Este estudio tiene como objetivo investigar los efectos de la electroacupuntura en la regeneración de mielina en un modelo de LM en ratas y verificar si la vía de señalización Neuregulin1 (NRG1)-ErbB4 juega un papel en este proceso.
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Artículo de investigación
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Este estudio tiene como objetivo investigar los efectos de la electroacupuntura en la regeneración de mielina en un modelo de LM en ratas y verificar si la vía de señalización Neuregulin1 (NRG1)-ErbB4 juega un papel en este proceso.
La lesión medular (LME) suele provocar una disfunción neurológica grave, y la reparación de mielina es un paso fundamental en la recuperación de la función neurológica. La electroacupuntura (EA), un método terapéutico que combina la acupuntura tradicional con la estimulación eléctrica, se ha aplicado ampliamente en el campo de la reparación nerviosa. Sin embargo, las vías específicas de señalización implicadas en la EA no se han aclarado completamente. Este estudio tiene como objetivo investigar los efectos de la EA en la regeneración de mielina en ratas con lesión medular y verificar si la vía de señalización Neuregulin1 (NRG1)-ErbB4 juega un papel en este proceso. Las ratas con lesión medular fueron inducidas por una lesión por clip de aneurisma en el segmento espinal T10. Se implantó un catéter de polietileno (PE) en el conducto vertebral entre los espacios intervertebrales L5-6 y se fijó de forma subcutánea para establecer un sistema de administración de fármacos a largo plazo. El NRG1 exógeno y su antagonista se administraban a través del catéter PE día sí, día sí, día no, con un volumen de 20 μL por inyección. El tratamiento de EA se aplicó en los puntos de acupuntura Dazhui (GV14) y Mingmen (GV4) día sí, día no, cada sesión durando 30 minutos durante 4 semanas consecutivas. Los resultados mostraron que el tratamiento con EA promovió significativamente la expresión de la proteína básica de mielina (MBP) en el tejido de la médula espinal y mejoró la función motora de las extremidades posteriores en las ratas. Además, el NRG1 exógeno produjo efectos similares a los de EA. En conclusión, la vía de señalización NRG1-ErbB4 desempeña un papel importante en la regeneración de mielina inducida por EA en ratas con lesión medular.
La LM es una condición traumática que conduce a graves déficits neurológicos, normalmente manifestados por deterioro motor, pérdida sensorial y disfunción autonómica, con una incidencia anual de aproximadamente 40-80 casos por millón de personas a nivelglobal. Tras la lesión, la rotura axonal y la pérdida de mielina son las principales características patológicas que dificultan la conducción de la señalneural 3. La mielina se forma por oligodendrócitos en el sistema nervioso central (SNC) y células de Schwann en el sistema nervioso periférico (SNP), y su integridad es crucial para la rápida conducción de impulsosnerviosos 4. Sin embargo, la respuesta inflamatoria, el estrés oxidativo y la formación de cicatrices gliales en el microambiente local tras la LME inhiben significativamente la regeneración de mielina, lo que conduce a una disfunción neurológicacrónica 5. Al mismo tiempo, la muerte de oligodendrócitos (OL) tras la LM conduce a la desmielinización de axones, un proceso que se desarrolla de forma crónica y persistente. Los estudios han demostrado que la desmielinización axonal tanto en modelos humanos como animales puede repararse eficazmente mediante la regeneraciónde mielina 6. Por tanto, explorar estrategias para promover la reparación de la mielina es una de las principales líneas en el tratamiento de la LME.
La acupuntura, como técnica médica tradicional antigua, se ha aplicado ampliamente en la práctica clínica en varios países, incluyendo China, Corea y Japón. EA, que combina acupuntura tradicional con estimulación eléctrica, ha sido ampliamente adoptada en entornos clínicos. Cada vez hay más evidencia que muestra que la EA tiene efectos terapéuticos en diversas enfermedades, especialmente en la promoción de la regeneración de mielina tras una lesión medular. La selección de puntos de acupuntura es fundamental durante el tratamiento de EA, como GV14 y GV49. GV14 se encuentra debajo del proceso espinoso de laséptima vértebra cervical, cerca de la línea media de la columna, mientras que GV4 se encuentra entre los procesos espinosos de lasegunda y tercera vértebra lumbar. Estudios previos han demostrado que las vías de señalización inflamatoria, el estrés oxidativo, los factores neurotróficos y la autofagia juegan un papel en la reparación de mielina inducida porEA 10,11,12. Además, cada vez hay más evidencia que sugieren que puntos específicos de acupuntura, como GV14 y GV4, desempeñan un papel activo en la promoción de la regeneración de mielina durante el tratamiento conEA 13,14,15. Sin embargo, los mecanismos moleculares mediante los cuales la EA regula la regeneración de mielina tras una lesión medular no se han esclarecido completamente.
