<ol><li> Construir una cámara de flujo como se muestra en el video. Asegúrese de que el sello de parafina es escaso y el uso de cubreobjetos se lavan. </li><li> Incubar actina agente fijador en la cámara para &#39;10.5. </li><li> Bloquear no específicas sitios de unión sobre el cubreobjetos con una proteína de bloqueo. </li><li> Actina polimeriza dentro de la cámara de flujo en G-actina en la polimerización de amortiguamiento. </li><li> Lavado de actina polimerizada por el flujo en exceso de tampón. </li></ol>

monitoreo de actina desmontaje con la microscopía de time-lapse

Monitoreo de actina desmontaje con la Microscopía de Time-lapse

Bien, lo que me gustaría hacer hoy es mostrarles cómo construir una cámara de flujo, una cámara de fusión para obtener imágenes en un microscopio vertical. Lo que hago entonces es crear dos espacios usando película. Así que lo que hago es tomar la película para, la corto en tiras pequeñas.A continuación, esto formará básicamente los canales para las paredes, y los seco con un aire inclinado. Puse la tapa encima del para, y aquí está el terminado. Luego lo caliento en un bloque de calor para derretir el parámetro y, básicamente, crear un sello.Entonces, lo que es esto, es el vidrio de cobertura aquí, y luego encima del vidrio de cobertura hay dos capas de phim como ven aquí. Y luego, encima de esto, de nuevo, hay un cubreobjetos de 22 por dos metros de dos milésimas de pulgada. Este de aquí, que presioné contra el param para que cayera el sello.Bien, entonces el líquido va en una dirección aquí y puedo succionarlo con un papel de filtro aquí en esta dirección. Y te mostraré cómo hacerlo en un momento. Así que lo que me gusta hacer es ponerlo en una cámara humidificada, que es muy sencillo.Tome dos tipos de tiras elevadas y tenga un filtro de papel debajo. Y para mantenerlo ruidoso mientras yo, puse la cubierta, el deslizamiento de la cubierta en la cámara de flujo. Ahora, la forma en que se introduce una solución en la cámara es que simplemente se coloca la punta de la pipeta en la entrada de la cámara y se divide.Ahora lo que hago es incubar la cámara con la tapa cerrada durante 10 minutos. Lo que suelo hacer para succionar el líquido del otro lado es usarlo, conseguir un papel de filtro y cortarlo en tiras finas como esta. Y tomo una de estas tiras delgadas y aplico simultáneamente la solución en la entrada mientras pongo el papel de filtro en la salida para succionar el intercambio, la solución.Así que verás que el líquido fluye a través de la solución. Y luego espero cinco minutos para el cierre medio. Ahora, lo que estoy listo para hacer es poner esa actina y la actina, en realidad tengo que polimerizar, polimerizo dentro de la cámara de flujo y son los mismos procedimientos antes.Entonces, porque así, y luego ahora que la acción está polimerizada, lavo todo el exceso de acción no polimerizada usando un gran volumen de tampón. Así que aquí tengo alrededor de cien microlitros y son unos pocos volúmenes de tampón de la cámara de reacción. Simplemente, ya sabes, cuando el papel de filtro se satura, tengo que cambiar la dirección. ¿Bien?Y por eso estoy listo para hacer imágenes con esto. Por lo tanto, cámara de perfusión con actina unida a ella. Ahora tomo el portaobjetos, lo monto bajo el microscopio y, dado que estoy tomando imágenes con un objetivo de aceite, voy a poner un poco de aceite de inmersión en la superficie superior de la cubierta, al tacto con la hierba, como una solución o proteína o cualquier cosa que actúe en el interior.Así que lo que hago es que puedo intercambiar el lado de la solución mientras hago las imágenes de lapso de tiempo. Como tal.

Monitoreo de actina desmontaje con la Microscopía de Time-lapse

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