Enriquecimiento rápido y eficiente de la microglía de la médula espinal de ratón

Claudia I Gutiérrez-Román; María E Meléndez Camargo; Cuauhtémoc C García Rojas; Miguel Jimenez Olvera; Sandra H Gutiérrez Román; Oscar Medina-Contreras

doi:10.3791/65961

Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.

Artículo de método

Enriquecimiento rápido y eficiente de la microglía de la médula espinal de ratón

2.6K visualizaciones

⸱

DOI:

10.3791/65961

⸱

22 de septiembre de 2023

Claudia I Gutiérrez-Román¹^,² , María E Meléndez Camargo² , Cuauhtémoc C García Rojas³ , Miguel Jimenez Olvera⁴ , Sandra H Gutiérrez Román⁵ , Oscar Medina-Contreras¹

¹Epidemiology, Endocrinology & Nutrition, Mexico Children's Hospital, ²Pharmacy Department, National School of Biological Sciences, National Polytechnic Institute, ³Graduate Department, Dr. Eduardo Liceaga General Hospital of Mexico, ⁴Pain Clinic and Palliative Care, Dr. Eduardo Liceaga General Hospital of Mexico, ⁵General Surgery Service, Metropolitan Angeles Hospital

En este artículo

Resumen

La microglía está considerada como una de las células más versátiles del cuerpo, capaz de adaptarse morfológica y funcionalmente. Su heterogeneidad y multifuncionalidad permiten el mantenimiento de la homeostasis cerebral, a la vez que se relacionan con diversas patologías neurológicas. Aquí se describe una técnica para purificar la microglía de la médula espinal.

Resumen

La columna vertebral define a un vertebrado y da forma al canal espinal, una cavidad que encierra y protege la médula espinal. El desarrollo y la función adecuados del sistema nervioso central de los mamíferos dependen en gran medida de la actividad de los macrófagos residentes conocidos como microglía. La microglía muestra heterogeneidad y multifuncionalidad, lo que permite una expresión génica y un comportamiento distintos dentro de la médula espinal y el cerebro. Numerosos estudios han explorado la función de la microglía cerebral, detallando ampliamente los métodos de purificación. Sin embargo, la purificación de la microglía de la médula espinal en ratones carece de una descripción completa. Por el contrario, la utilización de una colagenasa altamente purificada, a diferencia de un extracto sin refinar, carece de información dentro de los tejidos del sistema nervioso central. En este estudio, se extirpó la columna vertebral y la médula espinal de ratones C57BL/6 de 8-10 semanas de edad. La digestión posterior empleó una colagenasa altamente purificada, y la purificación de la microglía utilizó un gradiente de densidad. Las células se sometieron a tinción para citometría de flujo, evaluando la viabilidad y pureza a través de la tinción de CD11b y CD45. Los resultados arrojaron una viabilidad media del 80% y una pureza media del 95%. En conclusión, la manipulación de la microglía de ratón implicó la digestión con una colagenasa altamente purificada, seguida de un gradiente de densidad. Este enfoque produjo efectivamente poblaciones sustanciales de microglía de la médula espinal.

Introducción

La característica definitoria de los vertebrados es la columna vertebral o columna vertebral, en la que la notocorda ha sido reemplazada por una secuencia de huesos segmentados llamados vértebras, divididos por discos intervertebrales. Esta sucesión de material óseo da forma al canal espinal, una cavidad que encierra y protege la médula espinal¹. En el género Rodentia, la columna vertebral suele estar formada por siete vértebras cervicales, trece vértebras torácicas, seis vértebras lumbares y un número variable de vértebras caudales ^2,3. La longitud de la médula espinal es simi....