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Artículo de método

Establecimiento de un sistema de cría de trips de chile (Scirtothrips dorsalis Hood) para el cribado de virulencia de hongos entomopatógenos

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DOI:

10.3791/68600

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18 de julio de 2025

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1Master Program in Plant Medicine and Good Agricultural Practice, National Chung Hsing University, 2Department of Entomology, National Chung Hsing University, 3Applied Zoology Division, Taiwan Agricultural Research Institute, 4International Doctoral Program in Agriculture, National Chung Hsing University

En este artículo

Resumen

Se estableció un protocolo de bioensayo de hojas separadas para la cría masiva de trips de chile utilizando un método modificado de hojas separadas en recipientes de vidrio que contienen agar, lo que garantiza una alta supervivencia y un desarrollo sincronizado. Este sistema permite un cribado eficiente de la virulencia de hongos entomopatógenos contra larvas de2º estadio y proporciona un suministro fiable de trips para evaluaciones de laboratorio, invernadero y campo.

Resumen

El trips del chile (Scirtothrips dorsalis Hood) es una plaga económicamente significativa de los cultivos ornamentales y alimentarios en Taiwán. Los hongos entomopatógenos (EPF) funcionan como un agente de control biológico ecológico para el manejo de trips. Es crucial examinar la virulencia de los aislados de EPF contra los trips del chile en condiciones de laboratorio antes de la aplicación en el campo. Sin embargo, los datos limitados sobre el método de cría de los trips del chile plantean desafíos para el cribado en laboratorio a gran escala. Para abordar este problema, desarrollamos un método modificado de cría en laboratorio para la producción masiva de S. dorsalis.

El método utiliza un sistema de cría de hojas separadas utilizando un recipiente de vidrio que contiene agar que es adecuado para evaluar el EPF contra los trips del chile. Este sistema optimizado de bioensayo de hojas separadas es adecuado para evaluar la eficacia de EPF contra los trips del chile. El sistema tiene la capacidad de producir un gran número de trips en la misma etapa de desarrollo para el cribado de virulencia. De acuerdo con la prueba, el resultado mostró que el aislado de Cordyceps cateniannulata (Cc-NCHU-213) mostró la mayor virulencia (53,6%) contra las larvas de trips del chile en el2º estadio a los 7 días después de la inoculación (d.p.i.). Además, los discos de las hojas incrustados en agar permanecieron frescos durante más de 7 días, lo que permitió que los trips sobrevivieran (tasa de supervivencia del 90% del tratamiento de control) durante todo el período de observación, lo que indica la estabilidad del sistema de cría. Este protocolo demuestra un sistema de cría estable para la producción masiva y para evaluar la virulencia de los aislados de EPF contra los trips del chile y que puede tener utilidad para otros trips, lo que permite la detección de posibles aislados de EPF para el control de trips en el campo.

Introducción

Los trips del chile (Scirtothrips dorsalis Hood; Thysanoptera: Thripidae) es una plaga polífaga que infesta más de 100 especies de plantas en 40 familias diferentes de plantas, incluidas hortalizas y cultivos ornamentales y frutales1. Es originaria de Asia tropical y subtropical-Sudeste Asiático, India, Japón y Taiwán2. Hasta donde sabemos, el trips del chile es la plaga de los cultivos agrícolas y ornamentales, incluidos el mango, el té, el arándano y el loto en Taiwán. Durante las últimas dos décadas, el trips del chile se ha convertido en una plaga económica importante en varios países debido al aumento de la globalización y el comercio agrícola abierto. Además, el alto potencial reproductivo y la adaptabilidad a las áreas recién invadidas contribuyeron a la propagación de esta plaga 1,3.

El trips del chile se alimenta principalmente de follaje joven, brotes, pétalos de flores y frutos inmaduros, lo que provoca necrosis y muertede los tejidos. Además, sirven como vector de diversas enfermedades de las plantas, como el virus de la necrosis de las yemas del cacahuete (GBNV), el virus de la mancha clorótica del cacahuete (GCFSV), el virus de la mancha amarilla del cacahuete (GYSV)4 y el virus de la raya del tabaco (TSV)5. Como resultado, la alimentación de trips del chile puede reducir significativamente el rendimiento y el valor de los cultivos afectados. El manejo exitoso de los trips del chile depende de un plan de manejo integrado de plagas que utilice estrategias de control cultural, biológico y químico1. En Taiwán, los agricultores orgánicos suelen utilizar materiales no químicos, como el aceite de rango estrecho y el aceite de neem, o métodos de control biológico, como el uso de ácaros depredadores y diminutos insectos piratas (por observación personal). Sin embargo, según los comentarios de los agricultores, la aplicación de estos aceites durante la temporada de floración y fructificación puede interferir con la polinización y dañar el polen, lo que lleva a una reducción en el rendimiento y el valor económico. Por lo tanto, el desarrollo de medidas alternativas efectivas de control para los trips del chile es crucial para los agricultores orgánicos.

