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Artículo de método

Preparación automatizada de [68Ga]Ga-3BP-3940 en un módulo de síntesis para la obtención de imágenes PET del microambiente tumoral

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DOI:

10.3791/68356

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25 de abril de 2025

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En este artículo

Resumen

Esta investigación describe el proceso automatizado para la producción de [68Ga]Ga-3BP-3940 con el sintetizador GAIA V2, para la obtención de imágenes PET de la proteína de activación de fibroblastos. También se presentan los resultados de las pruebas de control de calidad realizadas en tres lotes de ensayo.

Resumen

Se ha desarrollado un método rápido y eficiente en el módulo de síntesis GAIA para el radiomarcaje automatizado de galio-68 de 3BP-3940, una sonda de imagen molecular dirigida a la proteína de activación de fibroblastos para la tomografía por emisión de positrones del microambiente tumoral. Las condiciones de reacción incluyeron tampón acetato (concentración final: 0,1 M), metionina como agente antirradiólisis (concentración final: 5,4 mg/mL) y 30 μg de 3BP-3940, con calentamiento durante 8 min a 98 °C. Fue necesario un paso final de purificación en un cartucho C18 para obtener un producto radiomarcado de alta pureza. Por el contrario, el generador de 68Ga se utilizó directamente sin un paso de concentración en un cartucho de intercambio catiónico. La producción de tres lotes de validación confirmó la fiabilidad del método, permitiendo la síntesis de [68Ga]Ga-3BP-3940 en 22,3 ± 0,6 min con alta pureza radioquímica (RCP), determinada tanto por radio-HPLC (99,1% ± 0,1%) como por radio-TLC (99,2% ± 0,1%). El rendimiento radioquímico promedio, basado en los valores de RCP medidos por radio-HPLC, fue del 74,4% ± del 3,3%. La estabilidad del producto radiomarcado se demostró hasta 4 h después de la preparación. Este protocolo proporciona una metodología fiable, rápida y eficiente para la preparación de [68Ga]Ga-3BP-3940, que puede trasladarse fácilmente a un entorno clínico.

Introducción

En los últimos años, el tratamiento del microambiente tumoral (TME) ha atraído un interés considerable en aplicaciones diagnósticas y terapéuticas1. La abundancia de tipos de células, moléculas de señalización y macromoléculas de matriz extracelular (MEC) dentro del TME ofrece una amplia gama de posibles objetivos moleculares2. Entre las células huésped residentes e infiltrantes, los fibroblastos asociados al cáncer (CAF) forman un subconjunto distinto de fibroblastos dentro de la TME, fenotípicamente diferente de los fibroblastos normales. Los CAF desempeñan un papel crucial en la progresión tumoral, la metástasis, la e....

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Protocolo

NOTA: Este protocolo implica trabajar con radioisótopos. Cualquier persona que lleve a cabo este procedimiento debe estar debidamente capacitada en el manejo de materiales radiactivos no sellados y debe contar con la aprobación del oficial de seguridad radiológica de su institución. El sintetizador automatizado debe colocarse en una celda caliente blindada designada. Cualquier procedimiento manual que involucre materiales radiactivos también debe llevarse a cabo en una celda caliente blindada o detrás de un blindaje de radiación adecuado.

1. Preparación de reactivos

NOTA: Los reactivos necesarios p....

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Resultados

El proceso de síntesis desarrollado en el módulo GAIA permite el radiomarcaje rápido de 68Ga de 3BP-3940 en 21-22 min. Este protocolo fue diseñado para trabajar con el generador GALLIAD de grado farmacéutico de 68Ge/68Ga, que produce 1,1 mL de eluido de 68Ga en 0,1 M de HCl. El volumen y la molaridad del tampón de reacción se ajustaron finamente de acuerdo con esta cantidad de ácido para obtener un pH de reacción entre 3,5 y 4, necesario para un radiomarcaje óptimo

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Discusión

En este trabajo se presenta un protocolo de preparación automatizado compatible con GMP para la síntesis de [68Ga]Ga-3BP-3940 utilizando un módulo GAIA y un generador GALLIAD. Este método se adaptó de los protocolos utilizados en nuestro centro para el radiomarcaje de galio-68 de vectores como los ligandos PSMA44 y otros inhibidores de FAP 43,46 para la imagen clínica del PET, con ligeras modifi.......

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Divulgaciones

Los autores no tienen asociaciones comerciales ni fuentes de financiación que puedan dar lugar a un conflicto de intereses real o percibido en relación con este trabajo para divulgar.