NRG1 pertenece a la familia de factores de crecimiento epidérmicos y, según su región amino-terminal, puede clasificarse en seis tipos (I-VI)16. NRG1 y su familia de receptores, ErbB (ErbB1/2/3/4), desempeñan un papel significativo en el desarrollo y reparación del sistema nervioso, incluyendo procesos como la migración neuronal, la diferenciación, la remielinización y la sinaptogénesis. Durante el desarrollo del SNP, las células de Schwann (SCs) proliferan y migran a lo largo de los axones de las neuronas para formar mielina, y la vía de señalización NRG1-ErbB4 desempeña un papel clave en la maduración de las células progenitoras de Schwanndel SNP 17,18. Estudios previos han demostrado que la vía de señalización NRG1 está implicada en la diferenciación de células madre neuronales en células de Schwann y promueve la reparación de mielina de las células neuronales tras laLME 19. Además, un estudio ha demostrado que, tras una lesión medular, la vía de señalización NRG1-ErbB4 promueve la transformación de células progenitoras de oligodendrocitos (OPCs) en células similares a Schwann con potencialde remielinización 20. Alex et al. construyeron un sistema de co-cultivo de neuronas sensoriales derivadas de células madre pluripotentes inducidas por humanos y células de Schwann de rata, y encontraron que bloquear la vía de señalización NRG1-ErbB con fármacos inhibía significativamente la mielinización neuronal, proporcionando evidencia directa del papel de esta vía en la promoción de la mielinización axónica sensorialhumana 21. Otro estudio también ha demostrado que el tratamiento con EA puede aumentar la expresión de NRG1 en la médula espinal y aliviar el dolorinflamatorio 22.
La investigación sobre el impacto de la EA en la vía de señalización NRG1-ErbB4 en la LME es limitada, y los mecanismos subyacentes siguen sin estar claros. Este estudio tiene como objetivo investigar si la estimulación de EA en los puntos de acupuntura GV14 y GV4 puede regular la transducción de señales NRG1-ErbB4 y explorar su posible papel en la promoción de la regeneración de mielina y la recuperación de la función neurológica en ratas con LME. Este es el primer estudio que examina la relación entre la vía de señalización NRG1-ErbB4 y la regeneración de mielina inducida por EA en ratas con LME, proporcionando evidencia experimental para el desarrollo de estrategias de tratamiento novedosas y efectivas para la LME.
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Se cumplieron todas las directrices éticas durante el experimento para minimizar el sufrimiento animal. El protocolo experimental y el diseño fueron aprobados por el Comité de Experimentación con Animales de la Universidad Médica de Kunming (Aprobación nº KMMU2021051) y se llevó a cabo de acuerdo con las directrices de investigación animal de la universidad. Se obtuvieron ratas Sprague-Dawley machos adultos (8 semanas, con un peso de 250-270 g, n = 60) de la Universidad Médica de Kunming (Yunnan, China).
Preparación animal
Los animales se alojaron en un entorno controlado con humedad constante, temperatura moderada y un ciclo de 12 horas luz/oscuridad. Los animales fueron asignados aleatoriamente a 11 grupos: grupo de operación simulada (S, n = 6), grupo LMI (M, n = 6), LM con grupo de tratamiento EA (M + EA, n = 6), LM con grupo de tratamiento NRG-1β (M + NRG-1β, n = 6), LMI con grupo disolvente DMSO al 5% (M + D, n = 6), LMI con inhibidor PD158780 y grupo de tratamiento NRG-1β (M + PD+NRG-1β, n = 6), LME con PD158780 inhibidor y grupo de tratamiento EA (M + EA + PD, n = 6), LMI con disolvente y grupo de tratamiento EA (M + EA + D, n = 6), LMI con grupo de tratamiento con shRNA y EA (M + EA + shRNA, n = 6), LMI con lentivirus que contiene shRNA no dirigido y grupo de tratamiento EA (M + EA + NC, n = 6), LM con grupo de tratamiento con shRNA (M + shRNA, n = 6). El tamaño actual de la muestra se determinó en base a nuestra experiencia previa con modelos e intervenciones similares, que han mostrado consistentemente efectos significativos con este número. Además, a pesar del tamaño de la muestra, observamos diferencias estadísticamente robustas y significativas en los resultados clave, lo que refuerza la confianza en los hallazgos reportados.
