Detección de campos de lentejas para detectar la presencia de marchitez por Fusarium y pudrición de la raíz en Türkiye en el clima terrestre

Resumen

Un estudio en la provincia de Yozgat encontró que los factores bióticos, como las enfermedades fúngicas como la marchitez y la pudrición de la raíz, limitan la producción de lentejas. Se encontraron aislados de Fusarium en el 95,4% de las muestras, lo que sugiere estudios locales periódicos y monitoreo regular para el desarrollo de tecnologías sostenibles y estrategias de control efectivas.

Resumen

La lenteja es una importante planta de cultivo de leguminosas autopolinizada. Su producción está limitada por varios factores bióticos, especialmente los agentes fúngicos causantes del complejo de marchitez y pudrición de la raíz. El estudio tuvo como objetivo comprender la epidemiología regional y la etiología de los agentes fúngicos fitopatógenos para desarrollar estrategias de control contra Fusarium spp. Este estudio investigó 83 localidades de siembra de lentejas en la provincia de Yozgat para enfermedades de marchitez, pudrición de la raíz y de la corona causadas por especies comunes de Fusarium durante 2022 y 2023. Se recolectaron plantas de lenteja sintomáticas para el aislamiento e identificación de hongos. Los aislados de Fusarium se agruparon de acuerdo con la morfología de la colonia y se cultivaron en medio PDA. Además, los ADN genómicos obtenidos de aislados de Fusarium se analizaron mediante PCR y se compararon con otros aislados de Fusarium registrados en el NCBI GenBank. Las relaciones genéticas entre los aislados de Fusarium se determinaron utilizando el método de Máxima Parsimonia (MP) en el programa Mega 11. Los resultados, la incidencia media y la tasa de gravedad de las enfermedades de marchitez y pudrición de la raíz en la provincia de Yozgat fueron de 16,9% y 38,6%, respectivamente. Se encontraron aislados de Fusarium en el 95,4% de las muestras. Hubo una homogeneidad de la secuencia de nucleótidos del 99,5% al 100% entre los aislados de F. oxysporum, F. culmorum, F. graminearum, F. acuminatum y F. solani, y la especie más aislada fue F. oxysporum. El dendrograma MP de los aislados de Fusarium se dividió en dos ramas principales, la primera rama incluyó todos los aislados de F. solani. La segunda rama principal incluyó otras especies de Fusarium aisladas en el presente estudio y en el GenBank del NCBI. El estudio sugiere realizar estudios locales periódicos para determinar la frecuencia de marchitez por Fusarium para su supresión en las lentejas. Se recomienda encarecidamente la supresión oportuna de los daños causados por Fusarium para controlar la enfermedad y conservar el sistema de producción de lentejas.

Introducción

La lenteja (Lens culinaris Medik.), una leguminosa de grano comestible pequeño que pertenece a la familia Fabaceae, es un cultivo de estación fría que se autopoliniza con hojas en forma de aguja y flores de color blanco a púrpura pálido o púrpura oscuro¹. Fue domesticado por los humanos hace unos 10.000 años en la parte mesopotámica del Creciente Fértil y se extendió rápidamente al Nuevo Mundo, incluyendo la cuenca mediterránea y Asia Central, y más tarde se naturalizó en las^Américas. La superficie mundial de cultivo de lentejas es de unos 5,5 millones de hectáreas con ....

Protocolo

NOTA: Los detalles de los reactivos y el equipo utilizado en el estudio se enumeran en la Tabla de Materiales.

1. Estudio de campo, muestreo y aislamiento de hongos

NOTA: En 2022 y 2023 se realizaron trabajos de relevamiento, según Endes¹⁶. Se observaron un total de 83 áreas de plantación de lentejas en nueve distritos de la provincia de Yozgat para la enfermedad de marchitez, pudrición de la raíz y del cuello de la raíz (Figura 1).

1. Seleccione campos de lentejas con un área de más de 1000^m2

Resultados

Determinación de los parámetros de la enfermedad
Se evaluaron un total de 83 áreas de siembra de lentejas que cubrían nueve regiones diferentes de Yozgat en términos de marchitez, raíz y síntomas de pudrición de la corona, extendiéndose sobre un área de 1.1984 x 10⁶ m² (Tabla 2). Se encontraron síntomas de marchitez o pudrición de la raíz en todos los campos. Sin embargo, la incidencia de la enfermedad de marchitez y pudrición de .......

