivo y encienda el botón de encendido .
  2. Conecte la interfaz del disco duro que almacena el software del probador manual al ordenador e introduzca la dirección IP dedicada del comprobador manual en el cuadro de entrada de URL .
  3. Instale el cliente SpringVR en el equipo, haga clic para entrar en la interfaz de colección y seleccione el patrón de dedo en la esquina inferior derecha para probar la fuerza de manipulación.
  4. Seleccione la opción Presión y haga clic en Iniciar para comenzar a registrar la fuerza manual del operador durante la operación. El software registrará automáticamente la intensidad de la manipulación y generará una tabla de datos en el disco local donde se encontrarán los datos en el nombre de archivo PressureSensor .

9. Estadísticas de datos

NOTA: Se utilizó el software SPSS26.0 para el análisis estadístico, Graphpad Prism9.0.0 para la producción de gráficos de barras e Image J para el análisis del valor de gris de las bandas de proteínas.

  1. Analice y presente todos los datos como media ± desviación estándar (media ± DE).
    NOTA: El estándar de prueba fue α = 0.05, y P ≤ 0.05 se consideró estadísticamente significativo. Se utilizó la prueba de Fisher porque los datos se analizaron mediante análisis de varianza y normalidad y se ajustaron a las características normales de distribución y homogeneidad de la varianza.

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Resultados

La manipulación selectiva de la columna vertebral puede promover el aumento de peso corporal en ratas lactantes con parálisis cerebral.
Durante el tratamiento, se midió el peso corporal en los días postnatales 3, 14, 28, 42 y 61 (Figura 4, Tabla 3). Al tercer día después del nacimiento, el peso corporal del grupo Sham fue de 5,53 ± 0,035 g, y el peso corporal del grupo control fue de 3,15 ± 0,43 g. El peso corporal del grupo de tratamiento fue de 4,42 ± 0...

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Discusión

Debido a que la isquemia y la hipoxia son factores patogénicos importantes de la parálisis cerebral, el método internacionalmente reconocido para establecer el modelo de parálisis cerebral se combina con la hipoxia para preparar el modelo de parálisis cerebral 16,28,29,30. Cuando la parálisis cerebral se desarrolla, causa un retraso global del desarrollo, inclu...

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Divulgaciones

Los autores no tienen conflictos de intereses financieros o de otro tipo en relación con este trabajo.

Agradecimientos

Este trabajo ha sido apoyado por el Programa General de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (82374614), el Proyecto Biomédico Principal del Departamento de Ciencia y Tecnología de la Provincia de Yunnan (202102AA100016), el Proyecto Principal Conjunto de Investigación Básica Aplicada del Departamento de Ciencia y Tecnología de la Provincia de Yunnan - Universidad de Medicina Tradicional China de Yunnan (201901AI070004), Con el apoyo del Laboratorio Clave de Acupuntura, Moxibustión y Masaje para la Prevención y el Tratamiento de la Encefalopatía en Colegios y Universidades de la Provincia de Yunnan (2019YGZ04), Departamento de Ciencia y Tecnología de la Provincia de Yunnan -- Proyecto Juvenil del Programa de Investigación Básica de la Provincia de Yunnan (202101AU070002), Programa de Posgrado del Fondo de Investigación Científica del Departamento de Educación de la Provincia de Yunnan, (2023Y0433); Fundación de Investigación Científica del Departamento de Educación de la provincia de Yunnan, (2023Y0462).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Placas de 96 pocillosBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD11510Determinación de la concentración de proteínas
Anti-beta Actina Anticuerpo AbacmAb8227Dilución: 1/2000
Anti-Hormona del crecimiento AnticuerpoAbacmAb1268820.5 µ g (0,5 ng/carril)
Anticuerpo anti-receptor de la hormona del crecimientoAbacmAb202964Dilución: 1/1000
Microscopio quirúrgico básicoShanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTDSM-101La arteria carótida común se aisló bajo microscopio durante
el modelado BCA desarrolladorBiyuntian Biological Engineering Co., LTDP0010Determinación de la concentración
de proteínasSistema de imágenes de quimioluminiscenciaShanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., LTD100240073Imágenes de bandas de proteínas
Marcador prefabricado en color de carga directaBeijing Kangrunchengye Biotechnology Co., LTD (GenStar)M221Western Blot
DK-30Máquina automática de hielo de nieveHenan Brothers instrument equipment Co., LTDSHDX0023
de sustrato luminiscente ECL para la fabricación de hieloBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTDBL520BConvertir imágenes latentes en película expuesta en imágenes visibles
Baño de agua termostático calentado eléctricamenteTAISITE INSTRUMENTDK-98-IILas ratas jóvenes fueron resucitadas después de modelar
Balanzas electrónicasKunshan YoukeWEI ELECTRONIC Technology Co. LTDCN-LQC10002Se midió
el peso corporal de las ratas jóvenesPluma de coagulación eléctrica blanca pequeña alemana hemostáticaHaohangL55× W125&tiempos; H37Se utilizó para coagular la arteria carótida común izquierda
GuanteJiangsu YANGzi LiDE Medical Device Co. LTDQ/320684 YZYL001-2017Para la operación de masaje
GlycineBeijing Soleibao Technology Co., Ltd.Cat#G8200Solución electroforética, Configurar el fluido de transferencia
Cabra Anti-RabbitIgG H& L (HRP) AbacmAb6721Dilución: 1/10000
Máquina de agua ultrapura de laboratorio inteligenteChongqing huachuag water treatment engineering co., LTDN/AFiltración (15 L)
IsofluranoShandong Ante Animal Husbandry Technology Co. LTD15198La anestesia se mantuvo por inducción en ratas jóvenes
LinkIRFOTIRCV1.3.2.134Software de análisis de imágenes infrarrojas
Molinillo de tejidos de alta velocidad y baja temperaturaWuhan Servicebio technology CO., LTDSKZ3F20200191Molienda de tejidos
MetanolGuangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd20220519Configurar el fluido
de transferencia Mini-PROTEAN TetraBole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd552BR 233193
Espectrofotómetro de microplacas de espectro multiskan de electroforesisTECANSparkSe detectaron la absorbancia y concentración de proteína tisular
Guantes inteligentes con detección de presiónJinan Super Sense Intelligent Technology Co. LTDMiigloveSe utiliza para medir la fuerza de manipulación del operador
Membrana PVDFMerckMillipore CorporationIPVH00010 Western Blot
Centrífuga refrigeradaHettich Precision Technology (Zhuhai) Co., LTDMIKRO 220RCentrífuga
Cámara termográfica tres en unoFOTIRC226S (384 x 288)Medición de temperatura
Lisado RIPABeijing Solaibao Technology Co., LTD (Solarbio)R0010Tejido lítico
Oscilador termostático de baño de agua con pantalla digital SHA-CAChangzhou Aohua Instrument Co. LTDSHA-CASe utilizaron ratas jóvenes en hipoxia
Aparato de rotarod de fatiga de seis ratasShanghai Duoyi Industry Co., LTDDO01104RT703Se detectó la función motora de CP
Leche descremada en polvoGuangzhou Saiguo Biotechnology Co., LTD (BIOFROXX)1172GR500Alimento líquido confinante
SPF para críaSPF(Beijing)biotechnology co., Ltd.A1EC30005A1S4285266Las ratas hembras lactantes fueron alimentadas con
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Referencias

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