Las líneas celulares resistentes a los medicamentos permiten comprender los mecanismos de resistencia al tratamiento y la evaluación no clínica de nuevos compuestos, medicamentos reutilizados y terapias combinadas. Este artículo presenta un protocolo para crear líneas celulares resistentes mediante la exposición de líneas celulares parentales a aumentos escalonados en la concentración del fármaco diana.
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Artículo de método
Desarrollo de líneas celulares resistentes a los medicamentos para procedimientos experimentales
En este artículo
Resumen
Resumen
El desarrollo de líneas celulares resistentes a los medicamentos es esencial para comprender los mecanismos de la resistencia a los medicamentos e identificar estrategias para superar el fracaso del tratamiento en la terapia contra el cáncer. Los modelos de resistencia permiten la evaluación preclínica de nuevos compuestos, fármacos reutilizados y terapias combinadas. Para generar células resistentes, las líneas celulares cancerosas parentales se exponen repetidamente a concentraciones cada vez mayores del fármaco objetivo durante varias semanas. Las células que sobreviven y proliferan en cada etapa se seleccionan, expanden y exponen a dosis más altas de medicamentos. El desarrollo de resistencia se confirma cuantificando y comparando los valores de concentración inhibitoria media máxima (CI50) entre células parentales y resistentes mediante ensayos de viabilidad celular y análisis de regresión no lineal. Los valores significativamente aumentados de IC50 indican una adaptación exitosa a la presión del fármaco y el desarrollo de resistencia. Estas líneas celulares resistentes a los medicamentos están disponibles para análisis integrales, como microarrays y secuenciación de células individuales, así como varios experimentos in vitro o in vivo . Estos modelos proporcionan herramientas valiosas para investigar posibles estrategias terapéuticas para superar la resistencia a los medicamentos.
Introducción
La quimioterapia es la opción de tratamiento más utilizada para los cánceres locales que no son susceptibles de cirugía o radioterapia o cánceres metastásicos. Los medicamentos dirigidos molecularmente y la quimioterapia se utilizan como tratamientos de primera línea para muchas neoplasias malignas, y su eficacia es ampliamente reconocida. Algunos cánceres muestran resistencia a ciertos medicamentos desde el inicio del tratamiento, lo que hace que el tratamiento sea ineficaz. Sin embargo, en casos más comunes, el tratamiento que inicialmente fue efectivo se vuelve ineficaz debido al desarrollo de resistencia a los medicamentos, lo que....
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Protocolo
1. Ensayos de cultivo celular y viabilidad celular
NOTA: El paclitaxel es un medicamento contra el cáncer y es citotóxico. Cuando lo manipule, use una bata, gafas y guantes, y trabaje dentro de un gabinete de seguridad para evitar la inhalación en el cuerpo. El DMSO no es altamente citotóxico, pero cuando entra en contacto con la piel o las membranas mucosas, aumenta la permeabilidad de los medicamentos disueltos, así que use una bata, gafas y guantes cuando lo manipule.
- Cultivar células DU-145 en una placa de cultivo celular de 10 cm utilizando medio completo (RPMI-1640 + 1% de....
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Resultados
Con este método, anteriormente pasamos 9 meses estableciendo con éxito células DU145 resistentes a paclitaxel (DU145-TxR). Los resultados del ensayo de viabilidad celular mostraron que el valor de IC50 de paclitaxel para la línea celular madre DU145 fue de 1,1 nM, mientras que el valor de IC50 para DU145-TxR fue 149,6 veces mayor que el de la línea celular madre (IC50: 164,6 nM) (Tabla 1 y Figura 2). Este resultado indica que DU145-TxR ha adq.......
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Discusión
El desarrollo de líneas celulares cancerosas resistentes a los medicamentos es un método establecido para investigar la toxicidad de los medicamentos y los mecanismos de resistencia, pero el primer desafío que enfrentan los investigadores es seleccionar un modelo apropiado para expresar resistencia. Un método común para crear líneas celulares resistentes a los medicamentos in vitro es exponer la línea celular al fármaco objetivo, pero es necesario considerar cómo establecer la concentrac.......
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Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen posibles conflictos de intereses.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado en parte por la subvención P01 CA093900 de los Institutos Nacionales de Salud.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Tripsina-EDTA al 0,05 % | Gibco | 25300-054 | |
| Pipeta serológica desechable de 10 ml | Fisher scientific | 13-678-11E | |
| Plato de 100 mm | Tubo | 353003 | |
| 15 ml Viales | Corning | ||
| 2,0 ml Placa de | Corning | 431386 | |
| de | 96 pocillosCorning | 353072 | |
| Portaobjetos de cámara de recuento de células | Invitrogen | C10228 | |
| Reactivo de proliferación celular WST-1 | Centrífuga | de 5015944001 | |
| 5702 | R eppendorf | ||
| innumerables II | Invitrogen | Contador de células | |
| Dimetil sulfóxido | Sigma | D2650 | |
| DPBS | Gibco | D4W2J | |
| DU145 | ATCC | HTB-81 Línea celular de cáncer de | próstata |
| EVOS FLc | Thermo Fisher Scientific | Microscopio digital invertido | |
| FBS | Gibco | A5670701 | |
| Paclitaxel | Selleck | S1150 | |
| Penicilina– estreptomicina | Invitrogen | 15140-122 | |
| RPMI 1640 | Gibco | 11875-093 | |
| Synergy H1 | BioTek | Lector de microplacas | |
| Solución azul de tripano 0.4% | Invitrogen | 15250061 |
Referencias
- Zahreddine, H., Borden, K. L. Mechanisms and insights into drug resistance in cancer. Fron Pharmacol. 4, 28(2013).
- Emran, T. B., et al. Multidrug resistance in cancer: understanding molecular mechanisms, immunoprevention and therapeutic ap....
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Reimpresiones y permisos
