Actualmente, la angiografía con fluoresceína (AF) es el método preferido para identificar patrones de fuga en modelos animales de neovascularización coroidea (NVC). Sin embargo, la AF no proporciona información sobre la morfología vascular. Este protocolo describe el uso de la angiografía con verde de indocianina (ICGA) para caracterizar diferentes tipos de lesiones de NVC inducida por láser en modelos de ratón.
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Artículo de método
Caracterización de la morfología vascular de la degeneración macular neovascular asociada a la edad mediante angiografía con verde de indocianina
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Resumen
Resumen
La degeneración macular asociada a la edad (DMAE) es una de las principales causas de ceguera entre las personas mayores, y su prevalencia está aumentando rápidamente debido al envejecimiento de la población. La neovascularización coroidea (NVC) o DMAE húmeda, que representa entre el 10% y el 20% de todos los casos de DMAE, es responsable de un alarmante 80%-90% de la ceguera relacionada con la DMAE. Las terapias anti-VEGF actuales muestran respuestas subóptimas en aproximadamente el 50% de los pacientes. La resistencia al tratamiento anti-VEGF en pacientes con NVC a menudo se asocia con NVC arteriolar, mientras que los respondedores tienden a tener NVC capilar. Si bien la angiografía con fluoresceína (AF) se usa comúnmente para evaluar los patrones de fuga en pacientes con DMAE húmeda y modelos animales, no proporciona información sobre la morfología vascular de las NVC (NVC arteriolar vs. NVC capilar). Este protocolo introduce el uso de la angiografía con verde de indocianina (ICGA) para caracterizar los tipos de lesiones en modelos de ratón con CNV inducida por láser. Este método es crucial para investigar los mecanismos y las estrategias de tratamiento de la resistencia a los anti-VEGF en la DMAE húmeda. Se recomienda incorporar la AGIC junto con la AF para una evaluación exhaustiva de las características vasculares y de fuga de la NVC en estudios mecanicistas y terapéuticos.
Introducción
La degeneración macular asociada a la edad (DMAE) es una afección prevalente que conduce a una pérdida grave de la visiónen personas mayores. Solo en los Estados Unidos, se prevé que el número de pacientes con DMAE se duplique, llegando a casi 22 millones para 2050, en comparación con los 11 millones actuales. A nivel mundial, se espera que el número estimado de casos de DMAE alcance la asombrosa cifra de 288 millones en 20402.
La neovascularización coroidea (NVC), también conocida como DMAE "húmeda" o neovascular, puede tener efectos devastadores en la visión debido a la formación de vasos sa....
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Protocolo
Los experimentos con animales realizados en este estudio recibieron la aprobación de los Comités Institucionales de Cuidado y Uso de Animales (IACUC, por sus siglas en inglés) del Baylor College of Medicine. Todos los procedimientos se llevaron a cabo de acuerdo con las pautas descritas en la Declaración de la Asociación para la Investigación de la Visión y la Oftalmología (ARVO) para el uso de animales en la investigación oftálmica y de la visión. Para el presente estudio se utilizaron ratones machos y hembras C57BL/6J jóvenes (7-9 semanas) y viejos (12-16 meses). Los animales se obtuvieron de una fuente comercial (ver Tabla de Materiales).
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Resultados
Siguiendo el protocolo, se realizaron ICGA y FA en CNV inducida por láser en ratones C57BL/6J jóvenes (7-9 semanas) y viejos (12-16 meses). La AF proporciona información sobre la localización y fuga de las lesiones de NVC (Figura 1, paneles izquierdos), mientras que la AGIC revela la morfología vascular de las lesiones de NVC (Figura 1, paneles de la derecha). En ratones jóvenes, la NVC capilar domina las lesiones de NVC. Por el contrario, los ratones viejos exh.......
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Discusión
Este estudio demostró el uso de la angiografía con verde de indocianina (ICGA) para identificar la morfología vascular de la neovascularización coroidea arteriolar y capilar (NVC) en modelos de ratón con NVC inducida por láser. Las propiedades de la luz infrarroja y unida a la hemoglobina del colorante verde de indocianina (ICG) permitieron la detección de la morfología de la NVC, lo que es difícil de lograr mediante la angiografía con fluoresceína (AF), el método actual empleado por la comunidad investigadora.
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por subvenciones de la Fundación BrightFocus, la Fundación para la Investigación de la Retina, la Fundación Mullen y la Fundación Sarah Campbell Blaffer en Oftalmología para YF, la subvención básica de los NIH 2P30EY002520 para el Baylor College of Medicine y una subvención sin restricciones para el Departamento de Oftalmología del Baylor College of Medicine de Research to Prevent Blindness.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Jeringa de insulina 32-G MHC | Productos Médicos | NDC 08496-3015-01 | |
| Alexa Fluor 488 cabra anti-conejo anticuerpo secundario | Invitrogen | A11008 | |
| Anti-& alfa; músculo liso Anticuerpo de actina | Abcam | ab5694 | |
| Albúmina sérica bovina | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | SC-2323 | |
| Ratones C57BL/6J (7-9 semanas) | The Jackson Laboratory | Strain #:000664 | |
| Fluoresceína Sal de sodio | Sigma-Aldrich | MFCD00167039 | |
| Gaymar T Bomba T Sistema de terapia de calor | Gaymar | TP-500 Bomba de | calor de circulación de agua para la recuperación de ratones después de la obtención de imágenes |
| GenTeal Gel | Genteal | NDC 58768-791-15 | Gel |
| ocular lubricante transparenteGS-IB4 Alexa-Flour 568 conjugado | Invitrogen | I21412 | |
| Heidelberg Eye Explorerer | Heidelberg Engineering, Alemania | HEYEX2 | |
| Verde Indocianina | Pfaultz & Bauer | I01250 | |
| Ketamina | Vedco Inc. | NDC 50989-996-06 | |
| Paraformaldehído | Acros Organics | ||
| Solución oftálmica de clorhidrato de proparacaína (0,5%) | Sandoz | NDC 61314-016-01 | |
| Sistema de imagen multimodal Spectralis | Heidelberg Engineering, Alemania | SPECTRALIS HRA+OCT | |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | X100-1L | |
| solución oftálmica de tropicamida (1%) | Bausch & Lomb | NDC 24208-585-64 | Para la dilatación de las pupilas |
| Xylazine | Lloyd Laboratories | NADA 139-236 |
Referencias
- Fleckenstein, M., et al. Age-related macular degeneration. Nature Reviews Disease Primers. 7 (1), 1-25 (2021).
- Wong, W. L., et al. Global prevalence of age-related macular degeneration and diseas....
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Reimpresiones y permisos