Modelo de rata SCI
Se utilizó un clip para aneurisma de Yasargil (titanio, fuerza estándar de cierre de 70 g) para establecer un modelo de LM en rata utilizando una técnica tipo pinza (Figura 1A). Las ratas fueron anestesiadas con pentobarbital sódico al 2% (30 mg/kg, intraperitoneal) y colocadas en una mesa de operaciones. Se realizó una incisión de 3-4 cm en la piel dorsal, seguida de una disección capa por capa del tejido subcutáneo y el músculo para exponer los procesos espinosos torácicos T9-11 y los arcos vertebrales. Se utilizó un clip vascular para extraer el proceso espinoso torácico T10 y el arco vertebral, exponiendo completamente la médula espinal. El clip del aneurisma Yasargil se posicionó verticalmente sobre todo el segmento T10 y se liberó rápidamente tras un tiempo de permanencia de 60 s. El modelo se consideró exitoso si se observaron dos o más de los siguientes signos: (1) temblor espasmódico del cuerpo, (2) reflejo de mover la cola y (3) visibles marcas negras de pellizco en la médula espinal. Tras asegurar una hemostasia adecuada, la incisión fue desinfectada y suturada. En el grupo de operación simulada, se realizó el mismo procedimiento, salvo que la médula espinal no fue pinzada. Tras la operación, las ratas recibieron solución fisiológica normal (3 mL, intraperitoneal) para la rehidratación y penicilina (100.000 unidades, intraperitoneal) una vez por la mañana y otra por la tarde durante 3 días consecutivos para prevenir la infección. Se proporcionó asistencia manual para orinar hasta que se restableció la micción espontánea (dos veces al día).
Tubería intratecal de ratas y administración de fármacos
Siguiendo el método de Storkson et al.23, se implantó un catéter en el espacio subaracnoideo en ratas una semana antes de la inducción del modelo de LME. Tras la anestesia, las ratas quedaron fijadas en la mesa de operaciones y se expuso el espacio intervertebral L5-6. Se utilizó una aguja de 19G para penetrar verticalmente la duramadre y la membrana aracnoide. La aguja avanzó aproximadamente 1-2 mm y, tras romper la membrana aracnoidea, se percibió una sensación de espacio, seguida del flujo claro de líquido cefalorraquídeo, indicando una punción exitosa. Se insertó un catéter PE-10 (polietileno, diámetro interior 0,38 mm, diámetro exterior 1,09 mm) en el espacio subaracnoideo a lo largo de la aguja perforante. El catéter se avanzó a una longitud aproximada de 3 cm, con la punta del catéter situada cerca del cuerpo vertebral L3. Durante la inserción se observaron movimientos de cola y espasmos en las extremidades posteriores en las ratas, y el líquido cefalorraquídeo fluyó a través del catéter, confirmando la posición del catéter dentro del espacio subaracnoideo.
Tanto NRG-1β como PD158780 se disolvieron en dimetilsulfóxido (DMSO) y posteriormente se diluyeron con líquido cefalorraquídeo artificial (ACSF), asegurando que la concentración final de DMSO se mantuviera por debajo del 0,5%. Las concentraciones finales de trabajo fueron 20 nM para NRG-1β y 20 μM para PD15878024. Al segundo día tras la LME, las ratas del grupo M + NRG-1β recibieron inyecciones intratecales de 20 μL de NRG-1β cada dos días. A las ratas del grupo M + EA + DP se les administraron 20 μL de PD158780intratecalmente 25, 2 horas antes del tratamiento con EA.
