En este trabajo, presentamos un protocolo para establecer un modelo de oclusión distal de la arteria cerebral media (dMCAO) mediante electrocoagulación transcraneal en ratones C57BL/6J y evaluamos el comportamiento neurológico y las características histopatológicas posteriores.
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Artículo de método
Inducción de ictus isquémico agudo en ratones mediante la técnica de oclusión de la arteria media distal
* These authors contributed equally
En este artículo
Resumen
Resumen
El accidente cerebrovascular isquémico sigue siendo la causa predominante de mortalidad y deterioro funcional entre las poblaciones adultas de todo el mundo. Solo una minoría de los pacientes con accidente cerebrovascular isquémico son elegibles para recibir tratamiento de trombólisis intravascular o trombectomía mecánica dentro del período de tiempo óptimo. Entre los supervivientes de accidentes cerebrovasculares, alrededor de dos tercios sufren disfunciones neurológicas durante un periodo prolongado. El establecimiento de un modelo experimental de accidente cerebrovascular isquémico estable y repetible es extremadamente importante para investigar más a fondo los mecanismos fisiopatológicos y desarrollar estrategias terapéuticas efectivas para el accidente cerebrovascular isquémico. La arteria cerebral media (ACM) representa la localización predominante del accidente cerebrovascular isquémico en los seres humanos, y la oclusión del ACM es el modelo más utilizado de la isquemia cerebral focal. En este protocolo, describimos la metodología para establecer el modelo de oclusión distal de MCA (dMCAO) mediante electrocoagulación transcraneal en ratones C57BL/6. Dado que el sitio de oclusión se localiza en la rama cortical de la ACM, este modelo genera una lesión infartada moderada restringida a la corteza. La caracterización neurológica, conductual e histopatológica ha demostrado disfunción motora visible, degeneración neuronal y activación pronunciada de la microglía y los astrocitos en este modelo. Por lo tanto, este modelo de ratón dMCAO proporciona una herramienta valiosa para investigar el ictus isquémico y el valor de la popularización.
Introducción
El accidente cerebrovascular es una enfermedad cerebrovascular aguda frecuente caracterizada por una alta incidencia de discapacidad y mortalidad1. De todos los casos de ictus, casi el 80% pertenecen a ictus isquémico2. Hasta ahora, la trombólisis intravenosa sigue siendo uno de los pocos enfoques productivos para el tratamiento del accidente cerebrovascular isquémico agudo. Sin embargo, la efectividad del tratamiento trombolítico está limitada por la estrechez del tiempo efectivo y la ocurrencia de transformación hemorrágica3. En la fase de rehabilitación a largo plazo después de un accidente cer....
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Protocolo
El protocolo experimental fue aprobado por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Jianghan y se llevó a cabo de acuerdo con las Directrices Éticas en Animales de Experimentación emitidas por el Centro para el Control de Enfermedades de China. En este protocolo se utilizaron ratones machos adultos C57BL/6J, de 10 semanas de edad, con un peso de 24-26 g. Todos los ratones fueron alojados bajo un ambiente controlado de ciclo de luz/oscuridad de 12 horas con comida y agua ad libitum.
1. Preparación preoperatoria
NOTA: Los instrumentos y equipos clave necesari....
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Resultados
Los instrumentos clave utilizados para realizar el dMCAO son el conjunto de instrumentos microquirúrgicos, el vaporizador de isoflurano y el generador de electrocoagulación microquirúrgica monopolar que se muestra en la Figura 1. El procedimiento experimental de este estudio se ilustra en la Figura 2. En resumen, se empleó una pequeña craneotomía de ventana ósea para exponer el ACM distal, que posteriormente se coaguló para inducir isquemia cerebral focal perman.......
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Discusión
En el protocolo actual del modelo de electrocoagulación craneotomía dMCAO, los procedimientos quirúrgicos se realizan con una invasividad mínima, en la que solo se separa una porción del músculo temporal para mitigar los efectos adversos sobre la función masticatoria. Todos los ratones se recuperaron bien después del procedimiento, sin que se observaran casos de dificultades para alimentarse. El ACM se puede discernir fácilmente en el hueso temporal del ratón, lo que facilita la identificación precisa de las ubicaciones .......
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Divulgaciones
Los autores no tienen intereses contrapuestos que revelar.
