La espectroscopia de resonancia magnética nuclear (RMN) se utiliza para identificar la desregulación de los metabolitos en pacientes con diversas enfermedades. Esta técnica permite la cuantificación de los metabolitos alterados, desentrañando los conocimientos fisiopatológicos. Aquí, describimos el procedimiento paso a paso del enfoque basado en RMN para la caracterización metabólica de los pacientes.
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Artículo de método
Identificación y cuantificación de metabolitos alterados en pacientes críticos mediante metabolómica basada en RMN
En este artículo
Resumen
Resumen
La metabolómica está emergiendo como un enfoque importante para reflejar la respuesta del individuo a las condiciones fisiopatológicas. La espectroscopia de resonancia magnética nuclear (RMN) ha evolucionado como una herramienta para identificar desregulaciones metabólicas en pacientes críticamente enfermos afectados por afecciones como el síndrome de dificultad respiratoria aguda (SDRA), la pancreatitis aguda grave (SAP), la lesión renal aguda (LRA) y la sepsis. Los datos espectrales de la muestra de suero del grupo de estudio y control se registran utilizando un espectrómetro de RMN de 800 MHz y se procesan utilizando herramientas de procesamiento y análisis de RMN. Además, se realiza un riguroso análisis estadístico, como pruebas univariantes y multivariantes, para identificar metabolitos significativos, que luego se identifican y cuantifican con precisión mediante el software de cuantificación de metabolitos de RMN. Además, el análisis de las vías pone de manifiesto los ciclos bioquímicos desquiciados que dan lugar a la gravedad de la enfermedad. A través de este enfoque integral, los investigadores pretenden obtener una visión más profunda de las alteraciones metabólicas asociadas con estas enfermedades críticas, lo que podría allanar el camino para una mejor comprensión de la enfermedad y mejores estrategias de diagnóstico y tratamiento.
Introducción
A pesar de los continuos esfuerzos para proporcionar un diagnóstico eficiente de enfermedades en todo el mundo, la terapia dirigida aún no ha alcanzado su verdadero potencial. Diversos abordajes, como la transcriptómica, la proteómica, etc., han permitido identificar varios biomarcadores, pero estos no han tenido suficiente utilidad clínica debido a la falta de sensibilidad y especificidad 1,2. La terapia dirigida es un gran desafío en algunas enfermedades multifactoriales, lo que eventualmente conduce a una mayor mortalidad. Es necesario comprender mejor....
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Protocolo
La aprobación ética (código IEC: 2022-71-PhD-126) se obtuvo del IEC del Instituto de Postgrado de Ciencias Médicas Sanjay Gandhi (SGPGIMS), Lucknow. Se obtuvieron los consentimientos escritos e informados de los pacientes o sus familiares para realizar el estudio y publicar los datos con fines de investigación. Además, la investigación se llevó a cabo siguiendo los lineamientos institucionales.
1. Diseño del estudio y autorización ética
- Determine el tamaño de la muestra para cada grupo. Revisar cuidadosamente y establecer los criterios de selección de los participantes. Además, si el diseño del estudio requiere ....
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Resultados
Para llevar a cabo un estudio de metabolómica, es fundamental determinar el tamaño de la muestra y los grupos específicos que se van a analizar. La selección de un tamaño de muestra adecuado es esencial para obtener resultados significativos que se correlacionen con precisión con la gravedad de la enfermedad48. Sin embargo, en este trabajo en particular, utilizamos un tamaño de muestra pequeño para demostrar los pasos involucrados en la identificación y cuantificación de metabolitos utilizando met.......
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Discusión
La metabolómica identifica y cuantifica eficientemente los metabolitos, centrándose en los ciclos metabólicos que se alteran durante la enfermedad. La calidad de los resultados depende de la ejecución meticulosa de cada paso en el enfoque metabolómico. Cada etapa, desde la selección y recolección de muestras hasta la identificación de la vía, es fundamental para identificar con precisión los factores primarios que contribuyen a la enfermedad. Antes de realizar la metabolómica, es esencia.......
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Divulgaciones
Los autores declaran no tener ningún interés financiero contrapuesto.
Agradecimientos
AS agradece a la Academia de Investigación Científica e Innovadora (AcSIR) por el registro (Nº de registro 10BB22A71002). AS también reconoce a la Organización de Investigación y Desarrollo de Defensa (DRDO) por la beca. Agradecemos al Centro de Investigación Biomédica (CBMR) por proporcionar la instalación de espectrómetro de RMN de 800 MHz y la financiación a través del proyecto intramuros (CBMR/IMR/0008/2021). También agradecemos al Departamento de Medicina de Cuidados Críticos (CCM), SGPGIMS, por su apoyo constante. Agradecemos la ayuda de muchas enfermeras, así como, lo que es más importante, los pacientes inscritos en este estud....
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Centirfuge | Sigma aldrich | 3-18KS | |
| Chenomx NMR suite | Suite de resonancia magnética, v9, Chenomx Inc., Edmonton, Canadá | Software de cuantificación de metabolitos de RMN | |
| Inserto coaxial | Sigma aldrich | Z278513 | |
| Óxido de Deuterim | Sigma aldrich 151882 | ||
| Eppendorf | Tarsons | 500020 | |
| Metaboanalista | Grupo | Software de análisis estadístico de metabolómica | |
| Tubo de RMN | Wilmad | Z412007 | 5 mm de diámetro |
| Pipeta Eppendorf research plus | 3123000039 | 0-100 μ l | |
| Viales de recogida de muestras | Viales de enfriamiento criogénico Tarsons | 523194 | |
| Azida de sodio | Sigma aldrich | S2002 | |
| Cristal de cloruro de sodio | Sigma aldrich | S9625 | |
| Fosfato de sodio dibásico | Sigma aldrich | 567550 | |
| Fosfato de sodio monobásico | Sigma aldrich | S0751 | |
| Topspin 3.6.4 | Herramienta de procesamiento y análisis de RMN | Bruker | |
| Tsp salt | Sigma aldrich | 269913 |
Referencias
- Rubenfeld, G. D. Confronting the frustrations of negative clinical trials in acute respiratory distress syndrome. Ann. Am. Thorac. Soc. 12 (Supplement 1), S58-S63 (2015).
- Ware, L. B., et al. Prognos....
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Reimpresiones y permisos
