Espátula Montevideo Dispositivo para la vitrificación de embriones de mamíferos

Geraldine Schlapp; María Noel Meikle; Lucía Goyeneche; Pedro Dos Santos Neto; Martina Crispo

doi:10.3791/68176

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Artículo de método

Espátula Montevideo Dispositivo para la vitrificación de embriones de mamíferos

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DOI:

10.3791/68176

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6 de junio de 2025

Geraldine Schlapp^*¹ , María Noel Meikle^*¹ , Lucía Goyeneche² , Pedro Dos Santos Neto³ , Martina Crispo¹

¹Laboratory Animal Biotechnology Unit, Institut Pasteur de Montevideo, ²Centro de Esterilidad Montevideo, ³Fundación IRAUy, Instituto de Reproducción Animal de Uruguay

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En este artículo

Resumen

Aquí, presentamos el protocolo Espátula Montevideo para vitrificar embriones de preimplantación de ratones y ovejas, que consiste en una espátula casera y utiliza soluciones caseras. Los embriones se equilibran rápidamente en dos soluciones crioprotectoras de concentración creciente, se cargan en la espátula, se sumergen en nitrógeno líquido y finalmente se sellan con una pajita de 0,5 ml.

Resumen

Este estudio describe un método de vitrificación eficiente y rentable para la criopreservación de embriones de ratón y oveja conocido como la Espátula Montevideo (MVD). Este protocolo utiliza una espátula casera como dispositivo portador, que se prepara con una punta de cargador de gel. Los embriones se equilibran rápidamente en dos soluciones crioprotectoras caseras de concentración creciente, se cargan en la espátula y luego se sumergen directamente en nitrógeno líquido. Aproximadamente 30-40 embriones de ratón en etapa de preimplantación se pueden cargar en la espátula, que posteriormente se sella con una pajita de 0,5 ml. El uso de espátulas en lugar de criotubos, que se utilizan con frecuencia para almacenar embriones vitrificados, optimiza el espacio en los dewars de nitrógeno líquido. Además, el proceso de calentamiento requiere solo una solución casera de sacarosa de concentración decreciente para rehidratar los embriones y restaurar su morfología. Nuestro laboratorio ha utilizado con éxito la Espátula Montevideo para embriones preimplantatorios de ratón y oveja durante más de 10 años. La Espátula Montevideo ha demostrado una tasa media de recuperación (embriones recuperados/vitrificados) del 84% y una tasa de supervivencia (embriones viables/recuperados) del 97% en embriones de ratón. La vitrificación de embriones murinos ha dado mejores resultados que la congelación lenta, aunque no se han observado diferencias en los resultados reproductivos (tasas de embarazo, parto y natalidad). En embriones de oveja, se han logrado tasas de supervivencia y desarrollo embrionario similares con Spatula Montevideo en comparación con un dispositivo comercial. Aunque la tasa de preñez fue mayor para el dispositivo comercial, la tasa de supervivencia de los corderos no fue significativamente diferente entre los dispositivos. El método de vitrificación Espátula Montevideo es una técnica de criopreservación sencilla que se puede utilizar para almacenar embriones sobrantes, respaldar líneas de ratones modificados genéticamente y modelos de ovejas, y facilitar su intercambio entre investigadores de todo el mundo.

Introducción

La eficiencia de la generación de animales genéticamente modificados (GM) ha aumentado significativamente debido al desarrollo de métodos basados en endonucleasas, en particular CRISPR/Cas9. Muchos laboratorios en todo el mundo producen varias líneas de ratones y ratas transgénicos que deben ser criopreservadas para evitar la deriva genética y mantener la integridad del^{fenotipo original}. Además, el archivo elimina la necesidad de una cría constante, que a menudo resulta en un número excesivo de animales. Algunos laboratorios envían líneas de ratones transgénicos como embriones criopreservados o esperma a repositorios internacionales, lo que fac....