El artículo presenta métodos para el cultivo larvario del gasterópodo Crepidula fornicata en un sistema a escala de laboratorio de pequeño volumen y en un sistema de mesocosmos de agua de mar ambiental que se puede implementar en el campo.
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Artículo de método
Cultivo en Laboratorio y Campo de Larvas de la Lapa Zapatilla, Crepidula fornicata
En este artículo
Resumen
Resumen
El molusco gasterópodo caliptídico, Crepidula fornicata, ha sido ampliamente utilizado para estudios de biología, fisiología y ecología del desarrollo de las larvas. Las larvas veliger incubadas de esta especie se recolectaron mediante sifón en un tamiz después de la liberación natural por parte de los adultos, se distribuyeron en el cultivo a una densidad de 200/L y se alimentaron con Isochrysis galbana (cepa T-ISO) a 1 x 105 células/mL. Se documentó el crecimiento de la cáscara y la adquisición de competencia para la metamorfosis en larvas hermanas criadas en cultivos ventilados de 800 mL diseñados para el equilibrio con el aire ambiente o con mezclas de gases atmosféricos definidas. Contrastando con estas condiciones de cultivo de laboratorio; También se recogieron datos de crecimiento y competencia de larvas criadas en un mesocosmos de agua de mar ambiental de 15 L situado en una población de campo de adultos reproductivos. Las tasas de crecimiento y el momento de la competencia metamórfica en los cultivos de laboratorio fueron similares a los reportados en estudios publicados anteriormente. Las larvas criadas en el mesocosmos de campo crecieron mucho más rápido y se metamorfosearon antes de lo reportado en cualquier estudio de laboratorio. En conjunto, estos métodos son adecuados para explorar el desarrollo larvario en condiciones controladas predeterminadas en el laboratorio, así como en condiciones naturales en el campo.
Introducción
La lapa zapatilla, Crepidula fornicata (Gastropoda: Calyptraeidae), está bien representada en la literatura de investigación actual e histórica debido a su utilidad como modelo de desarrollo y debido a sus impactos generalizados como especie invasora. Sirvió como un ejemplo fundamental del desarrollo espiraliano en la era clásica de la embriología experimental1 y ha experimentado un renacimiento del interés con la aplicación de imágenes modernas y herramientas genómicas para diseccionar los mecanismos del desarrollo temprano de los lofototocozoos 2,3. En el otro extremo de su h....
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Protocolo
1. Maniobras rutinarias para el establecimiento y mantenimiento de cultivos larvarios de C. fornicata
NOTA: Este método comienza con un frasco de un galón (3.8 L) de agua de mar que contiene C. fornicata adulta que acaba de liberar larvas de veliger incubadas. Los adultos pueden ser recolectados en el campo u obtenidos de un proveedor que se indica en la Tabla de Materiales. Los adultos son hermafroditas protándricos que viven en pilas de apareamiento con hembras incubadoras sésiles en la parte inferior de la pila. No rompa las pilas de adultos. La estacionalidad de la reproducción y los mét....
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Resultados
El crecimiento larvario y la adquisición de competencia para la metamorfosis se midieron en 4 réplicas simultáneas de los cultivos ventilados de 800 mL, cada uno con 160 larvas, derivadas de un lote de larvas hermanas que eclosionaron de una sola masa de huevos y que fueron alimentadas con Isochrysis galbana a una densidad de 1 x 105 células/mL. El pH fue de 7.9-8.0, la temperatura de 20-21 °C y la salinidad de 30-31 ppt. También se determinó el crecimiento y la metamorfosis con un lote diferente de l.......
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Discusión
Aunque las larvas de C. fornicata son relativamente fáciles de cultivar en comparación con otras larvas marinas planctotróficas, la atención a los fundamentos de las buenas prácticas de cultivo sigue siendo esencial17,19. Las larvas sanas deben comenzar a alimentarse inmediatamente después de la eclosión. Esto se verifica fácilmente al día siguiente de la eclosión observando sus intestinos llenos, repletos de células de algas, utilizando un microscopio d.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de intereses que denunciar.
Agradecimientos
El desarrollo inicial del sistema de cultivo ventilado de bajo volumen fue apoyado en parte por la Fundación Nacional de Ciencias (CRI-OA-1416690 a Dickinson College). La Dra. Lauren Mullineaux amablemente proporcionó instalaciones de laboratorio en la Institución Oceanográfica Woods Hole, donde se recopilaron los datos presentados para este sistema (Figura 4).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Cucharón, Polietileno, 7 galones | US Plastic | 16916 | para mesocosmos |
| Crepidula fornicata | Laboratorio de Biología Marina, Centro de Recursos Marinos | 760 | reproductores adultos |
| Pegamento termofusible, Infinity Supertac 500 | Hotmelt.com | INFINITY IM-SUPERTAC-500-12-1LB | bueno para pegar polietileno |
| Tarro, vidrio, 32 oz, con tapa de polipropileno | Uline | S-19316P-W | para cultivos ventilados de 800 mL |
| malla Nitex, 236 y micro; m | Dynamic Aqua Supply Ltd. | NTX236-136 | para mesocosmos |
| Tuerca, hexagonal, nylon, rosca 10-32 | Home Depot | 1004554441 | para sujetar púas de tubos |
| Remaches, nylon, ciegos, 15/64" de diámetro, rango de agarre de 5/32"-5/16", paquete de 8 | autopartes NAPA | BK 6652844 | Se necesitan 4 paquetes por mesocosmos |
| Lengüeta de tubo de 1/8" x 10-32 rosca | US Plastic | 65593 | Se necesitan 2 por frasco |
| de cultivoTubería, polietileno, 2,08 mm de diámetro exterior | Fisher Scientific | 14-170-11G | para ventilar el flujo de gas dentro de un frasco de cultivo |
| Tubería, Tygon, 1/8"x3/16"x1/32" | US Plastic | 57810 | se adapta a las lengüetas para ventilar cultivos |
Referencias
- Conklin, E. G. The embryology of Crepidula: a contribution to the cell lineage and early development of some marine gastropods. Gasteropods. , (1897).
- Henry, J. J., Collin, R., Perry, K. J. The slipper snail, Crepidula: an emerging lophotrochozoan mod....
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Reimpresiones y permisos
