Entrega efectiva y segura de genes al riñón de ratón mediante inyección lenta retrógrada en la pelvis renal de vectores de virus adenoasociados

Hideyuki Hakui; Anusha Sairavi; Ranjan Das; Taisuke Furusho; Hiroyuki Nakai

doi:10.3791/67716

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Artículo de método

Entrega efectiva y segura de genes al riñón de ratón mediante inyección lenta retrógrada en la pelvis renal de vectores de virus adenoasociados

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DOI:

10.3791/67716

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1 de agosto de 2025

Hideyuki Hakui¹ , Anusha Sairavi¹ , Ranjan Das¹ , Taisuke Furusho¹ , Hiroyuki Nakai¹^,²^,³

¹Department of Molecular and Medical Genetics, Oregon Health & Science University, ²Department of Molecular Microbiology and Immunology, Oregon Health & Science University, ³Division of Neuroscience, Oregon National Primate Research Center

En este artículo

Resumen

Este informe detalla el método de inyección localizada de vectores AAV a través de la pelvis renal para una transferencia de genes efectiva y segura al riñón del ratón.

Resumen

El desarrollo de herramientas y métodos in vivo eficaces para la administración de genes al riñón es crucial para avanzar en la investigación renal básica y la terapia génica para las enfermedades renales. Además, la creciente conciencia sobre las enfermedades renales monogénicas, impulsada por pruebas genéticas avanzadas, subraya el potencial de la terapia génica para tratar e incluso curar enfermedades renales genéticas difíciles de tratar. En este sentido, los vectores de virus adenoasociados (AAV) han atraído una atención cada vez mayor como una plataforma sólida para la administración de genes in vivo ; sin embargo, aún no se ha establecido completamente el método más eficaz y seguro para la administración de genes mediada por vectores AAV a cada tipo de célula terapéuticamente relevante en el riñón. Aquí, se detalla el método de inyección lenta de pelvis renal retrógrada (RP) de vectores AAV, y se demuestra su alto potencial para transducir riñones de ratón cuando se usa con cápsidas AAV seleccionadas adecuadamente. Además, se ha demostrado que este método es eficaz no solo con los vectores AAV (CsCl AAV) purificados por ultracentrifugación de cloruro de cesio estándar, sino también con minipreparados vectoriales AAV (CU AAV) ultrafiltrados centrífugamente, que se pueden preparar de forma rápida y sencilla utilizando técnicas que no requieren experiencia especializada en vectores AAV. Como ejemplo, este estudio demuestra que la inyección lenta de RP de los vectores CsCl y CU AAV-KP3 da como resultado una transducción robusta de túbulos proximales en el riñón del ratón sin daño tisular aparente, a diferencia de los enfoques hidrodinámicos informados anteriormente que inevitablemente conducen al daño tisular. Por lo tanto, este estudio destaca que la inyección lenta de RP retrógrada de vectores seleccionados derivados de la cápside de AAV es un método eficaz y seguro para la administración de genes al riñón. Este método será aplicable a un amplio espectro de investigación renal, incluidos los estudios de terapia génica. El uso de minipreparados vectoriales CU AAV aumentará significativamente el rendimiento y mejorará la eficiencia de tiempo y costos necesarios para generar datos preliminares y obtener información crucial.

Introducción

Los métodos eficaces y seguros para la administración de genes al riñón en animales experimentales pequeños y grandes brindan oportunidades cruciales para avanzar en la investigación renal básica y explorar enfoques terapéuticos innovadores. El establecimiento de tales métodos es particularmente relevante para la terapia génica para diversas enfermedades renales. Los avances recientes en las pruebas genéticas clínicas han revelado una mayor prevalencia de trastornos renales monogénicos de lo estimado anteriormente, afectando aproximadamente al 30% de los pacientes con enfermedades renales crónicas (ERC)¹. La ER....