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Artículo de método

Cría de Delia antiqua axénica con dietas estériles semifermentadas

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DOI:

10.3791/66259

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22 de diciembre de 2023

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En este artículo

Resumen

Se describe un procedimiento sencillo para la cría de Delia antiqua axénica con dietas estériles semifermentadas. Solo se detectó una cepa de Wolbachia en cada estadio de D. antiqua axénica mediante PCR.

Resumen

Los insectos axénicos se obtienen a partir de sistemas de cría artificial estériles utilizando medios estériles. Estos insectos, caracterizados por su pequeño tamaño, ciclo de crecimiento corto y bajos requerimientos de alimento, son ideales para estudiar la relación entre microorganismos y hospedadores. La microbiota intestinal influye significativamente en las características fisiológicas de los insectos huéspedes, y la introducción de cepas específicas en los insectos axénicos proporciona un método para verificar las funciones microbianas intestinales. Delia antiqua, una plaga amenazante del orden Diptera, la familia Anthomyiidae y el género Delia, se alimenta principalmente de cebollas, ajos, puerros y otras verduras de la familia Liliaceae. Sus larvas se alimentan de los bulbos, causando la pudrición, el marchitamiento e incluso la muerte de plantas enteras. Al criar larvas axénicas, se pueden realizar estudios de seguimiento para observar los efectos de la microflora intestinal en el crecimiento y desarrollo de D. antiqua. A diferencia del método que implica la eliminación de antibióticos de los microbios asociados, este artículo presenta un enfoque de bajo costo y alta eficiencia para la cría de D. antiqua axénica. Después de la esterilización superficial de los huevos de D. antiqua , se utilizaron dietas estériles semifermentadas para criar larvas, y el estado axénico de D. antiqua se verificó mediante ensayos dependientes e independientes del cultivo. En conclusión, la combinación de la esterilización de huevos de insectos y la preparación de dietas estériles para el cultivo de larvas ha permitido el desarrollo de un método eficiente y sencillo para la obtención de D. antiqua axénica. Este método proporciona un enfoque poderoso para estudiar las interacciones entre insectos y microflora.

Introducción

Los animales axénicos, definidos como animales en los que no se pueden detectar microorganismos o parásitos viables, son modelos experimentales valiosos para estudiar las interacciones huésped-microorganismo 1,2. Los insectos, el grupo más grande de invertebrados, pueden formar relaciones simbióticas con los microorganismos3. Los insectos axénicos se pueden utilizar para estudiar las interacciones huésped-simbionte en sistemas simbióticos4. Por ejemplo, Nishide et al.5 establecieron un procedimiento práctico de cría estéril para el gusano ....

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Protocolo

D. antiqua se obtienen del campo de Fanzhen, Taian.

1. Preparación de dietas estériles

  1. Pele las capas exteriores de las cebolletas y deseche las hojas verdes. Mantenga la parte blanca de las cebolletas (Figura 1A) y lávelas con agua estéril, repitiendo el proceso de enjuague tres veces. Cortar la parte blanca de las cebolletas en trozos cortados en cubitos de 1-2 cm con unas tijeras (ver Tabla de materiales) esterilizadas con una solución de EtOH al 75 % (mencionada en el paso 2.5) para su uso posterior.
  2. Pese 50 g de las cebolletas cortadas en cubit....

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Resultados

Las etapas de la vida de D. antiqua se representan en la Figura 4. El ciclo de vida completo comprende huevos, larvas, pupas (Figura 4C) y adultos (Figura 4D). Se cultivan en tubos de centrífuga estériles, y su aparición y tasa de supervivencia son indistinguibles de las de D. antiqua criada en condiciones no axénicas. Los tiempos de crecimiento y desarrollo para cada etapa de D. antiqua se pueden encontra.......

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Discusión

Los insectos poseen una microbiota intestinal muy compleja20,21, lo que hace necesario el uso de insectos axénicos inoculados con cepas microbianas intestinales específicas para estudiar las interacciones insecto-microorganismo. La preparación de insectos axénicos es crucial para este tipo de esfuerzos de investigación. El tratamiento con antibióticos es un método utilizado para eliminar la microbiota intestinal. Por ejemplo, Jung y Kim, de22

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Divulgaciones

Los autores no tienen conflictos de intereses que revelar.

Agradecimientos

Este trabajo contó con el apoyo de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (32272530), el Proyecto de Nuevas Veinte Políticas para la Universidad de Jinan (2021GXRC040), los Grandes Proyectos de Innovación Científica y Tecnológica en la Provincia de Shandong (2021TZXD002) y el Proyecto de Integración de la Ciencia y la Educación de la Universidad Tecnológica de Qilu (2022PYI009, 2022PY016, 2022PT105).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
0,22 y mu; Botella con filtro MThermo Scientific450-0045
0.22 μ M Filtro de jeringaBiosharpBS-QT-011
Tamiz de malla 100Zhejiang Shangyu Jinding Fábrica de tamiz estándarSin números
1x solución PBSSolarbioP1020
2x Taq PCR Master MixGENVIEWGR1113-1ML
5.2% NaClO soluciónSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.
matraz cónico de 500 mLThermo Scientific4103-0500
50 mL tubo de centrífuga ventiladoJET BIOFILBRT-011-050
50x tampón TAEGENVIEWGT1307
Polvo de agarDing GuoDH010-1.1
Incubadora bioquímicaSTIK
Tamiz de célulasSAINING5022200
Cloruro de colinaSangon BiotechA600299-0100
ddH2ODing GuoPER018-2
Mortero de molienda desechableJET BIOFILCSP-003-002
Kit de extracción de ADNSangon BiotechB518221-0050
Marcador de ADNSangon BiotechB600335-0250
Absoluto de etanolSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.
Papel de filtroNEWSTAR1087309025
Procesador de alimentosGuangdong Midea Life Electric Appliance Manufacturing Co., Ltd.
Iluminado   incubadoraShanghai ESTABLECER Instrumentación Co., Ltd.
Ácido L-ascórbicoSangon BiotechA610021-0100
Esparcidor en forma de LSAINING6040000
Medio de agar nutrienteHope BioHB0109
TijerasBing Yu  BY-103Compra en
la incubadoraShanghai Zhichu Instrument Co., Ltd.
SacarosaGENVIEWCS326-500G
Colorante de ácido nucleico súper verdeBiosharpBS355A
Mesa súper limpiaHeal ForceAC130052
TSBHope BioHB4114
Bomba de vacíoZhejiang Taizhou Seeking Precision Vacuum Pump Co., Ltd.
Extracto de levaduraThermo ScientificLP0021B
de catálogo80010428 21040121500010 10009218WBL25B26A16110768 Jingdong Shock 202000001422051031

Referencias

  1. Al-Asmakh, M., Zadjali, F. Use of germ-free animal models in microbiota-related research. Journal of Microbiology and Biotechnology. 25 (10), 1583-1588 (2015).
  2. Bhattarai, Y., Kashyap, P. C. Germ-free mice model for studying host-microbial interaction....

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