Tratamiento de EA
Altercer día tras la cirugía, las ratas se colocaron en la mesa de tratamiento para la terapia con electroacupuntura (EA) en los puntos de acupuntura GV14 y GV4 (Figura 1B). Se insertaron dos agujas de acupuntura (0,25 mm x 13 mm) en estos puntos con una profundidad de 3-4 mm. Se administró la terapia de EA utilizando un dispositivo de electroacupuntura con un patrón de ondas escasas-densas (onda dispersa a 2 Hz y onda densa a 10 Hz, con una relación de frecuencia 1:5)26. La intensidad de salida se ajustó a 5 (aproximadamente 0,5 mA) durante 30 minutos, día sí, día no.
Evaluación conductual
La función locomotora se evaluó utilizando la escala27 de Basso, Beattie y Bresnahan (BBB), que evalúa el movimiento de las extremidades, la marcha, la coordinación y la colocación de las patas en los siguientes momentos: 0, 3, 7, 14, 21 y 28 días tras la cirugía ( Figura 2D). La escala BBB varía de 0 (que representa parálisis total) a 21 (que indica marcha normal). Todas las evaluaciones fueron realizadas de forma independiente por dos investigadores que no se percibieron ante las tareas experimentales en grupo.
Recogida de muestras
Tras la conclusión del experimento, las ratas anestesiadas fueron fijadas en una plataforma de disección para la recogida de tejido. La cavidad abdominal se abrió para exponer completamente el diafragma, que fue cuidadosamente inciso con tijeras de iris para evitar lesiones vasculares. Luego se abrió la caja torácica a lo largo de ambos márgenes costales para exponer el corazón, tras lo cual se insertó una aguja en el ventrículo izquierdo en el ápice y se perfundieron rápidamente aproximadamente 300-400 mL de PBS preenfriado para eliminar sangre sistémica hasta que fluyera líquido claro desde la aurícula derecha. Para el análisis de proteínas moleculares, en esta etapa se detuvo la perfusión y se disecó la columna vertebral. Tras extraer costillas y músculos adyacentes para exponer las vértebras, se localizó el segmento T10, y se recogió un segmento de médula espinal aproximadamente 1 cm rostral y caudal a T10 con tijeras de iris, luego se congeló rápidamente en nitrógeno líquido y se almacenó a -80 °C. Para el examen morfológico, la perfusión se cambió a un 4% de paraformaldehído tras el PBS, con una fijación exitosa indicada por la contracción muscular y la rigidez del tronco. El mismo segmento espinal fue cuidadosamente diseccionado para preservar la arquitectura tisular y postfijado en paraformaldehído al 4% a 4 °C durante 48 horas.
Tinción de hematoxilina y eosina
Las secciones de parafina de la médula espinal se colocaron en un horno a 60 °C para precalentar durante 30 minutos. Decerado: Xileno I durante 15 minutos seguido de Xileno II durante 15 minutos. Rehidratación: Tratado con etanol al 100% durante 2 minutos, luego al 95% etanol durante 2 minutos, después con etanol al 80% durante 2 minutos, seguido por un 70% de etanol durante 2 minutos, y finalmente agua destilada durante 5 minutos. La tinción con hematoxilina se hizo durante 7 minutos, seguida de un enjuague con agua destilada para eliminar la solución residual de manchas. Se realizó una diferenciación en alcohol de ácido clorhídrico al 1% durante 3 segundos, seguida de un enjuague con agua destilada para eliminar la solución residual de tinción. Se hizo el azulado con agua al 5% de amoníaco durante 2 minutos, seguido de lavar la solución residual de azulado. Se hizo una tinción con eosina durante 30 segundos, seguida de un enjuague con agua destilada para eliminar la solución residual de manchas. La deshidratación de las secciones se realizó con 70% de etanol durante 10 s, luego 80% de etanol durante 10 s, y finalmente con 100% etanol durante 30 s. La limpieza se hizo tratando con xileno durante 5 minutos. Tras el montaje, las láminas se secaron al aire y las imágenes se capturaron tras el secado.
