Elección y no elección-Los ensayos para probar la resistencia de A. thaliana a insectos masticadores

Resumen

Resistencia de las plantas a insectos herbívoros de mascar puede ser probado de varias maneras. En este sentido, se muestra cómo configurar una opción y no un experimento de elección con la planta modelo Arabidopsis thaliana para identificar la resistencia contra la plaga de especies Violación de Pieris.

Resumen

Las larvas de la mariposa de la col blanca pequeña son una plaga en actividades agrícolas. Esta especie de oruga se alimenta de las plantas de la familia del repollo, que incluyen muchos cultivos como el repollo, brócoli, coles de Bruselas de cría, etc de los insectos se lleva a cabo en las plantas de repollo en el invernadero. Al menos dos jaulas son necesarias para la cría de Violación de Pieris. Una de las larvas y el otro para contener a los adultos, las mariposas. Con el fin de investigar el papel de las hormonas vegetales y sustancias químicas tóxicas de plantas en la resistencia a esta plaga de insectos, se demuestra dos experimentos. En primer lugar, la determinación del papel del ácido jasmónico (JA - una hormona vegetal a menudo se indica en la resistencia a insectos) en la resistencia a la masticación de insectos Violación de Pieris. El crecimiento de Caterpillar se puede comparar en las plantas de tipo salvaje y mutante con discapacidad en la producción de JA. Este experimento se considera "otra opción", porque las larvas se ven obligados a subsistir con una sola planta que sintetiza o es deficiente en JA. En segundo lugar, se demuestra un experimento que investiga el papel de los glucosinolatos, que se utilizan como oviposición (puesta de huevos) señales. Aquí, nosotros usamos Arabidopsis WT y mutantes alteración en la producción de glucosinolatos en una "elección" experimento en el que las mariposas hembras se les permite elegir para poner sus huevos en las plantas de ambos genotipos. Este video muestra el montaje experimental para ambos ensayos, así como obtener resultados representativos.

Protocolo

No experimento de elección:

1. Cuidadosamente adjuntar la planta Arabidopsis de interés en un vaso de plástico. En este caso: Col-0 (WT) y un mutante con discapacidad en la producción de JA. Asegúrese de limitar el daño a las hojas. Para que el uso final de este pincel.
   
2. Use un pincel fino para dar un larvas recién nacidas de la colonia en la col.
   
3. Coloque cuidadosamente la larva en las plantas de Arabidopsis.
   
4. Peso larva en el día 4, 7, 10. Sugerencia: crecer sus plantas en condiciones de día corto (8 horas de luz) para aumentar el crecimiento vegetativo (1 larva puede cumplir su ciclo de vida completo de una planta).

Elección de experimentación:

1. Dos plantas se seleccionan, uno de cada genotipo. Lo mejor es hacer crecer plantas en la misma olla, para limitar otros factores, tales como los efectos bandeja, etc
   
2. Colocar las plantas en una jaula de mariposas.
   
3. Seleccione una hembra fértil. Por lo general la captura de una mujer que está activamente poniendo los huevos en la colonia de cría.
   
4. Liberación de la mujer en la jaula con la elección de dos plantas de 24 hrs.
   

CONSEJO 1: Para eliminar un efecto de aprendizaje, no vuelva a usar las mujeres para las pruebas de selección posterior.

TIP 2: Sólo se puede comparar las plantas que tienen un fenotipo de crecimiento similar. Como alternativa, puede montar una hoja de cada genotipo en la parte superior de un erlenmeyer y comparar su atractivo para una mujer.

Por favor, visite las revisiones anuales de Biología Vegetal para obtener más información acerca de este protocolo y la inmunidad de plantas a la herbivoría de insectos.