<ol><li> Construir una cámara de flujo como se muestra en el video. Asegúrese de que el sello de parafina es escaso y el uso de cubreobjetos se lavan. </li><li> Incubar actina agente fijador en la cámara para &#39;10.5. </li><li> Bloquear no específicas sitios de unión sobre el cubreobjetos con una proteína de bloqueo. </li><li> Actina polimeriza dentro de la cámara de flujo en G-actina en la polimerización de amortiguamiento. </li><li> Lavado de actina polimerizada por el flujo en exceso de tampón. </li></ol>

monitoreo de actina desmontaje con la microscopía de time-lapse

Monitoring Actin Disassembly with Time-lapse Microscopy

Monitoreo de actina desmontaje con la Microscopía de Time-lapse

Vale, lo que me gustaría hacer hoy es mostrarle cómo construir una cámara de flujo, una cámara de fusión para imágenes en un microscopio invertido. A continuación, creo dos espacios utilizando película. Entonces, tomo la película de parafina y la corto en tiras pequeñas.A continuación, voy a hacer esto, lo cual básicamente formará los canales para las paredes, y los seco con una corriente de aire inclinada. Pongo el cubreobjetos encima del para, y aquí está el producto terminado. Luego lo caliento en un bloque calefactor para fundir el para y, básicamente, crear un sello.Lo que tenemos aquí es el vidrio de cubreobjetos, y encima de este vidrio de cubreobjetos hay dos capas de phim, como se observa justo aquí. Y encima de esto, nuevamente, hay un cubreobjetos de 22 por 22 milímetros. Este de aquí, que presioné contra el param para lograr el sellado.Vale, el líquido entra en una dirección aquí y puedo extraerlo con un papel filtro en esta dirección. Y en un momento les mostraré cómo hacerlo. Lo que me gusta hacer es colocarlo en una cámara humidificada, que es muy sencilla.Tome dos tipos de tiras elevadas y coloque un filtro de papel debajo. Y para mantenerlo estable, como yo hago, coloque la cubierta, la lámina de cubreobjetos, sobre la cámara de flujo. Ahora, la forma en que se introduce una solución en la cámara es colocando simplemente la punta de la pipeta en la entrada de la cámara y luego agregar la solución gota a gota.Ahora lo que hago es incubar la cámara con la tapa cerrada durante 10 minutos. Lo que suelo hacer para extraer el líquido del otro lado es utilizarlo: tomo un papel filtro y lo corto en tiras delgadas como esta. Y tomo una de estas tiras delgadas y aplico simultáneamente la solución en la entrada, mientras coloco el papel filtro en la salida para absorber el intercambio, la solución.Así que verá el líquido fluyendo a través de la solución. Luego espero cinco minutos para el cierre medio. Ahora lo que estoy listo para hacer es colocar efectivamente la actina, y la actina, que en realidad tengo que polimerizar, la polimerizo dentro de la cámara de flujo y es exactamente el mismo procedimiento que antes.Entonces, debido a esto, y ahora que la acción está polimerizada, lavo todo el exceso de acción no polimerizada utilizando un gran volumen de tampón. Aquí tengo aproximadamente cien microlitros, lo que equivale a varios volúmenes de la cámara de reacción de tampón. Simplemente, ya saben, cuando el papel filtro se satura, tengo que cambiar la dirección. ¿De acuerdo?Y así estoy listo para realizar la imagenología con esto. Entonces, la cámara de perfusión con actina unida a ella. Ahora tomo el portaobjetos, lo coloco debajo del microscopio, y dado que estoy realizando la imagenología con un objetivo de inmersión en aceite, voy a colocar un poco de aceite de inmersión sobre la superficie superior del cubreobjetos, en contacto directo, de manera que la solución tampón, la proteína o cualquier cosa sobre la actina dentro quede adecuadamente cubierta.Lo que hago es que puedo cambiar efectivamente el lado de la solución mientras realizo la adquisición de imágenes con lapso de tiempo. Así.

Monitoreo de actina desmontaje con la Microscopía de Time-lapse

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