Tinción azul rápida Luxol
Las secciones se deceraron dos veces con xileno durante 10 minutos cada una, luego se teñieron con solución de tinción de mielina LFB y se incubaron durante la noche a 37 °C. Al día siguiente, se eliminó el exceso de solución de tinción usando etanol al 90%. Las secciones se diferenciaron en una solución de diferenciación de Luxol durante 10 s (C0631S), seguidas de una inmersión en etanol al 75% durante 30 s hasta que la sustancia gris apareció clara. Finalmente, las secciones se contrateñieron con solución de tinción de eosina durante 1 minuto.
Western blot
Las muestras de proteína se cocieron en agua durante 5 minutos. Un total de 5 μL de marcador proteico se cargó primero en el gel de electroforesis, seguido de una carga secuencial de las muestras de proteína de prueba. La electroforesis se iniciaba a 80 V hasta que las bandas marcadoras se separaban claramente, tras lo cual el voltaje se aumentaba a 130 V y se mantenía hasta que la electroforesis completaba. Las membranas PVDF precortadas se activaron en metanol durante 1 minuto, luego se colocaron sobre papel filtro y se cubrieron con el gel preparado. La transferencia de proteínas se realizó a una corriente constante de 300 mA, con el tiempo de transferencia ajustado según el peso molecular (± 10 min). Tras la transferencia, la membrana PVDF se colocó en una caja de incubación, se enjuagó con tampón TBST durante 5 minutos y luego se bloqueó con leche desnatada al 5% a temperatura ambiente sobre un shaker durante 2 horas. Posteriormente, la membrana se lavó 3 veces con tampón TBST durante 5 minutos cada una antes de la incubación con anticuerpos primarios, incluyendo GAPDH (1:2000), Tubulina (1:2000), NRG1 (1:1000), ErbB4 (1:1000) y MBP (1:1000), durante la noche a 4 °C con suave agitación. Al día siguiente, la membrana se lavó 3 veces con tampón TBST durante 5 minutos cada una, luego se incubó con un anticuerpo secundario, anti-conejo de cabra (1:4000), a temperatura ambiente sobre un agitador durante 2 horas. Tras lavar con TBST, se visualizaron las bandas proteicas usando quimioluminiscencia. Importa la imagen de WB al software ImageJ y realiza la resta de fondo usando un radio de bola rodante de 50 píxeles. Para las bandas inclinadas, utiliza la herramienta Línea Segmentada para enderezar las bandas. Utiliza la herramienta Rectángulo para seleccionar las bandas objetivo y generar un perfil de densidad seleccionando Trazar carriles para visualizar los valores en escala de grises de las bandas. Usa la herramienta Magic Wand para segmentar los picos y extraer los valores en escala de grises. Después de guardar los datos, utiliza el software GraphPad Prism para crear gráficos de barras.
Inmunofluorescencia
Las secciones de parafina se desenceraron dos veces con xileno durante 10 minutos cada una y se rehidrataron mediante una serie graduada de etanol. La extracción de antígenos se realizó hirviendo las secciones en una solución de ácido cítrico al 5% durante 15 minutos, seguida de un bloqueo con suero de cabra al 10% durante 2 horas. Las secciones se incubaron durante la noche a 4 °C con los siguientes anticuerpos primarios: NRG-1 monoclonal de ratón (1:200), ErbB4 monoclonal de conejo (1:300) y MBP monoclonal humano (1:300). Tras tres lavados con solución salina tamponada con fosfato que contenía 0,1% de Triton X-100 (PBST) durante 10 minutos cada uno, las secciones se incubaron durante 1 hora en la oscuridad con los siguientes anticuerpos secundarios: IgG anti-ratón marcado con FITC (1:500), IgG anti-conejo marcado con FITC (1:500) y IgG anti-humano para cabra marcado con FITC (1:500). Las secciones se lavaron 3 veces con PBST durante 10 minutos cada una, luego se fijaron y montaron con reactivo antifade para preservar las señales fluorescentes. Las láminas se almacenaban a 4 °C en la oscuridad. Después de localizar las células objetivo bajo una lente objetivo de 10x usando un microscopio de fluorescencia, cambia a una lente de 40x para capturar la imagen de fluorescencia.
Reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCR)
Los cebadores para ErbB4 y el gen de referencia GAPDH fueron diseñados utilizando la página web del NCBI. Las secuencias de cebadores fueron las siguientes: cebador delantero ErbB4 : ACAGCCCTCCTCCTGCCTAC; Cebador inverso ErbB4 : ATCTCAGCCGTTGCACCCT; Primer de ataque GAPDH : CCCAGCTTAGGTTCATCATCATCAGGT; Cebador inverso GAPDH : TACGCCAAATCCGTTCACA. Se colocó tejido medular de aproximadamente tamaño de soja en un tubo centrífugo de 1,5 mL y se añadieron 600 μL de reactivo total de extracción de ARN. El tejido fue completamente homogeneizado e incubado sobre hielo durante 5 minutos, seguido de centrifugación a 12.000 x g durante 5 minutos a 4 °C. El sobrenadante se transfirió a un nuevo tubo de 1,5 mL y se añadieron 400 μL de cloroformo. La mezcla se mezcló y centrifugó a 12.000 x g durante 5 minutos a 4 °C. El sobrenadante se transfirió de nuevo a un nuevo tubo y se añadieron 400 μL de isopropanol. La solución se incubó a temperatura ambiente durante 10 minutos, seguida de centrifugación a 12.000 x g durante 10 minutos. El sobrenadante fue descartado y el pellet de ARN se lavó con 400 μL de etanol al 75%. Tras centrifugación a 7.500 x g durante 5 minutos a 4 °C, se descartaba el sobrenadante y el tubo se invertía para secar al aire sobre una superficie limpia. El pellet de ARN se disolvió en 60 μL de agua libre de ARN, se mezcló a fondo y se midió la concentración de ARN. La pureza y concentración del ARN se registraron midiendo la absorbancia en 260 nm y 280 nm, asegurando que la relación 260/280 estuviera alrededor de 2,0. Para la síntesis de ADNc, se mezclaron a fondo la Reacción 1 (que contiene goma de ADNG, etc.) y la Reacción 2 (que contiene transcriptasa inversa, etc.), y la mezcla se incubó a 95 °C durante 15 minutos. El sistema de reacción de PCR de fluorescencia se preparó según las instrucciones del kit de síntesis de ADNc. Se añadió una muestra de 2 μL a 23 μL de mezcla de reacción PCR, y se realizó la amplificación según el protocolo del kit de PCR cuantitativa de fluorescencia. La temperatura de recocido se fijó a 60 °C, y las condiciones de amplificación fueron las siguientes: Pre-desnaturalización: 95 °C durante 30 s, 1 ciclo; Reacción PCR: 95 °C durante 3 s, 60 °C durante 30 s, 40 ciclos; El análisis de la curva de disociación se realizó de la siguiente manera: 95 °C durante 5 s, 60 °C durante 30 s, seguido de un aumento gradual de 60 °C a 95 °C con adquisición continua de señales de fluorescencia. Los valores de Ct se midieron y calcularon utilizando el software Bio-Rad, y se determinaron los niveles relativos de ARNm mediante el método 2-ΔΔCt .
Directrices de seguridad y manejo
Fijación con paraformaldehído: Usa paraformaldehído exclusivamente en una campana extractora bien ventilada. Siempre lleva el equipo de protección individual (EPP) adecuado, incluyendo mascarilla, guantes, bata de laboratorio y gafas de seguridad. Guarda la solución de paraformaldehído en un recipiente herméticamente cerrado, alejado de la luz solar directa y de fuentes de calor. Elimina el paraformaldehído de residuos conforme a las normas de seguridad del laboratorio de la Universidad Médica de Kunming, colocándolo en un contenedor de residuos peligrosos.
Solución DMSO: El DMSO puede absorberse a través de la piel y entrar en el cuerpo. Lleva el EPI adecuado, incluidos guantes y gafas de seguridad, durante el manejo. Guarda el DMSO en un recipiente sellado a temperatura ambiente, alejado de agentes oxidantes fuertes. Elimina los residuos DMSO conforme a las directrices de seguridad de laboratorio de la Universidad Médica de Kunming, colocándolos en un contenedor de residuos peligrosos.
