Un método simple y eficiente para probar agentes inmunomoduladores para la generación de células dendríticas tolerogénicas a partir de monocitos CD14+ humanos

Sihan Jia; Peter Deak

doi:10.3791/68159

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Artículo de método

Un método simple y eficiente para probar agentes inmunomoduladores para la generación de células dendríticas tolerogénicas a partir de monocitos CD14⁺ humanos

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DOI:

10.3791/68159

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11 de abril de 2025

Sihan Jia¹ , Peter Deak¹

¹Chemical and Biological Engineering Department, Drexel University

En este artículo

Resumen

Describimos un procedimiento para evaluar la capacidad de los agentes farmacológicos para generar células dendríticas tolerogénicas a partir de células dendríticas derivadas de monocitos naïve in vitro y validar su potencia mediante la generación de células T reguladoras autólogas.

Resumen

Las células dendríticas tolerogénicas (tolDC) son un subconjunto de células dendríticas (CD) que se sabe que influyen en las células T vírgenes hacia un fenotipo de células T reguladoras (Treg). Los TolDC están actualmente bajo investigación como terapias para la autoinmunidad y el trasplante, tanto como terapia celular como método para inducir TolDC a partir de CD endógenos. Hasta la fecha, sin embargo, el número de agentes conocidos para inducir tolDCs a partir de DC ingenuas es relativamente pequeño y su potencia para generar Tregs in vivo ha sido inconsistente, en particular las terapias que inducen tolDCs a partir de DC endógenas. Esto brinda la oportunidad de explorar nuevos compuestos para generar tolerancia.

En este trabajo describimos un método para probar nuevos compuestos inmunomoduladores en CD derivadas de monocitos (moDCs) in vitro y validar su funcionalidad para generar Tregs autólogas. En primer lugar, obtenemos PBMC y aislamos monocitos CD14⁺ y linfocitos T CD3⁺ utilizando kits de separación magnética disponibles en el mercado. A continuación, diferenciamos los monocitos en moDC, los tratamos con un inmunomodulador establecido, como rapamicina, dexametasona, IL-10 o vitamina D3, durante 24 h y probamos su cambio en marcadores tolerogénicos como validación del protocolo. Por último, cocultivamos las tolDCs inducidas con linfocitos T autólogos en presencia de estimulación anti-CD3/CD28 y observamos cambios en las poblaciones de Treg y la proliferación de linfocitos T. Prevemos que este protocolo se utilizará para evaluar la eficacia de nuevos agentes inmunomoduladores para reprogramar las CD ya diferenciadas hacia tolDC.

Introducción

Las células dendríticas (CD) son mediadores críticos entre la inmunidad innata y la adaptativa. Las CD, que residen principalmente en las membranas mucosas, la piel y el tejido linfoide, son las células presentadoras de antígenos primarios (CPA)¹. Las CD absorben proteínas extrañas y las procesan y presentan en proteínas de histocompatibilidad mayor (MHC) a las células T vírgenes. Las CD expresan específicamente proteínas MHC de clase II, como el antígeno leucocitario humano-DR (HLA-DR) en humanos. El estado de activación de las CD tras la exposición al antígeno es crítico para la respuesta de las células T agu....