Se describe un procedimiento sencillo para la cría de Delia antiqua axénica con dietas estériles semifermentadas. Solo se detectó una cepa de Wolbachia en cada estadio de D. antiqua axénica mediante PCR.
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Artículo de método
Se describe un procedimiento sencillo para la cría de Delia antiqua axénica con dietas estériles semifermentadas. Solo se detectó una cepa de Wolbachia en cada estadio de D. antiqua axénica mediante PCR.
Los insectos axénicos se obtienen a partir de sistemas de cría artificial estériles utilizando medios estériles. Estos insectos, caracterizados por su pequeño tamaño, ciclo de crecimiento corto y bajos requerimientos de alimento, son ideales para estudiar la relación entre microorganismos y hospedadores. La microbiota intestinal influye significativamente en las características fisiológicas de los insectos huéspedes, y la introducción de cepas específicas en los insectos axénicos proporciona un método para verificar las funciones microbianas intestinales. Delia antiqua, una plaga amenazante del orden Diptera, la familia Anthomyiidae y el género Delia, se alimenta principalmente de cebollas, ajos, puerros y otras verduras de la familia Liliaceae. Sus larvas se alimentan de los bulbos, causando la pudrición, el marchitamiento e incluso la muerte de plantas enteras. Al criar larvas axénicas, se pueden realizar estudios de seguimiento para observar los efectos de la microflora intestinal en el crecimiento y desarrollo de D. antiqua. A diferencia del método que implica la eliminación de antibióticos de los microbios asociados, este artículo presenta un enfoque de bajo costo y alta eficiencia para la cría de D. antiqua axénica. Después de la esterilización superficial de los huevos de D. antiqua , se utilizaron dietas estériles semifermentadas para criar larvas, y el estado axénico de D. antiqua se verificó mediante ensayos dependientes e independientes del cultivo. En conclusión, la combinación de la esterilización de huevos de insectos y la preparación de dietas estériles para el cultivo de larvas ha permitido el desarrollo de un método eficiente y sencillo para la obtención de D. antiqua axénica. Este método proporciona un enfoque poderoso para estudiar las interacciones entre insectos y microflora.
Los animales axénicos, definidos como animales en los que no se pueden detectar microorganismos o parásitos viables, son modelos experimentales valiosos para estudiar las interacciones huésped-microorganismo 1,2. Los insectos, el grupo más grande de invertebrados, pueden formar relaciones simbióticas con los microorganismos3. Los insectos axénicos se pueden utilizar para estudiar las interacciones huésped-simbionte en sistemas simbióticos4. Por ejemplo, Nishide et al.5 establecieron un procedimiento práctico de cría estéril para el gusano ....
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D. antiqua se obtienen del campo de Fanzhen, Taian.
1. Preparación de dietas estériles
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Las etapas de la vida de D. antiqua se representan en la Figura 4. El ciclo de vida completo comprende huevos, larvas, pupas (Figura 4C) y adultos (Figura 4D). Se cultivan en tubos de centrífuga estériles, y su aparición y tasa de supervivencia son indistinguibles de las de D. antiqua criada en condiciones no axénicas. Los tiempos de crecimiento y desarrollo para cada etapa de D. antiqua se pueden encontra.......
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Los insectos poseen una microbiota intestinal muy compleja20,21, lo que hace necesario el uso de insectos axénicos inoculados con cepas microbianas intestinales específicas para estudiar las interacciones insecto-microorganismo. La preparación de insectos axénicos es crucial para este tipo de esfuerzos de investigación. El tratamiento con antibióticos es un método utilizado para eliminar la microbiota intestinal. Por ejemplo, Jung y Kim, de22
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Los autores no tienen conflictos de intereses que revelar.
Este trabajo contó con el apoyo de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (32272530), el Proyecto de Nuevas Veinte Políticas para la Universidad de Jinan (2021GXRC040), los Grandes Proyectos de Innovación Científica y Tecnológica en la Provincia de Shandong (2021TZXD002) y el Proyecto de Integración de la Ciencia y la Educación de la Universidad Tecnológica de Qilu (2022PYI009, 2022PY016, 2022PT105).
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| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 0,22 y mu; Botella con filtro M | Thermo Scientific | 450-0045 | |
| 0.22 μ M Filtro de jeringa | Biosharp | BS-QT-011 | |
| Tamiz de malla 100 | Zhejiang Shangyu Jinding Fábrica de tamiz estándar | Sin números | |
| 1x solución PBS | Solarbio | P1020 | |
| 2x Taq PCR Master Mix | GENVIEW | GR1113-1ML | |
| 5.2% NaClO solución | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | ||
| matraz cónico de 500 mL | Thermo Scientific | 4103-0500 | |
| 50 mL tubo de centrífuga ventilado | JET BIOFIL | BRT-011-050 | |
| 50x tampón TAE | GENVIEW | GT1307 | |
| Polvo de agar | Ding Guo | DH010-1.1 | |
| Incubadora bioquímica | STIK | ||
| Tamiz de células | SAINING | 5022200 | |
| Cloruro de colina | Sangon Biotech | A600299-0100 | |
| ddH2O | Ding Guo | PER018-2 | |
| Mortero de molienda desechable | JET BIOFIL | CSP-003-002 | |
| Kit de extracción de ADN | Sangon Biotech | B518221-0050 | |
| Marcador de ADN | Sangon Biotech | B600335-0250 | |
| Absoluto de etanol | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | ||
| Papel de filtro | NEWSTAR | 1087309025 | |
| Procesador de alimentos | Guangdong Midea Life Electric Appliance Manufacturing Co., Ltd. | ||
| Iluminado incubadora | Shanghai ESTABLECER Instrumentación Co., Ltd. | ||
| Ácido L-ascórbico | Sangon Biotech | A610021-0100 | |
| Esparcidor en forma de L | SAINING | 6040000 | |
| Medio de agar nutriente | Hope Bio | HB0109 | |
| Tijeras | Bing Yu | BY-103 | Compra en |
| la incubadora | Shanghai Zhichu Instrument Co., Ltd. | ||
| Sacarosa | GENVIEW | CS326-500G | |
| Colorante de ácido nucleico súper verde | Biosharp | BS355A | |
| Mesa súper limpia | Heal Force | AC130052 | |
| TSB | Hope Bio | HB4114 | |
| Bomba de vacío | Zhejiang Taizhou Seeking Precision Vacuum Pump Co., Ltd. | ||
| Extracto de levadura | Thermo Scientific | LP0021B |
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