Los hongos entomopatógenos (EPF) son un grupo de hongos mata insectos que han demostrado ser una técnica de manejo de plagas eficaz y sostenible 6,7,8. Varios estudios han demostrado la eficacia del EPF contra los trips del chile. Las EPF comerciales, Beauveria bassiana GHA (BotaniGard_ES) y Metarhizium brunneum F52 (Met-52 EC), han mostrado un control significativo de trips de chile en plantas de rosas 9,10. Las poblaciones de trips del chile en las plantas de pimiento también pueden ser reducidas por Cordyceps javanica (= Isaria fumosorosea)11. Otros EPFs, como Lecanicillium lecanii y Purpureocillium lilacinum, han sido probados contra trips del chile en diferentes cultivos, incluyendo la planta de chile y el té, y fueron efectivos en el control de esta plaga12,13.

Algunos estudios previos que investigaron la eficacia de los EPF para el control de trips en invernaderos o en el campo se llevaron a cabo sin una primera selección de las especies/cepas de EPF más efectivas, lo que limitó su eficacia. La detección cuidadosa de EPF puede mejorar en gran medida el manejo de plagas. Muchos estudios han criado trips para bioensayos en plantas intactas dentro de jaulas11,14. Si bien un sistema de cría de plantas intacto ofrece un entorno más natural para los trips, plantean desafíos en el manejo de diferentes etapas de desarrollo, ya que los trips exhiben comportamientos distintos en cada etapa. Esta variabilidad puede complicar la selección de etapas específicas para fines experimentales específicos. Además, las condiciones del suelo dentro del sistema de cría de plantas intactas pueden influir en la pupación y eclosión de trips del chile, reduciendo así el número de individuos disponibles para bioensayos posteriores15, limitando los recursos para bioensayos posteriores. Además, los sistemas de cría de plantas enteras requieren más espacio y un cuidado continuo para las plantas, ya que las plantas estresadas pueden alterar el comportamiento de los trips y pueden llevar más tiempo y recursos. Hay pocos informes de sistemas de cría de trips basados en material vegetal no vivo (por ejemplo, tejido vegetal desprendido o dietas artificiales) para experimentos de bioensayos de laboratorio, pero los detalles de estos métodos a menudo no estaban claros o se omitían 12,16.

Este estudio tuvo como objetivo desarrollar un sistema de cría masiva simple, rentable y sostenible de trips del chile en condiciones de laboratorio. En este protocolo, se modificó un método de cría de discos foliares7 para ofrecer un enfoque más eficiente y controlado para la cría masiva de trips, lo que permite una selección precisa de las etapas de desarrollo para los bioensayos a través de un control estricto de las condiciones ambientales. Además, se desarrolló un sistema de bioensayo estable y reproducible para evaluar la virulencia de los aislados de hongos entomopatógenos (EPF) en un 50% de tiempo letal (LT50) y una concentración letal mediana del 50% (LC50), que se refieren al tiempo estimado bajo una dosis específica, y la concentración de suspensión fúngica requerida para causar el 50% de mortalidad de los trips del chile. respectivamente. Mediante la aplicación de este método, se pueden identificar correctamente los trips recolectados en el campo y se pueden mantener las colonias estables de trips en el laboratorio para probar la eficacia de diferentes aislados de hongos utilizando una metodología más fácil y reproducible.

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Protocolo

NOTA: El diagrama de flujo experimental completo se muestra en la Figura 1.

