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Artículo de método

Aclaramiento óptico transitorio mediante moléculas absorbentes para la obtención de imágenes ex vivo e in vivo

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DOI:

10.3791/68629

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11 de julio de 2025

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En este artículo

Resumen

Las técnicas de aclaramiento óptico, como las soluciones de moléculas absorbentes, reducen temporalmente la dispersión de la luz para mejorar la obtención de imágenes biológicas y ofrecen estrategias de imagen in vivo biocompatibles y reversibles para órganos profundamente integrados. Este protocolo presenta procedimientos experimentales detallados, así como procesamiento avanzado de imágenes para lograr imágenes dinámicas de alta calidad para la dinámica en tiempo real en animales vivos.

Resumen

Las imágenes dinámicas son una herramienta fundamental en biología y medicina, pero están limitadas por la dispersión de la luz en los tejidos vivos causada por los desajustes del índice de refracción, lo que reduce la profundidad de penetración y la resolución en los tejidos biológicos. Trabajos anteriores introdujeron un enfoque novedoso para lograr la transparencia óptica en animales vivos mediante la utilización de moléculas fuertemente absorbentes. Cuando estas moléculas absorbentes, como la tartrazina, un colorante aprobado por la FDA que se usa comúnmente en los alimentos, se disuelven en agua, modifican el índice de refracción del medio acuoso a través de las relaciones Kramers-Kronig. Esta modulación permite reducir el desajuste del índice de refracción entre componentes separados en el tejido con índices de refracción distintos, mitigando así la dispersión. Este artículo reporta la metodología detallada de la técnica de limpieza de tejidos utilizando una solución acuosa a base de Tartrazina, aplicada tanto a muestras ex vivo como in vivo . Este enfoque hace que los cuerpos de los ratones vivos sean transparentes en el espectro visible, lo que permite obtener imágenes más claras y profundas de los procesos y estructuras internas. A continuación, se utilizó un algoritmo avanzado de procesamiento de imágenes para mejorar el contraste y la segmentación de los órganos de interés. Además, se muestra una alta transparencia en muestras ex vivo , como la pechuga de pollo, tratada con una solución a base de tartrazina. Este método ofrece un enfoque versátil y accesible para mejorar las capacidades de obtención de imágenes en diversas modalidades y allana el camino para avanzar en la comprensión de sistemas biológicos complejos.

Introducción

La imagen biológica ha sido desafiada durante mucho tiempo por la dispersión de la luz, que oscurece las estructurasde interés. Las técnicas de limpieza óptica tienen como objetivo reducir la dispersión de la luz y mejorar la claridad visual, lo que permite la visualización de estructuras previamente ocultas2. El desarrollo de estas técnicas ha dado lugar a una amplia gama de métodos diseñados para mejorar la imagen óptica de tejidos biológicos ex vivo, incluso animales enteros, sin disección física de las muestras3. Sin embargo, el desarrollo de técnicas....

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Protocolo

Todos los experimentos con animales realizados fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) de la Universidad de Texas en Dallas de acuerdo con la Guía de los NIH para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio. Los reactivos y el equipo utilizado se enumeran en la Tabla de Materiales. El código de procesamiento de imágenes está disponible en Github: https://github.com/ou-group-utd/JoVE-2025-Image-Processing

1. Preparación de la solución de tartrazina

  1. Para muestras ex vivo
    1. Para preparar soluciones de color....

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Resultados

Demostración de transparencia óptica en tejido de pechuga de pollo ex vivo
Para investigar la propagación de la luz a través de tejido ex vivo , utilizamos trozos de pechuga de pollo cruda deshuesada en rodajas con grosores de 1,5 mm, 2,5 mm y 3,5 mm (Figura 2B). Los tejidos se cortaron en paralelo a las fibras de colágeno, lo que garantizó una orientación consistente de las fibras muscu.......

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Discusión

Este trabajo presenta un método de protocolo completo y reproducible para lograr transparencia óptica en tejidos biológicos que utilizan moléculas absorbentes, específicamente el colorante alimentario Tartrazine aprobado por la FDA (aprobado para su uso en productos alimenticios, no en aplicaciones médicas). Este método minimiza eficazmente la dispersión intrínseca en el tejido al alterar el índice de refracción dentro del microambiente del tejido, lo que mejora la transparencia óptica. .......

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Divulgaciones

Todos los autores declaran no tener conflicto de intereses.

Agradecimientos

ZO agradece el apoyo de la Universidad de Texas en Dallas.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Balanza analíticaHZKFA220S
Máquina de anestesia animalEmpresa de ciencias de la vida RWDTAIJI-IEAnestésicos por inhalación
Atipamezol HCL inyectable 5 mg/mlCovertus82124Anestesia inyectable
Cámara CMOSLaboratorios ThorCS165CU/M, Zelux
Dexmedetomidina HCL inyectable 5 mg/10 mLCovertus72960Anestesia inyectable
Iluminador de luz de fibraEmpresa de ciencias de la vida RWD76301Fuente de luz para iluminación superior
Portaobjetos de vidrioCravitySci0303-2122Portaobjetos de microscopio de grado superior
Manta homeotérmicaEmpresa de ciencias de la vida RWD69027Controlador de temperatura para animales
Tratamiento de imágenesAbrir CVPitónSoftware
Jeringa de insulina 0,5 ml 29 gPunto de confort26028Anestesia inyectable
IsofluranoCovertus029405 SKUAnestésicos por inhalación
Inyección de cemina HCL 100 mg/mlDechra20042240Anestesia inyectable
Fuente de luz LEDGGE corpTLB-01Fuente de luz para iluminación superior
LenteLaboratorios ThorMVL4WADistancia focal de 3,5 mm y apertura f/1,4
NairIglesia y DwightL 1224Crema depilatoria
PBS ph 7.4 (1x)Gibco2902869Anestesia inyectable
HisopoEmpresa puritana de productos médicosHospital 806-WC
Agarosa SeaPlaqueLonza50101Químico
TartrazinaMilliporeSigmaNúmero CAS: 1934-21-0Químico
Pipeta de transferenciaMarca de pescador13-711-9AMMD
Espectrofotómetro UV-VIS-NIRShimadzuEspecificaciones sólidas-3700iInstrumento
VialesQorpak242633
Pipetas volumétricasInvestigación de Eppendorf plus3123000063100-1000µ L
Sistema de purificación de aguaCiencia de la avidezSOLO SInstrumento

Referencias

  1. Yun, S. H., Kwok, S. J. J. Light in diagnosis, therapy and surgery. Nat Biomed Eng. 1 (1), 0008(2017).
  2. Tuchin, V. V. Optical clearing of tissues and blood. , SPIE Publications. (2005).
  3. Ertürk, A.

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Reimpresiones y permisos

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