Discusión

Se sabe que el marchitamiento por Fusarium causa graves pérdidas de rendimiento económico en algunas partes del mundo³¹. La enfermedad se notificó por primera vez en Hungría³² y posteriormente en muchos países como Egipto, India, Myanmar, Nepal, Pakistán, Turquía, Siria y Estados Unidos³³. Kumar et ^al.34 informaron de una amplia distribución de marchitez de las lentejas, pudrición de .......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
El ácido (S)-láctico	Merck	100366	se utilizó como antibiótico en estudios.
2-propanol	Merck	109634	utilizado en estudios moleculares.
Pipeta microautomática ajustable (0,1-2,5 y micro; L)	Investigación Eppendorf	LB. EP.3123000012	Se utiliza para medir pequeños volúmenes de líquidos.
Juego de pipetas microautomáticas ajustables (2 – 20 µ l, 20 – 200 y micro; l, 100 – 1.000 y micro; l)	Investigación Eppendorf	LB. EP.4924000916	Se utiliza para medir pequeños volúmenes de líquidos.
Agar	Merck	110453	Para su uso en la fabricación de medios fúngicos.
Agarosa	Sigma-Aldrich	18300012	Para uso en la preparación de gel en electroforesis.
Aire acondicionado de la sala	?klimlab		Se utilizaba para cultivar plantas en condiciones controladas.
Ampisilin	Sigma-Aldrich	A9393	Se utilizó como antibiótico en estudios.
balanza de precisión analítica	Shimadzu ATX224		para pesar los materiales sólidos utilizados en el estudio.
esterilizador de autoclave	Zealway	GF-120DR	Se utilizó para esterilizar materiales sólidos y líquidos en cada etapa del estudio.
Microscopio binocular	Leica DM750		Para uso en el diagnóstico morfológico.
Cabina de seguridad biológica	HFsafe Clase II A2		Para garantizar la seguridad del área de trabajo, el usuario, el medio ambiente y la operación.
Centrífuga	DLAB DM1424	LB. DL.903001124	Se utilizó para separar partículas en una muestra en función de su forma, tamaño y densidad
Cloranfenicol	Sigma-Aldrich	220551	Se utilizó como antibiótico en estudios.
Juego de barrenadores de corcho	Sigma-Aldrich Z165220		Se utilizó para tomar muestras de cultivo de hongos en placas de Petri.
Cubreobjetos y portaobjetos	ISOLAB	075.01.006 / 075.02.005	Se utilizaron en el proceso de preparación para estudios microscópicos.
D(+)-glucosa monohidrato	Merck	108342	Para uso en la fabricación de medios fúngicos.
DFC450 con cámara digital Cámara microscópica	Leica		Digital con interfaz c-mount y con sensor ccd de 5 megapíxeles.
Microscopio binocular Dm750	Leica	MIC5246	Se utilizó para la identificación morfológica de hongos.
Electroforesis en gel de ADN	thermo fisher scientific	B2-UVT
Colorante de carga de gel de ADN (6x)	Thermo Scientific	R0611	Para uso en diagnóstico molecular.
dNTP mix	Thermo Scientific	R0192	Utilizado en estudios moleculares.
Mezclas maestras de pcr Dreamtaq (2x)	Thermo Scientific	K1082	Para uso en diagnóstico molecular.
Espátula de Drigalski	ISOLAB	082.03.001	Se utilizaba para raspar y esparcir cultivos de hongos cultivados en placas de Petri.
Edta	Thermo Scientific	17892	Para uso en diagnóstico molecular.
Etanol	Merck	100983	Utilizado en estudios moleculares y estudios de desinfección de superficies.
Bromuro de etidio	Sigma-Aldrich	E7637	Se utiliza para teñir el adn en geles durante la electroforesis en gel.
Ácido etilendiaminotetraacético (EDTA)	Sigma-Aldrich	E6758	Utilizado en estudios moleculares.
