Este protocolo describe el modelo de isquemia cerebral focal transitoria en ratones a través de la oclusión intraluminal de la arteria cerebral media. Además, se muestran ejemplos de evaluación de resultados mediante resonancia magnética y pruebas de comportamiento.
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Artículo de método
Modelo de oclusión transitoria de la arteria cerebral media de accidente cerebrovascular
En este artículo
Resumen
Resumen
El accidente cerebrovascular es una de las principales causas de muerte o discapacidad crónica en todo el mundo. Sin embargo, los tratamientos óptimos existentes se limitan a las terapias de reperfusión durante la fase aguda del ictus isquémico. Para obtener información sobre la fisiopatología del ictus y desarrollar enfoques terapéuticos innovadores, los modelos in vivo de ictus en roedores desempeñan un papel fundamental. La disponibilidad de animales modificados genéticamente ha impulsado especialmente el uso de ratones como modelos experimentales de ictus.
En los pacientes con accidente cerebrovascular, la oclusión de la arteria cerebral media (ACM) es una ocurrencia común. En consecuencia, el modelo experimental más prevalente es la oclusión intraluminal del ACM, una técnica mínimamente invasiva que no requiere craneectomía. Este procedimiento consiste en insertar un monofilamento a través de la arteria carótida externa (ECA) y hacerlo avanzar a través de la arteria carótida interna (ACI) hasta llegar al punto de ramificación de la ACM. Después de una oclusión arterial de 45 minutos, se retira el monofilamento para permitir la reperfusión. A lo largo del proceso, se monitoriza el flujo sanguíneo cerebral para confirmar la reducción durante la oclusión y la posterior recuperación tras la reperfusión. Los resultados neurológicos y tisulares se evalúan mediante pruebas conductuales y estudios de imágenes por resonancia magnética (IRM).
Introducción
El accidente cerebrovascular es una enfermedad devastadora que afecta aproximadamente a 15 millones de personas en todo el mundo anualmente, según la OMS. Alrededor de un tercio de los pacientes sucumben a la enfermedad, mientras que otro tercio experimenta una discapacidad permanente. El accidente cerebrovascular es una patología compleja que involucra varios tipos de células, como las células inmunitarias neurales y periféricas, la vasculatura y las respuestas sistémicas1. La intrincada red de reacciones desencadenadas por el accidente cerebrovascular a nivel de sistemas no se puede replicar actualmente utilizando modelos in vitro . ....
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Protocolo
El trabajo con animales se llevó a cabo siguiendo las leyes catalanas y españolas (Real Decreto 53/2013) y las Directivas Europeas, con la aprobación del Comité Ético de Experimentación Animal (CEEA) de la Universidad de Barcelona, y de los organismos reguladores locales de la Generalitat de Catalunya. Los estudios se informan de acuerdo con las directrices ARRIVE. Este procedimiento está diseñado para ser realizado en ratones adultos, a partir de las 8 semanas de edad, sin límite de edad. Aquí se proporcionan ejemplos del procedimiento quirúrgico desarrollado en ratones C57BL/6 de 10-12 semanas de edad. Se deben tener en cuenta las diferencias anatómicas en función d....
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Resultados
Existen diferentes enfoques para evaluar el resultado del procedimiento tMCAo. Aquí se utilizan métodos de neuroimagen (IRM) in vivo y pruebas de comportamiento.
Los ratones desarrollan lesiones isquémicas en el cerebro, afectando principalmente al territorio irrigado por el ACM ipsilateral a la oclusión, como el cuerpo estriado y la corteza dorsolateral. Existen varios métodos para determinar la extensión de la lesión, incluida la tinción tisular con cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazol.......
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Discusión
El procedimiento intraluminal de tMCAo es el modelo más utilizado de isquemia cerebral focal con reperfusión en investigación básica. Actualmente, los ratones son el modelo animal preferido debido a la disponibilidad de cepas modificadas genéticamente. Sin embargo, es esencial reconocer que los ratones modificados genéticamente y sus antecedentes genéticos pueden afectar la vascularización cerebral. La presencia de circulación colateral y anastomosis entre diferentes territorios arteriales puede influir significativament.......
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Divulgaciones
Los autores declaran no tener conflictos de intereses.
Agradecimientos
Estudio financiado por la subvención PID2020-113202RB-I00 financiada por el Ministerio de Ciencia e Innovación (MCIN)/Agencia Estatal de Investigación (AEI), Gobierno de España/10.13039/501100011033 y el Fondo Europeo de Desarrollo Regional (FEDER). Una manera de hacer Europa". NCC y MAR tenían becas predoctorales (PRE2021-099481 y PRE2018-085737, respectivamente) financiadas por MCIN/AEI/ 10.13039/501100011033 y por "Fondo Social Europeo (FSE) Invertir en tu futuro". Agradecemos a Francisca Ruiz-Jaén y Leonardo Márquez-Kisinousky por su apoyo técnico. Agradecemos el apoyo del centro de resonancia magnética del Institut d'Investigacions Biom....
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Sutura 6/0 | Arago | Ligaduras vasculares | |
| 6/0 sutura con aguja curva | Arago | Suturas cutáneas | |
| 9 mg/mL solución salina | Fresenius Kabi | CN616003 EC | Para hidratación |
| Sistema de anestesia | SurgiVet | ||
| Retractores romos, 1 mm de ancho | Fine Science Tools | 18200-09 | |
| Buprenorfine | Buprex | para alivio del dolor | |
| Pinza de aplicación de pinzas | Fine Science Tools | S& T CAF4 | |
| Dumont mini pinzas Fine | Science Tools | M3S 11200-10 | |
| Pinzas | Fine Science Tools | 91106-12 | |
| Pegamento | Loctite | Para pegar la sonda LDF al cráneo | |
| Medidor de fuerza de agarre | IITC Life Science Inc. | #2200 | |
| Isoflurano | B-Braun | CN571105.8 | |
| LDF Perimed | Perimed Periflux | System 5000 | |
| LDF Soportes de sonda Perimed | PH 07-4 | ||
| Cinta | |||
| Imán de resonancia magnética | Bruker BioSpin, Ettlingen, Alemania | BioSpec 70/30 escáner horizontal para animales | |
| Portaagujas con cortador de sutura | Fine Science Tools | 12002-14 | |
| Filamento de nylon | Doccol | 701912PK5Re | |
| Jaula de recuperación con almohadilla | |||
| Tijeras Sirgicales | Fine Science Tools | 91401-12 | |
| Kit cauterizador para recipientes pequeños | Fine Science Tools | 18000-00 | |
| Microscopio estereoscópico y luz fría | Leica | M60 | |
| Pinza de atado de sutura | Fine Science Tools | 18025-10 | |
| Termostato, sonda rectal y alfombrilla de ratón | Letica Science Instruments | LE 13206 | |
| Tijeras de resorte Vannas (filo de 4 mm) | Fine Science Tools | 15019-10 | |
| Pinzas vasculares | Fine Science Tools | 00396-01 |
Referencias
- Siddiqi, A. Z., Wadhwa, A. Treatment of acute stroke: current practices and future horizons. Cardiovascular Revascularization Medicine. 49, 56-65 (2023).
- Tamura, A., Graham, D. I., McCulloch, J., Teasdale, G. M.
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Reimpresiones y permisos