1. Recolección de campo de trips del chile y mantenimiento de colonias

  1. Colección de trips del chile
    1. Examine visualmente ambos lados de las hojas y dentro de las flores en busca de infestación de trips de chile en las plantas de arándanos en una granja de arándanos afectada.
    2. Registre los detalles de cada muestra (por ejemplo, parte de la planta y gravedad de la infestación) y confirme las prácticas de producción con los agricultores, como la agricultura convencional o la agricultura orgánica, incluida la aplicación de aceite mineral y enemigos naturales.
    3. Corta las hojas y las flores infestadas de trips del chile y transfiérelas a la bolsa de plástico con cremallera (Tabla de materiales), luego sella la bolsa con cremallera con un poco de aire en el interior para mantener vivos a los trips. Lleve la muestra al laboratorio en un plazo de 3 h.
      NOTA: Coloque la muestra en una hielera cuando el tiempo de recolección de campo sea superior a 3 h.
    4. Prepare un recipiente de cría de vidrio (35 mm de altura, 45 mm de diámetro interior), coloque tres capas de toalla de papel circular (diámetro 40 mm) en el fondo del recipiente de crianza de vidrio y luego agregue 8-10 gotas (400-500 μL) de agua filtrada (Figura 1 y Tabla de Materiales).
    5. Recoja una hoja joven de mango rojo de los campos de mango (Figura 1). Lave la hoja y verifique bajo un microscopio óptico (Tabla de materiales) si hay huevos de insectos u otra contaminación de insectos antes de preparar el recipiente de vidrio para la cría. Corta la hoja de mango con un cortador de cuero (Tabla de Materiales) en un disco circular (40 mm) y colócalo sobre la toalla de papel húmeda.
      NOTA: Las hojas de mango son recursos más estables para alimentar a los trips que las hojas jóvenes de arándano, que solo crecen estacionalmente.
    6. Observe los trips del chile bajo un microscopio óptico con un aumento de 10x y transfiera 10 trips adultos (cinco machos y cinco hembras) usando un pincel fino para pintar (Tabla de Materiales) al contenedor de cría de vidrio.
    7. Selle cada contenedor de cría de vidrio con dos capas de parafilm (Tabla de Materiales) y haga unos 40 pequeños agujeros usando un alfiler de insectos #00 para la ventilación (Tabla de Materiales).
    8. Mantener el recipiente de cría de vidrio en una incubadora a 25 ± 1 °C, ~70% de humedad relativa con un fotoperiodo de luz:oscuridad (L:D) = 12 h: 12 h (Tabla de Materiales).
    9. Retire los adultos con un pincel después de 48 h.
      NOTA: Según nuestra observación, los trips hembra pondrán huevos ~ 2 días después de ser transferidos al contenedor de cría de vidrio.
    10. Observe los tejidos de las hojas con huevos bajo un microscopio estereoscópico para confirmar aún más la oviposición (Figura 1 y Tabla de Materiales). Coloque un disco de hoja de mango fresco sobre la hoja con huevos y agregue de 8 a 10 gotas de agua filtrada en la toalla de papel para mantener la humedad.
  2. Mantenimiento de la población de trips del chile
    NOTA: Los huevos eclosionan en larvas de 1er estadio después de ~ 5-7 días.
    1. Transfiera directamente la hoja que contiene las larvas del1er estadio a un nuevo recipiente de cría en vidrio.
      NOTA: Con un pincel, transfiera suavemente las larvas del primer estadio a un nuevo recipiente de cría de vidrio, evitando la contaminación por el crecimiento de hongos podridos e inesperados en las hojas de mango. Según nuestra observación, una hembra adulta pone un promedio de 6 huevos por día.
    2. Observe los trips del chile a diario. Agregue de 8 a 10 gotas de agua filtrada cada 4 días en la toalla de papel. Agregue un disco de hoja de mango fresco dentro del recipiente cada 4 días, antes de que la hoja vieja se seque.
      NOTA: Las larvas del primer estadio emergen en adultos en ~ 7-10 días, dependiendo de los factores ambientales como la temperatura y la humedad.
    3. Observe la población de trips del chile diariamente hasta que los trips se conviertan en adultos, y repita los pasos del paso 1.1.4 para el mantenimiento de la población a largo plazo.
  3. Cría masiva de trips del chile
    1. Recoja hembras adultas de la población mantenida y prepare un recipiente de cría de vidrio basado en los pasos anteriores.
    2. Transfiera 10 hembras adultas al recipiente y siga los pasos de los pasos 1.1.4 a 1.1.10 para obtener una hoja con huevos.
      NOTA: Una hembra adulta pone un promedio de 6 huevos por día.
    3. Transfiera suavemente ~ 120 larvas de1er estadio a un nuevo recipiente de cría de vidrio con un pincel.
    4. Observe los trips del chile a diario. Agregue de 8 a 10 gotas de agua filtrada en la toalla de papel cada 4 días. Agregue un disco de hoja de mango fresco en el recipiente cada 4 días antes de que la hoja vieja se seque.
    5. Recoja las larvas del1er estadio a los 5-7 días después de la puesta de los huevos; recolectar larvas de2º estadio después de 7-10 días; recoja adultos después de ~ 14 días para el bioensayo (Figura 2).
      NOTA: Observe la morfología para distinguir las diferentes etapas de los trips del chile para experimentos posteriores (Figura 2).

