Etiquetado de las células madre con tintes fluorescentes para la detección no invasiva con imágenes ópticas

Resumen

Este video muestra las técnicas para el etiquetado de las células madre embrionarias y células madre mesenquimales con tintes fluorescentes. Esta técnica se puede utilizar para un seguimiento in vivo de las células madre trasplantadas con técnicas de imagen óptico y de las correlaciones histopatológico con microscopía de fluorescencia.

Resumen

Obtención de imágenes ópticas (OI) es una herramienta fácil, rápida y económica para monitorización in vivo de las nuevas terapias con células madre basado. La técnica se basa en el etiquetado ex vivo de células madre con un tinte fluorescente, la inyección intravenosa posterior de las células marcadas y la visualización de su acumulación en órganos específicos o patologías. La técnica presentada demuestra la forma en que la etiqueta de células madre mesenquimales (hMSC) por simple incubación con el colorante fluorescente lipofílicas DID (C67H103CIN2O3S) y la forma en que la etiqueta de células madre embrionarias (células madre) con la FDA aprobó el colorante fluorescente verde de indocianina (ICG). El mecanismo de captación es a través de la adhesión y difusión del colorante lypophilic a través de la bicapa de fosfolípidos de membrana celular. El etiquetado de eficiencia suele mejorar si se incuban las células con el colorante en el medio libre de suero en lugar de incubación en el suero que contienen los medios de comunicación. Además, la adición del sulfato de protamina agente de transfección mejora significativamente la absorción del agente de contraste.

Protocolo

Etiquetado de las células madre mesenquimales con el colorante fluorescente SABÍA

1. Para comenzar el procedimiento para el etiquetado de las células madre mesenquimales, trypsinize y el recuento de las células para obtener una suspensión con un número determinado de células.
2. Tomar las células de la incubadora y aspirar a los medios tradicionales de los frascos que contienen las células que ser etiquetados
3. Se lavan las células con 10 ml de Mg / Ca libre de PBS. Aspirar el PBS. El Mg y Ca inhibiría la tripsina, por lo que el uso de PBS sin estos.
4. Añadir precalentado tripsina 0,05%, para un frasco T75 usamos 5 ml. Asegúrese de que t....

Discusión

La osteogénesis imperfecta es una técnica relativamente nueva de imágenes, basado en la detección de la fluorescencia. La osteogénesis imperfecta es más sensible que las técnicas de imagen radiotrazador basado en, pero no se asocia con cualquier exposición a la irradiación. OI es un medio eficaz de seguimiento de las células de forma no invasiva y repetitiva, lo que ofrece información para la migración de células al sitio de destino. Una de las principales limitaciones de la técnica es la penetración en el tejido limitado de sondas fluoresc.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Verde de indocianina (IR-125)	Reactivo	Fisher Scientific	AC41254-1000
DMSO	Reactivo	Sigma-Aldrich	D-2650
D-MEM con alta glucosa	Reactivo	Sigma-Aldrich	D5648
Gelatina	Reactivo	Sigma-Aldrich	G1890	Diluir a una concentración final de 0,1 % en PBS
PBS sin Mg ni Ca	Reactivo	GIBCO, por Life Technologies	14190-144
Tripsina-EDTA al 0,05 %	Reactivo	Invitrogen	25300-120
Tripsina-EDTA al 0,25 %	Reactivo	Invitrogen	25200-114
Suero fetal caracterizado (FCS)	Reactivo	Hyclone	SH30071.03
Filtro celular (nylon de 40 μm)	Reactivo	BD Biosciences	352340
DiD	Reactivo	Molecular Probes, Life Technologies	V-22887
Knockout DMEM	Reactivo	GIBCO, por Life Technologies	10829018
Sustituto de suero Knockout	Reactivo	GIBCO, por Life Technologies	10828028
β-Mercapto–etanol	Reactivo	Sigma-Aldrich	7522
Ácidos aminoácidos no esenciales	Reactivo	GIBCO, por Life Technologies	11140050
FGF-2	Reactivo	R&D Systems	233-FB-025
Glutamina 200 mM	Reactivo	GIBCO, por Life Technologies	25030081
Penicilina/Estreptomicina	Reactivo	GIBCO, por Life Technologies	15140-122
Sulfato de protamina	Reactivo	American Pharmaceutical Partners