Agradecimientos
Este estudio contó con el apoyo de las subvenciones de la Fundación de Ciencias de la Naturaleza de la provincia de Hubei (2022CFC057).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolio (TTC) | Sigma-Aldrich | 108380 | Colorante para tinción de TTC |
| Placa de cultivo de 24 pocillos | Corning (EE. UU.) | CLS3527 | Recipiente para tinción |
| de TTC con paraformaldehído al 4% | Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd. | G1101 | Fijación de tejidos |
| 5% albúmina sérica bovina | Wuhan BOSTER Bio Co., Ltd. | AR004 | Bloqueo de antígeno inespecífico |
| 5-0 Sutura de ácido poliglicólico | Jinhuan Medical Co., Ltd | KCR531 | Material para cirugía |
| Máquina de anestesia | Midmark Corporation | VMR | Animal anestesiado |
| Medio de montaje antidecoloración | Beyotime Biotech | P0131 | Sello para tinción de IF |
| Automatización-deshidratación de tejidos máquina | Leica Biosystems (Alemania) | TP1020 | Tejido deshidratado |
| Crema depilatoria | Veet (Francia) | 20220328 | Material para cirugía |
| Diclofenaco sodio gel | Wuhan Ma Yinglong Pharmaceutical Co., Ltd. | H10950214 | Analgesia para animales |
| Punta de broca (0,8 mm) | Rwd Life Science Co., Ltd. | Equipo para cirugía | |
| Solución de tinción de eosina | Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd. | G1001 | Tinte para H& Tinción E |
| Ungüento para los ojos | Guangzhou Pharmaceutical Co., Ltd | H44023098 | Material para cirugía |
| Microscopio de fluorescencia | Olympus (Japón) | BX51 | Adquisición de imágenes |
| GFAP Anticuerpo monoclonal de ratón | Cell Signaling Technology Inc. (Danvers, MA, EE. UU.) | 3670 | Anticuerpo primario para la tinción de FI |
| Cabra anti-ratón Alexa 488-IgG conjugada | Cell Signaling Technology Inc. (Danvers, MA, EE. UU.) | 4408 | Segundo anticuerpo para tinción de IF |
| Cabra anti-conejo Alexa 594-conjugado IgG | Cell Signaling Technology Inc. (Danvers, MA, EE. UU.) | 8889 | Segundo anticuerpo para tinción de FI |
| Medidor de fuerza de agarre | Shanghai Xinruan Information Technology Co., Ltd. | XR501 | Equipo para prueba de comportamiento |
| Solución de tinción de hematoxilina | Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd. | G1004 | Tinte para H& Tinción E |
| Iba1 Anticuerpo monoclonal de conejo | Abcam | ab178846 | Anticuerpo primario para la tinción de FI |
| Isoflurano | Rwd Life Science Co., Ltd. | R510-22-10 | Medidor |
| flujo sanguíneo láser doppler | Moor Instruments (Reino Unido) | moorVMS Monitoreo del | flujo sanguíneo |
| Meloxicam | Boehringer-Ingelheim | J20160020 Analgesia para animales | |
| Microdrill | Rwd Life Science Co., Ltd. | 78001 | Equipo para cirugía |
| Juego de instrumentos microquirúrgicos | Rwd Life Science Co., Ltd. | SP0009-R | Equipo para cirugía |
| Microtomo | Thermo Fisher Scientific (EE. UU.) | HM325 | Producción de secciones de tejido |
| Cuchilla de micrótomo | Leica Biosystems (Alemania) | 819 | Producción de secciones de tejido |
| Generador de electrocoagulación monopolar | Spring Scenery Medical Instrument Co., Ltd. | CZ0001 | Equipo para cirugía |
| Pomada de mupirocina | Tianjin Smith Kline & Laboratorios French Ltd. | H10930064 | Antiinfección para animales |
| Anticuerpo monoclonal NeuN Rabbit | Cell Signaling Technology Inc. (Danvers, MA, EE. UU.) | 24307 | Anticuerpo primario para la tinción de FI |
| Bálsamo neutro | Absenta Bioscience | abs9177 | Sello para H& E tinción |
| de inclusión de parafina | Thermo Fisher Scientific (EE. UU.) | EC 350 | Producir bloques de parafina |
| Pentobarbital sódico | Sigma-Aldrich | P3761 | Animal eutanasiático |
| Solución salina tamponada con fosfato | Shanghai Beyotime Biotech Co., Ltd | C0221A | Enjuague para la sección de pañuelos |
| Afeitadora | Shenzhen Codos Electrical Appliances Co.,Ltd. | CP-9200 | Equipo para cirugía |
| Solución de citrato de sodio | Shanghai Beyotime Biotech Co., Ltd. | P0083 | Recuperación de antígeno para tinción de FI |
Referencias
- Patel, P., Yavagal, D., Khandelwal, P. Hyperacute management of ischemic strokes: JACC Focus Seminar. J Am Coll Cardiol. 75 (15), 1844-1856 (2020).
- GBD 2016 Stroke Collaborators. Global, regional, and national burde....
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Reimpresiones y permisos