Papel de filtro	ISOLAB	107.58.158	Utilizado en estudios de cultivo de existencias.
Armario de secado de aire forzado	ZHICHENG ZXDS-A-1090		Para uso en procesos de incubación.
Campana extractora	Elektromag EM1201	LB. EM. EM1201	Se utilizaba para controlar vapores químicos nocivos, gases y polvo.
Sistema de imagen en gel	Syngene G:BOX Chemi XX6		Para uso en diagnóstico molecular.
Escalera de adn Generuler 50 bp	Thermo Scientific	SM0372	Para uso en diagnóstico molecular.
Ácido acético glacial	Merck	1005706	utilizado en estudios moleculares.
Glicerol	Merck	104094	Para uso en el cultivo de hongos.
Lanceta	ISOLAB	048.50.002	Se utiliza para eliminar tejido enfermo de muestras de plantas.
Cloruro de magnesio	Sigma-Aldrich	814733	Utilizado en estudios moleculares.
Cinta métrica	ISOLAB	016.07.500	Se utiliza para medir volúmenes de líquidos.
Tubos de microcentrífuga	ISOLAB	0778.03.001 / 0778.03.002 / 0778.03.003	Se utilizan para almacenar diferentes volúmenes de líquidos.
Tubo de PCR	ISOLAB	123.01.002	Se utilizó para poner la mezcla de ADN en estudios de PCR.
Placas de Petri	ISOLAB	120.13.090	Para uso en el cultivo de hongos.
Puntas de pipeta	ISOLAB	005.01.001 / 005.01.002 / 005.01.003 / 005.01.004	Para transferir volúmenes de líquido utilizados en análisis.
Bolsa de plástico	ISOLAB	039.30.005	Se utilizó para transportar muestras al laboratorio.
La maceta de plástico	ToXA		se utilizaba para el cultivo de plantas.
Alicates, abrazaderas	ISOLAB	048.08.130	Se utilizaba para poner papeles de filtro en sobres después de que el hongo creciera en la placa de Petri.
Mortero de porcelana	ISOLAB	038.02.150	Se utilizó para triturar micelios fúngicos.
Agar patata dextrosa	Condalab	1022	Para la identificación y cultivo y de hongos.
Sistema de agua pura	humano CORPORATION	LT. HC. NHP009	se utilizó en la preparación y análisis de soluciones a lo largo de los estudios.
Refrigerador (+4 ° C/-20 ° C)	Vestel Para uso		en el almacenamiento de materiales en stock.
La rifampicina	Sigma-Aldrich	557303	se utilizó como antibiótico en estudios.
Acetato de sodio	Merck	106268	Utilizado en estudios moleculares.
Cloruro de sodio	Merck	1064041000	utilizado en estudios moleculares.
Dodecil sulfato de sodio	Sigma-Aldrich	436143	utilizado en estudios moleculares.
Solución de hipoclorito de sodio	Merck	105614	Se utiliza para la desinfección de superficies.
Espátula	ISOLAB	047.33.210	Se utilizaba para raspar el cultivo de hongos que crecían en placas de Petri.
Sulfato de estreptomica	BioShop Canada	STP101	Para prevenir la contaminación en el cultivo de hongos.
Teksoll extra puro	Tekkim	TK.200650	Para uso como desinfectante en todas las etapas del trabajo.
Tetrasiklin	Sigma-Aldrich	T3258	Se utilizó como antibiótico en estudios.
¿Termociclador PCR	Bio? Rad T100		Para uso en análisis genómicos.
Thoma lam	ISOLAB	075.03.002	Para uso en el recuento de esporas.
Tris HCL	Roche 10812846001		Utilizado en estudios moleculares.
Trizma	Sigma-Aldrich	T1503	Utilizado en estudios moleculares.
Tween 80	Merck	822187	Para uso en solución de esporas en pruebas de patogenicidad.
Mezclador de vórtice vorteks	Velp WIZARD	LB. VLP. F202A0175	Se utiliza para mezclar sustancias en volúmenes líquidos.
Baños de agua	Memmert WNB 22	1018-5702	Se utilizó durante la incubación en estudios de extracción de ADN.

Se utilizó la