2. Identificación molecular de los trips del chile

NOTA: Los trips recolectados en el campo deben identificarse a nivel de especie mediante identificación molecular utilizando un fragmento del gen mitocondrial citocromo oxidasa I (COI), un marcador comúnmente utilizado para los trips del chile17,18.

  1. Extracción de ADN genómico de trips del chile
    1. Recoja un trips de chile adulto en un tubo de centrífuga de 1,5 mL (Tabla de materiales).
    2. Homogeneizar los trips del chile con un mortero de pellets, luego aislar el ADN genómico usando el kit comercial de acuerdo con el protocolo del fabricante (Tabla de Materiales).
  2. Amplificación por PCR y secuenciación de ADN
    1. Amplifique el fragmento de ADN esperado de trips del chile mediante el uso de PCR Master Mix (2x) con un par de cebadores COI, cebadores directos LCO 1490 y cebadores inversos HCO 2198, que amplifican el gen COI mitocondrial parcial (Tabla de materiales).
      1. Prepare una mezcla de PCR de 20 μL que contenga 2 μL de plantilla de ADN genómico trip, 1 μL de cebadores directos e inversos, 10 μL de 2x PCR Master Mix y 6 μL de ddH2O (Tabla de materiales).
      2. Realizar la PCR con un termociclador con las siguientes condiciones de ciclo: desnaturalización inicial a 94 °C durante 2 min, 35 ciclos de 94 °C durante 30 s, 52 °C durante 1 min, 72 °C durante 1 min, seguido de una extensión final de 72 °C durante 10 min (Tabla de Materiales).
    2. Comprobar el amplicón de PCR por electroforesis en un gel de agarosa al 1% para verificar el resultado de la amplificación (Figura 3).
    3. Extirpar la banda objetivo (el tamaño esperado del amplicón era de 658 pb) y purificar el amplicón de PCR COI de los trips del chile utilizando un kit de purificación de Gel/PCR de acuerdo con el protocolo del fabricante. Envíe el producto purificado para su secuenciación a través de un servicio comercial de secuenciación. (Tabla de Materiales).
  3. Análisis de secuencias
    1. Evalúe la calidad de la secuencia utilizando el software de referencia (Tabla de Materiales).
    2. Abrir el archivo FASTA o TXT y recortar manualmente las bases de baja calidad en los extremos de 5' y 3' eliminando las secuencias no deseadas.
    3. Realice una búsqueda BLAST en la base de datos del NCBI (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) utilizando los parámetros predeterminados para confirmar la identidad de la especie.

3. Preparación de hongos entomopatógenos

NOTA: Los aislados de EPF utilizados en este estudio se enumeran en la Tabla 1.

