Este estudio describe un método rápido y eficaz para el análisis de componentes celulares de coágulos sanguíneos cerebrales a través de la disolución de coágulos, la tinción celular y el examen de sangre de rutina.
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Artículo de método
Un enfoque integral para analizar los componentes celulares de los coágulos sanguíneos cerebrales
* These authors contributed equally
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Resumen
Resumen
La trombosis cerebral, un coágulo de sangre en una arteria o vena cerebral, es el tipo más común de infarto cerebral. El estudio de los componentes celulares de los coágulos sanguíneos cerebrales es importante para el diagnóstico, el tratamiento y el pronóstico. Sin embargo, los enfoques actuales para estudiar los componentes celulares de los coágulos se basan principalmente en la tinción in situ , que no es adecuada para el estudio exhaustivo de los componentes celulares porque las células están firmemente envueltas en los coágulos. Estudios anteriores han aislado con éxito una enzima fibrinolítica (sFE) de Sipunculus nudus, que puede degradar la fibrina reticulada directamente, liberando los componentes celulares. Este estudio estableció un método integral basado en el sFE para estudiar los componentes celulares del trombo cerebral. Este protocolo incluye la disolución de coágulos, la liberación de células, la tinción de células y el examen de sangre de rutina. De acuerdo con este método, los componentes celulares podrían estudiarse cuantitativa y cualitativamente. Se muestran los resultados representativos de los experimentos realizados con este método.
Introducción
La enfermedad cerebrovascular es una de las tres principales enfermedades que pueden amenazar la salud humana, entre las cuales la enfermedad cerebrovascular isquémica representa más del 80%. La trombosis cerebral y la trombosis venosa cerebral son las enfermedades cerebrovasculares isquémicas más preocupantes en la actualidad, causadas principalmente por coágulos sanguíneos cerebrales 1,2. Si el tratamiento no se realiza adecuadamente, tendrá altas tasas de discapacidad y mortalidad y una alta tasa de recurrencia después del alta3.
Recientemente, un número c....
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Protocolo
La investigación se realizó de acuerdo con las directrices institucionales del Comité de Ética Médica de la Universidad de Huaqiao. Los coágulos sanguíneos cerebrales se extirparon quirúrgicamente y se recogieron en el Primer Hospital de Quanzhou, afiliado a la Universidad Médica de Fujian, con el consentimiento informado de los pacientes.
1. Pretratamiento de coágulos de sangre
- Coloque los coágulos en un plato limpio, agregue 5 ml de solución salina fisiológica con una pinza, agite el plato suavemente y retire la solución salina con una pipeta.
NOTA: Repita el enjuague tres veces. - Corta los coágulos ....
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Resultados
En la etapa inicial del proceso de degradación, se encontró que los coágulos de sangre tenían una estructura compacta roja y la solución de trabajo era incolora. Después de la incubación durante 30 minutos, la solución de trabajo se volvió de color rojo claro, lo que indicaba que las células sanguíneas cruzadas se liberaron en la solución de trabajo. La mayoría de los coágulos se disolvieron al alargar el tiempo de incubación a 5 h, y la solución de trabajo se volvió de color rojo claro. Por el contrario, no hubo cambios.......
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Discusión
El sFE es un agente fibrinolítico que puede degradar la fibrina de forma directa y eficaz12,16. Aquí, el sFE se empleó para degradar la fibrina reticulada de los coágulos sanguíneos cerebrales, liberar las células encerradas dentro de los coágulos y analizar los componentes celulares de los coágulos cualitativa y cuantitativamente. Los datos de la microscopía y el examen de sangre de rutina indicaron que las células encerradas se liberaron de los coágulos de sang.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen conflictos de intereses que revelar.
Agradecimientos
Esta investigación fue financiada por la Oficina de Ciencia y Tecnología de la ciudad de Xiamen (3502Z20227197) y la Oficina de Ciencia y Tecnología de la provincia de Fujian (No. 2019J01070, No.2021Y0027).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Placa de reacción de aglutinación | ROTEST | RTB-4003 | |
| Analizador de hematología automático | SYSMEX | XNB2 | |
| Esterilizador automático de vapor de presión vertical | SANYO | MLS-3750 | |
| Tubo de centrífuga (1,5 mL) | Biosharp | BS-15-M | |
| Banco limpio | AIRTECH | BLB-1600 | |
| Incubadora de temperatura constante | JINGHONG | JHS-400 | |
| Plato de cultivo (100 mm) | Horno | ||
| DHG | SENXIN | DGG-9140AD | |
| Balanza analítica electrónica | DENVER | TP-213 | |
| Membrana de filtro (0.22 y micro; m) | Millex GP SLGP033NK | ||
| Micro Centrífuga Refrigerada | Portaobjetos | H1650-W | |
| CITOGLAS | 01-30253-50 | ||
| Milli-Q Referencia | Millipore | Z00QSV0CN | |
| solución salina normal | Microscopio óptico CISEN | H37022337 | |
| Nikon | ECLIPSE E100 | ||
| Parafilm | Bemis | PM-996 | |
| solución salina tamponada con fosfato | Beyotime | C0221A | |
| Punta de pipeta (1 mL ) | Axygene | T-1000XT-C | |
| Punta de pipeta (200 µ L) | Pipeta Axygene | T-200XT-C | |
| (1 mL) | ZY18723 | Thermo Fisher Scientific | |
| (200 y micro; L) | Thermo Fisher Scientific | ZY20280 | |
| Bisturí | MARTOR | 23111 | |
| Oscilador de vórtice de tamaño pequeño | Kylin-Bell | VORTEX KB3 | |
| Pinza | hística | HKQS-180 | |
| Wright Solución de tinción | Beyotime | C0135-500ml |
Referencias
- Park, D. W., et al. Edoxaban versus dual antiplatelet therapy for leaflet thrombosis and cerebral thromboembolism after TAVR: The ADAPT-TAVR Randomized clinical trial. Circulation. 146 (6), 466-479 (2022).
- Devasagayam, S., Wyatt, B., Leyden, J., Kleinig, T.
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Reimpresiones y permisos
