Para la evaluación de nuevas terapias con células madre es importante no invasiva vía las células inyectadas en vivo. Este video le mostrará cómo etiquetar células madre mesenquimales humanas embrionarias y con los agentes de contraste basados en óxido de hierro en vivo para su posterior RM en vivo.
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Artículo de método
Etiquetado y hESCs hMSCs con nanopartículas de óxido de hierro para no invasivo en el seguimiento in vivo mediante RM
En este artículo
Resumen
Resumen
En los últimos años, la investigación con células madre ha dado lugar a una mejor comprensión de la biología del desarrollo, diversas enfermedades y su impacto potencial en medicina regenerativa. Un método no invasivo para monitorizar las células madre trasplantadas en varias ocasiones en vivo aumentaría en gran medida nuestra capacidad para comprender los mecanismos que controlan la muerte celular del tallo e identificar los factores tróficos y las vías de señalización que mejoren el injerto de células madre. RM ha demostrado ser una herramienta eficaz para la representación en vivo de las células madre con una resolución de cerca de anatomía microscópica. Con el fin de detectar las células madre con retraso mental, las células tienen que estar etiquetados con células específicas de los agentes de contraste RM. Para ello, las nanopartículas de óxido de hierro, como las partículas de óxido de hierro superparamagnético (SPIO), se aplican, debido a su alta sensibilidad para la detección de células y su excelente biocompatibilidad. SPIO partículas están compuestas de un núcleo de óxido de hierro y una capa de dextrano, carboxidextrano o almidón, y la función mediante la creación de heterogeneidades locales de campo, que causan una disminución de la señal en imágenes potenciadas en T2 MR. En esta presentación se muestran las técnicas para el etiquetado de las células madre con agentes de contraste para RM aplicación clínica posterior no invasivo en el seguimiento in vivo de las células marcadas con la RM.
Protocolo
Etiquetado de hMSC con Ferucarbotran
Esta es la técnica para el etiquetado de las células madre mesenquimales con Ferucarbotran, un agente de contraste basados en óxido de hierro de la RM:
- Para empezar, la placa de las células de 18-24 horas antes del procedimiento de etiquetado en frascos T75 en una confluencia del 80%. Si utiliza una placa de cultivo diferentes, esto es igual a cerca de 10.000 células por cm 2.
- Al día siguiente, comenzar con la preparación de los medios de comunicación etiquetado mediante la adición de 30 l de Resovist a 8 ml de medio libre de suero. Esto marca un frasco T75 el 80% de con....
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Discusión
Una representación no invasiva de las células madre es crucial para el seguimiento prácticamente cualquier terapia con células madre basado. Una mejor comprensión de la cinética en vivo de las células madre etiquetado, tal como puede verse en las imágenes de RM, podría abrir el camino a un racional y un uso más eficaz de células madre basado en las terapias. Desde que usamos los agentes de contraste aplicación clínica y las técnicas de imagen, los protocolos presentados deben ser fácilmente traducibles a las aplicaciones en los pacientes. L.......
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Agradecimientos
Este proyecto fue financiado por una subvención Leon J. SEMILLA Thal del Instituto de Medicina Regenerativa de California. Tobias Henning fue financiado por una beca de investigación de la Asociación Alemana de Investigación (DFG, el Excmo 4578/1-2). Queremos reconocer y agradecer Meneses Juanito por sus consejos sobre la cultura de células madre embrionarias humanas.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios | |
|---|---|---|---|---|
| D-MEM con alta glucosa | Reactivo | Sigma-Aldrich | D5648 | |
| Gelatina | Reactivo | Sigma-Aldrich | G1890 | diluir gelatina en PBS hasta una concentración final de 0,1 % |
| PBS (libre de Ca++ y Mg++) | Reactivo | GIBCO, por Life Technologies | 14190-144 | |
| Tripsina-EDTA 0,05 % | Reactivo | Invitrogen | 25300-120 | |
| Tripsina-EDTA 0,25 % | Reactivo | Invitrogen | 25200-114 | |
| Suero bovino fetal caracterizado | Reactivo | Hyclone | SH30071.03 | |
| Filtro celular (40 μm de nailon) | Herramienta | BD Biosciences | 352340 | |
| Knockout DMEM | Reactivo | GIBCO, por Life Technologies | 10829018 | |
| Sustituto de suero Knockout | Reactivo | GIBCO, por Life Technologies | 10828028 | |
| b-Mercapto–etanol | Reactivo | Sigma-Aldrich | 7522 | |
| aminoácidos no esenciales | Reactivo | GIBCO, por Life Technologies | 11140050 | |
| FGF-2 | Reactivo | R&D Systems | 233-FB-025 | |
| Glutamina | Reactivo | GIBCO, por Life Technologies | 25030081 | |
| Penicilina/Estreptomicina | Reactivo | GIBCO, por Life Technologies | 15140-122 | |
| Ferumoxidas (Endorem) | Reactivo | Guerbet | ||
| Ferucarbotrano (Resovist®) | Reactivo | Bayer AG |
Referencias
- Daldrup-Link, H. E., Rudelius, M., Oostendorp, R. A. J., Settles, M., Piontek, G., Metz, S., Heinzmann, U., Rummeny, E. J., Schlegel, J., Link, T. M. Targeting of Hematopoietic Progenitor Cells with MR Contrast Agents. 228, 760-767 (2003).
- Daldrup-Link, H. E., Rudelius, M., Piontek, G., Metz, S., Brauer, R., Debus, G., Corot, C., Schlegel, J., Link, T. M., Peschel, C., Rummeny, E. J., Oostendorp, R. A. J.
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