Modelo de oclusión transitoria de la arteria cerebral media de accidente cerebrovascular

Summary

Este protocolo describe el modelo de isquemia cerebral focal transitoria en ratones a través de la oclusión intraluminal de la arteria cerebral media. Además, se muestran ejemplos de evaluación de resultados mediante resonancia magnética y pruebas de comportamiento.

Abstract

El accidente cerebrovascular es una de las principales causas de muerte o discapacidad crónica en todo el mundo. Sin embargo, los tratamientos óptimos existentes se limitan a las terapias de reperfusión durante la fase aguda del ictus isquémico. Para obtener información sobre la fisiopatología del ictus y desarrollar enfoques terapéuticos innovadores, los modelos in vivo de ictus en roedores desempeñan un papel fundamental. La disponibilidad de animales modificados genéticamente ha impulsado especialmente el uso de ratones como modelos experimentales de ictus.

En los pacientes con accidente cerebrovascular, la oclusión de la arteria cerebral media (ACM) es una ocurrencia común. En consecuencia, el modelo experimental más prevalente es la oclusión intraluminal del ACM, una técnica mínimamente invasiva que no requiere craneectomía. Este procedimiento consiste en insertar un monofilamento a través de la arteria carótida externa (ECA) y hacerlo avanzar a través de la arteria carótida interna (ACI) hasta llegar al punto de ramificación de la ACM. Después de una oclusión arterial de 45 minutos, se retira el monofilamento para permitir la reperfusión. A lo largo del proceso, se monitoriza el flujo sanguíneo cerebral para confirmar la reducción durante la oclusión y la posterior recuperación tras la reperfusión. Los resultados neurológicos y tisulares se evalúan mediante pruebas conductuales y estudios de imágenes por resonancia magnética (IRM).

Introduction

El accidente cerebrovascular es una enfermedad devastadora que afecta aproximadamente a 15 millones de personas en todo el mundo anualmente, según la OMS. Alrededor de un tercio de los pacientes sucumben a la enfermedad, mientras que otro tercio experimenta una discapacidad permanente. El accidente cerebrovascular es una patología compleja que involucra varios tipos de células, como las células inmunitarias neurales y periféricas, la vasculatura y las respuestas sistémicas¹. La intrincada red de reacciones desencadenadas por el accidente cerebrovascular a nivel de sistemas no se puede replicar actualmente utilizando modelos in vitro . ....

Protocol

El trabajo con animales se llevó a cabo siguiendo las leyes catalanas y españolas (Real Decreto 53/2013) y las Directivas Europeas, con la aprobación del Comité Ético de Experimentación Animal (CEEA) de la Universidad de Barcelona, y de los organismos reguladores locales de la Generalitat de Catalunya. Los estudios se informan de acuerdo con las directrices ARRIVE. Este procedimiento está diseñado para ser realizado en ratones adultos, a partir de las 8 semanas de edad, sin límite de edad. Aquí se proporcionan ejemplos del procedimiento quirúrgico desarrollado en ratones C57BL/6 de 10-12 semanas de edad. Se deben tener en cuenta las diferencias anatómicas en función d....

Results

Existen diferentes enfoques para evaluar el resultado del procedimiento tMCAo. Aquí se utilizan métodos de neuroimagen (IRM) in vivo y pruebas de comportamiento.

Los ratones desarrollan lesiones isquémicas en el cerebro, afectando principalmente al territorio irrigado por el ACM ipsilateral a la oclusión, como el cuerpo estriado y la corteza dorsolateral. Existen varios métodos para determinar la extensión de la lesión, incluida la tinción tisular con cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazol.......

Discussion

El procedimiento intraluminal de tMCAo es el modelo más utilizado de isquemia cerebral focal con reperfusión en investigación básica. Actualmente, los ratones son el modelo animal preferido debido a la disponibilidad de cepas modificadas genéticamente. Sin embargo, es esencial reconocer que los ratones modificados genéticamente y sus antecedentes genéticos pueden afectar la vascularización cerebral. La presencia de circulación colateral y anastomosis entre diferentes territorios arteriales puede influir significativament.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Sutura 6/0	Arago		Ligaduras vasculares
6/0 sutura con aguja curva	Arago		Suturas cutáneas
9 mg/mL solución salina	Fresenius Kabi	CN616003 EC	Para hidratación
Sistema de anestesia	SurgiVet
Retractores romos, 1 mm de ancho	Fine Science Tools	18200-09
Buprenorfine	Buprex		para alivio del dolor
Pinza de aplicación de pinzas	Fine Science Tools	S& T CAF4
Dumont mini pinzas Fine	Science Tools	M3S 11200-10
Pinzas	Fine Science Tools	91106-12
Pegamento	Loctite		Para pegar la sonda LDF al cráneo
Medidor de fuerza de agarre	IITC Life Science Inc.	#2200
Isoflurano	B-Braun	CN571105.8
LDF Perimed	Perimed Periflux	System 5000
LDF Soportes de sonda Perimed		PH 07-4
Cinta
Imán de resonancia magnética	Bruker BioSpin, Ettlingen, Alemania		BioSpec 70/30 escáner horizontal para animales
Portaagujas con cortador de sutura	Fine Science Tools	12002-14
Filamento de nylon	Doccol	701912PK5Re
Jaula de recuperación con almohadilla
Tijeras Sirgicales	Fine Science Tools	91401-12
Kit cauterizador para recipientes pequeños	Fine Science Tools	18000-00
Microscopio estereoscópico y luz fría	Leica	M60
Pinza de atado de sutura	Fine Science Tools	18025-10
Termostato, sonda rectal y alfombrilla de ratón	Letica Science Instruments	LE 13206
Tijeras de resorte Vannas (filo de 4 mm)	Fine Science Tools	15019-10
Pinzas vasculares	Fine Science Tools	00396-01