  1. Recuperación de aislados de hongos a partir de una biblioteca de recursos fúngicos
    1. Descongele el caldo de conidios fúngicos en conserva (conidios suspendidos en glicerina al 30%) de un congelador a -80 °C.
    2. Transfiera aproximadamente 10 μL de la suspensión de conidios y extiéndala uniformemente en una placa de agar dextrosa Sabouraud (SDA) de 5,5 cm 1/4 utilizando un esparcidor de celdas en una campana de flujo laminar. El medio se prepara mezclando 0,75 g de caldo de dextrosa Sabouraud y 1,5 g de agar en 100 mL de agua bidestilada (ddH2O) (Tabla de Materiales).
    3. Selle la placa de Petri con parafilm (Tabla de Materiales) y transfiera la placa a la incubadora oscura a 25 °C durante 10-14 días.
    4. Subcultive el micelio fúngico de crecimiento activo mediante rayas en una placa fresca de agar dextrosa Sabouraud (SDA). Incubar los hongos en la oscuridad a 25 °C durante 10-14 días para permitir el desarrollo de los conidios antes de la cosecha.
      NOTA: Utilice cultivos de hongos que tengan aproximadamente 10 días de antigüedad para bioensayos posteriores. Los cultivos de más de 14 días no se recomiendan para las pruebas de virulencia debido a las posibles reducciones en la viabilidad de los conidios.
  2. Preparación de la suspensión de conidios
    1. Agregue 2-3 mL de 0.03% Tween 80 a la superficie de un cultivo de hongos de 10-14 días de edad en 1/4 SDA. Raspe suavemente los conidios con un asa estéril (Tabla de materiales).
    2. Transfiera la suspensión de hongos a un tubo de centrífuga limpio de 15 ml.
    3. Homogeneizar la suspensión mediante vórtice a la máxima velocidad y filtrarla a través de papel de filtro para eliminar los restos de hifas y obtener una suspensión de conidios puros.
    4. Utilice un hemocitómetro (Tabla de Materiales) para verificar el número de conidios bajo un microscopio óptico y diluya la suspensión a 108 conidios/mL.
    5. Transfiera la suspensión de conidios a un micropulverizador esterilizado con luz ultravioleta para su posterior aplicación en el bioensayo.
      NOTA: Asegúrese de que la suspensión de conidios esté completamente agitada en vórtice antes de cada transferencia para evitar que se asiente. Antes de su uso, esterilice el micropulverizador exponiéndolo a la radiación ultravioleta durante 30 minutos dentro de una campana de flujo laminar.

4. Cribado de virulencia contra trips del chile

  1. Preparación de larvas de2º estadio
    1. Recoja las larvas del2º estadio siguiendo los pasos 1.3.1-1.3.5 para el siguiente experimento.
      NOTA: Distinga las larvas del2º estadio por su color amarillo del cuerpo y su amplio abdomen en comparación con las larvas del primer estadio (Figura 2).
  2. Preparación del recipiente de inoculación
    NOTA: Seleccione la especie de hoja en función del cultivo objetivo de trips del chile. En este estudio, se recolectaron trips de chile del campo de hojas infestadas de arándanos 'Biloxi' (V. corymbosum L. × V. darrowii Camp). Por lo tanto, el bioensayo de EPF contra trips de chile se llevará a cabo en hojas de arándano.
    1. Recoja hojas jóvenes de arándanos de una granja de arándanos y lave las hojas de arándanos para eliminar el polvo de la superficie y cualquier otro artrópodo si está presente.
    2. Seca las hojas al aire o usa toallas de papel para limpiar el agua; Luego, revise la superficie de las hojas de arándano en busca de otros artrópodos o huevos bajo un microscopio estereoscópico. Retira los artrópodos que estén presentes.
    3. Corte un disco de hoja de 2,8 cm de diámetro con un cortador de cuero (Tabla de materiales), desinfecte la hoja con lejía al 1% (solución de hipoclorito de sodio) y enjuague 2 veces con agua esterilizada para eliminar cualquier residuo de lejía en las hojas.
      NOTA: Prepare el disco de hoja antes de la solidificación del agar para asegurarse de que el disco de hoja se pueda incrustar correctamente en el agar agua.
    4. Autoclave una solución de agar agua al 2,5% (2,5 g de agar por 100 mL de ddH2O) para la esterilización.
    5. Vierta 3 mL de agar agua al 2,5% en pequeños recipientes de vidrio (35 mm de altura, 30 mm de diámetro interior) dentro de una campana de flujo laminar antes de que el agar se solidifique. Deje que el agar se enfríe a aproximadamente 40 °C hasta que alcance un estado semisólido.
    6. Coloque suavemente el disco de la hoja (con el lado adaxial hacia arriba) sobre el agar, incrustándolo ligeramente con una exposición mínima por encima de la superficie del agar. Una vez que el agar agua se solidifica completamente, los recipientes de vidrio están listos para el bioensayo.
  3. Inoculación y observación de EPF
    1. Antes de la aplicación, vórtice la suspensión conidial a fondo. Con un micropulverizador, aplique uniformemente 0,1 mL de la suspensión (preparada en el paso 3.2.4) sobre la superficie de cada disco de hojas desde una distancia aproximada de 10 cm dentro del recipiente de vidrio.
      NOTA: Pruebe las áreas de pulverización antes del experimento. Asegúrese de que la pulverización cubra uniformemente todo el disco de la hoja con una capa fina. Si las gotas se acumulan en el agua estancada de la hoja, reduzca el volumen de inoculación para evitar la humectación excesiva.
    2. Seque al aire la suspensión de conidios en la hoja durante 30 minutos en condiciones estériles (por ejemplo, en una campana de flujo laminar).
    3. Transfiera 10 de las larvas del2º estadio a cada recipiente con un pincel fino y selle cada contenedor de cría de vidrio con dos capas de parapelícula.
    4. Haga ~ 30 agujeros pequeños usando un alfiler de insectos # 00 (Tabla de materiales) para la ventilación.
    5. Inocular el recipiente a 25 ± °C de la incubadora con ~70% de humedad relativa y un fotoperiodo de L:D = 12 h: 12 h.
    6. Observe y registre la mortalidad de los trips del chile bajo un microscopio estereoscópico con un aumento de 10x al día durante 7 días.
    7. Mantenga las larvas muertas dentro del recipiente de vidrio para la observación de micosis para confirmar la infección por EPF.