Agradecimientos

Los autores agradecen a Yasmine Soualy, Stéphane Renaud y Élodie Gaven por su ayuda en la preparación de las reacciones de radiomarcaje presentadas en este manuscrito.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Filtros 0,2 µVWR514-0515Para la filtración de soluciones tampón y antioxidantes y producto final de radiomarcaje
Acetonitrilo para HPLCSigma Aldrich34851-2,5LPara el control HPLC de la pureza radioquímica
Acetato de amonioSigma Aldrich238074Para la preparación de una de las fases móviles para el control TLC
Columna C18 para HPLCVWREQV-3C18-1503Para el control de la pureza radioquímica por HPLC
Calibrador de dosis calibrado (CRC25)Capintec-Paramedir la radiactividad del producto final y los diversos componentes del módulo posterior a la síntesis
Solución tampón de citrato, pH 4Thermofisher258585000Fase móvil para controles TLC
Tubo de Eppendorf 5 ml BiopurSigma AldrichEP0030119479Para la preparación de soluciones tampón y antioxidantes
Línea de extensión (30 cm)Vygon1159.03Para la conexión del generador al conjunto de tubos Generador de
galio-68IRE Elit-Parageneración in situ de cloruro de galio de [68Ga]contador de
gamma (Hidex AMG)Hidex-Parala evaluación de la vida media y la pureza radioquímica
Estación de HPLCShimadzu-Para el control HPLC de la pureza radioquímica
Placas iTLC-SGAgilentSGI0001Para el control TLC de la pureza radioquímica
L-metioninaAppliChemA1340Para la preparación de soluciones antioxidantes
Adaptador macho/machoVygon893.00Para la conexión del generador al grupo de tubos
MetanolSigma Aldrich320390-1LPara la preparación de una de las fases móviles para el control TLC
Agujas (21G, Sterican)B Braun4657543BPara transferencias de solución antes del radiomarcado
Papel de pHVWR85409.600Para probar el pH del producto de radiomarcado
Pipeta 1000 µ L (Gilson PIPETMAN)Fisher Scientific12346132-1000Para medición y transferencia precisa de líquidos
Pipeta 200 µ L (Gilson PIPETMAN)Fisher Scientific12326132-200Para medición y transferencia precisa
de líquidos Puntas de pipeta, 100-1000 μ LCharles RiverD1000IWPara medición y transferencia precisa
de líquidos Puntas de pipeta, 2-200 μ LCharles RiverD200IWPara medición y transferencia precisas de líquidos
RadiocromatógrafoElysia-Raytest-Parael control TLC de la pureza radioquímica
Radiosensor para HPLCElysia-Raytest-Parael control HPLC de la pureza radioquímica
Kit de reactivosABXRT-101Proporciona etanol 60%, NaCl 0.9%, bolsa WFI, cartucho C18, 0.2 µ filtro terminal, agujas de aireación, aguja terminal y vial de residuos
Recipiente blindadoLemerPaxPara la atenuación de la radiación del producto de radiomarcado
Espátula de plástico de un solo usoCorning3005Para la preparación de reactivos
Acetato de sodio trihidrato EMPROVESigma Aldrich1.28204Para la preparación de tampones
de reacción Viales sellados estériles (tipo vidrio 1)CuriumTC-ELU-5Para el acondicionamiento final de soluciones tampón, antioxidantes y de radiomarcaje
Juego de tubos estérilesABXRT-01-HPara la síntesis automatizada de [68Ga]Ga-3BP-3940
Agua estéril para riegoB Braun0082479EPara la preparación de una de las fases móviles para el control de TLC
Módulo de síntesis (GAIA)Elysia-Raytest-Para la síntesis automatizada de [68Ga]Ga-3BP-3940
Jeringa (1 ml, bajo volumen muerto)B Braun9166017VPara péptido en el tampón y adición de metionina en NaCl 0,9%
Jeringas (10 ml)Becton Dickinson309649Para metionina en NaCl 0,9% y
jeringas de acondicionamiento (3 ml)Becton Dickinson309658Para metionina y etanol 60% de acondicionamiento
Tanques de migración TLCFisher Scientific50-212-281Para el control TLC de la pureza radioquímica
Ácido trifluoroacético (apto para HPLC)Sigma Aldrich302031-100MLPara el control HPLC de la pureza radioquímica
Tubos para contador gamma--Para la preparación de ensayos de pureza radioquímica y de vida media
Baño ultrasónicoSelecta3000683Para la sonicación de soluciones preparadas
Molécula vectorial (3BP-3940)MedChemExpressHY-P10131 Molécula vectorial a radiomarcar
Vial para HPLC con inserto de vidrioSigma Aldrich29385-U y SU860066Para el control HPLC de la pureza radioquímica
Mezclador de vórticeVWR444-5900PPara agitar las soluciones preparadas
Agua para HPLCSigma Aldrich34877-2.5L-MPara el control HPLC de la pureza radioquímica
Agua para inyección, matraces de 10 mLAguettan34009 370 641 0 1Para soluciones preparación
la

Referencias

  1. Xiao, Y., Yu, D. Tumor microenvironment as a therapeutic target in cancer. Pharmacol Ther. 221, 107753(2021).
  2. Zhang, L., et al. Targets of tumor microenvironment for potential drug development. MedComm Oncol. 3 (1), e68(2024).
  3. Fouillet, J., Torch....

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Reimpresiones y permisos

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