5. Bioensayo de aislados de EPF seleccionados

NOTA: Se puede seleccionar el aislado de EPF más virulento o varios aislados con alta virulencia para un bioensayo dependiente de la dosis contra los trips del chile. Se utilizaron tres concentraciones diferentes de conidios, que oscilaron entre 106 y 108 conidios/mL, para evaluar la relación entre la dosis y la patogenicidad.

  1. Preparación de la suspensión de conidios
    1. Recupere el aislado EPF seleccionado siguiendo el paso 3.1.
    2. Prepare tres concentraciones de suspensiones de conidios (106, 107 y 108 conidios/mL) como se describe en el paso 3.2.
  2. Preparación de larvas de2º estadio
    1. Recoja las larvas del segundo estadio siguiendo el paso 4.1 para obtener adultos recién emergidos.
  3. Preparación del recipiente de inoculación
    1. Siga el paso 4.2. para preparar el recipiente de inoculación que contiene discos de hojas de arándano incrustados en agar agua.
  4. Inoculación y observación de EPF
    1. Realice la inoculación de EPF con tres concentraciones de suspensión de conidios, como se describe en el paso 4.3.

6. Análisis estadístico

  1. Cálculo de la mortalidad
    1. Transformar los datos de mortalidad de cada cepa fúngica mediante la transformación de Arcsin antes de realizar un análisis de varianza unidireccional (ANOVA) para evaluar las diferencias entre los tratamientos fúngicos (nivel de significación establecido como p < 0,05).
    2. Realice comparaciones post hoc de las medias de tratamiento utilizando la prueba de Diferencia Significativa Honesta (HSD) de Tukey.
  2. Cálculo de la mediana del tiempo letal (LT50) y de la mediana de la concentración letal (LC50)
    1. Calcule los valores de la mediana del tiempo letal (LT50) y la mediana de la concentración letal (LC50) mediante el análisis de regresión Probit.
    2. Cree y rellene las variables denominadas "total", "respuesta" y "duración" (para LT50) o "concentración" (para LC50) con los datos observados en la interfaz del software.
      NOTA: Si la mortalidad acumulada no supera el 50% durante el período de observación, los valores de LT50 y/o LC50 no pueden estimarse de forma fiable.
    3. Realice un análisis Probit navegando a Analizar | Regresión | Probit. Establezca el "total" como el número total de insectos analizados, la "respuesta" como el número de insectos muertos y la "duración" o "concentración" como la covariable. Establezca el nivel de significación para el factor de heterogeneidad en 0,05 pulsando Opciones y estableciendo el nivel de significación para el uso del factor de heterogeneidad en 0,05.

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Resultados

El diagrama de flujo experimental presentado en este estudio demostró que se pudo establecer el sistema de cría estable de los trips del chile, desde la recolección en campo hasta el tamizaje de virulencia de los aislados de EPF (Figura 1). Aunque la observación morfológica puede distinguir a los trips del chile de otros trips de las flores, el uso de la secuencia parcial de COI como marcador molecular, incluido el tamaño del amplicón de PCR y la secuenciació...

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Discusión

Los trips del chile son una plaga de importancia mundial que afecta a numerosos cultivos de importancia económica como el maíz, el maní, el pimiento, la soja, la fresa, la batata y el tomate 1,11,19. Las estrategias de control actuales se basan en enfoques integrados que involucran prácticas culturales, agentes de control biológico y tratamientos químicos, incluyendo el uso de enemigos naturales...

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Divulgaciones

Los autores declaran que no hay ningún conflicto de intereses involucrado en este trabajo.

Agradecimientos

Extendemos un agradecimiento especial al Sr. Lin, Huanf-Jen de la granja de arándanos Humi (distrito de Wufeng, ciudad de Taichung), quien proporcionó las plantas de arándanos. Esta investigación fue apoyada por 113-2313-B-005 -024 -MY3 del Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (NSTC).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
#00 alfiler de insectoEntosphinx DMM0220Hecho en el Reino Unido
Tubo de centrífuga de 1,5 mlCorning incorporadoMCT-175-CHecho en EE. UU.
10 μ Asa de inoculación LNEST Científico718201Hecho en EE. UU.
Escalera de ADN III de 100 pbAyuda genéticaDL007Hecho en Taiwán.
2x Mezcla maestra de PCR SuperRedBioherramientasTE-SR01Hecho en Taiwán
Placa de Petri de 6 cmAlfa Plus Científico16021Hecho en Taiwán
agar-agarBioman CientíficoAGR001.1Grado de microbiología
agarosaBioman CientíficoPB1200Hecho en Taiwán
BioGreen Tampón de gel de ADN seguroBioman CientíficoSDB001THecho en Taiwán
Kit de tejido de extracción de alta velocidad Easy DNAFisher BiotecET-100https://www.fisherbiotec.com.au/wp-content/uploads/2021/11/FB-EDNA-DNA-Kits-flyer-11Nov21.pdf (Hecho en Australia)
Imprimación directa: LCO 1490Genómica PO-PR220919G6Secuencia: 5'-GGT CAA CAA ATC ATA AAG ATA TTG G-3'
GenepHlow Gel/PCR KitAyuda genéticaDFH300http://www.protech-bio.com/UserFiles/file/Gene-Spin%20Genomic%20DNA%20Kit.pdf
contenedor de cría de vidrio Empresa de equipos de laboratorio SunshineTamaño: 35 mm de altura, 45 mm de diámetro interior. Se puede reemplazar por cualquier tamaño similar de vaso de plástico o vidrio.
hemocitómetroPaul Marienfeld640030Hecho en Alemania
incubadoraPunto de accesoF740Hecho en Taiwán
cortador de cueroTaller Hecho a Mano Realhttps://shopee.tw/jj891004? categoryId=100636& entryPoint=ComprarPorPDP& itemId=16023929406
Termociclador MiniAmpThermo Fisher ScientificReferencia A37834Hecho en EE. UU.
microscopio óptico Nikon  Ci-LHecho en Japón
pincel de pinturaCompañía de cepillos Tian Cheng4716608400352Se puede reemplazar por un pincel de acuarela de punta fina, equivalente a un pincel redondo de tamaño 0 o 1.
servilleta de papelFlor de mayoBLS007-8Hecho en Taiwán
Parafilm MBemisTeléfono: PM-996Hecho en EE. UU.
Mortero de pelletsBioman CientíficoGT100RHecho en Taiwán
Cebador inverso: HCO 2198Genómica PO-PR220919G6Secuencia: 5'-TAA ACT TCA GGG TGA CCA AAA AAT CA-3'
Caldo de dextrosa SabouraudHiMediaMH033-500GHecho en India
microscopio estereoscópicoSoptopSZN71Hecho en Taiwán
Búfer TAE 50XBioman CientíficoTAE501000Hecho en Taiwán
Interpolación 80PanReac AppliChem142050.1661Hecho en Taiwán
Bolsa con cremalleraCompañía de plástico Wenchen1809000061Tamaño: 12 cm de ancho y 17 centímetros de largo. (Hecho en Taiwán)

Referencias

  1. Kumar, V., Kakkar, G., McKenzie, C. L., Seal, D. R., Osborne, L. S. Weed and pest control-conventional and new challenges. , 53-77 (2013).
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