Anestesia pentobarbital: El pentobarbital es una sustancia controlada y solo debe ser manipulado por personal autorizado. Evita exposiciones accidentales durante la manipulación y asegúrate de ventilar adecuadamente durante el uso. Lleva el equipo de protección adecuado. Guarda el pentobarbital en un armario cerrado a temperatura ambiente, bajo la supervisión de personal autorizado. Eliminar los residuos de pentobarbital cumpliendo con las directrices de la Universidad Médica de Kunming para sustancias controladas, asegurando la correcta autorización de uso y procedimientos de eliminación de residuos.
Eliminación general de residuos: Todos los productos químicos y reactivos peligrosos deben eliminarse conforme a las directrices de gestión del laboratorio de la Universidad Médica de Kunming. Asegúrate de que todos los materiales de desecho estén correctamente etiquetados y colocados en recipientes adecuados para su eliminación segura.
Análisis estadístico
Todos los experimentos se realizaron en triplicado o más. Los valores de densidad de banda de las proteínas objetivo se normalizaron a los del grupo de control para facilitar la comparación entre grupos. Los datos se presentan como mediana (rango intercuartíl) o media ± desviación estándar, con n representando el número de ratas. Para los datos distribuidos normalmente, las diferencias significativas entre grupos se evaluaron mediante análisis unidireccional de la varianza (ANOVA). Para datos no distribuidos de forma normal, se aplicó la prueba H de Kruskal-Wallis para comparar grupos. La significación estadística se estableció en p < 0,05.
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La tinción H&E y la puntuación BBB demuestran los efectos protectores de la EA en ratas LM
La tinción H&E se utilizó para examinar la morfología y estructura de las células del cuerno posterior de la médula espinal (Figura 2D). Los resultados de H&E revelaron que en el grupo S, las células del cuerno posterior estaban ordenadamente dispuestas, con contornos celulares bien definidos y núcleos ubicados en el centro....
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Este estudio demuestra que el tratamiento con EA alivia la cavitación y desmielinización de la médula espinal tras la LME, promoviendo la remielinización mediante la regulación al alza de la expresión de la proteína MBP, y en consecuencia mejora la función motora de las extremidades posteriores en ratas. Además, identificamos la vía de señalización NRG-1/ErbB4 como mediador crítico de la remielinización neuronal y un posible mecanismo terapéutico mediante el cual la EA promueve la remiel...
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Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.
Agradecemos a los autores sus contribuciones a este estudio. Este estudio fue financiado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (NSFC 81960817, 82260387) y el Programa Especial de Investigación Básica del Plan de Ciencia y Tecnología del Departamento Provincial de Ciencia y Tecnología de Yunnan (202301AS070020). Proyecto de Investigación y Desarrollo Científico y Desarrollo de la Facultad Médica de Sichuan del Norte (CBY22-QNA20)
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| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Kit de detección de proteínas BCA | Beyotime Biotecnología | P0012S | Análisis cuantitativo de proteínas |
| Dispositivo de electroacupuntura | Instrumento de Electroacupuntura Huatuo, SDZ-V, Suzhou | — | Equipos terapéuticos |
| IgG anti-humano de cabra etiquetada como FITC | Beyotime | A0556 | Anticuerpo secundario fluorescente |
| IgG antiratón de cabras etiquetado como FITC | Beyotime | A0568 | Anticuerpo secundario fluorescente |
| IgG anticonejo de cabras etiquetado con FITC | Beyotime | A0562 | Anticuerpo secundario fluorescente |
| Microscopio de fluorescencia | Olimpo | — | — |
| MBP monoclonal humano | Abcam | ab209328 | Anticuerpo específico |
| Solución de tinción de mielina LFB | Solarbio | G3240 | Mancha de la vaina de mielina |
| Millipore ECL | Millipore | WBKLS0100 | Reactivos de detección |
| NRG-1 monoclonal de ratón | Santa Cruz | SC-57384 | Anticuerpo específico |
| Nanodrop ND-1000 | LabTech | — | |
| Beta de NRG1-1 | Novoprotein Technology Co | C753 | NRG1-1 beta humano recombinante |
| PD158780 | Tecnología GlpBio | GC15925 | El inhibidor de tirosina quinasa del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) |
| Conducto PE-10 | Becton, Dickinson y Compañía | 427401 | Inyección intratecal |
| Penicilina sódica para inyección | Harbin Zhongjing Biotechnology Co | 80451182 | Terapia antiinfecciosa postoperatoria |
| ErbB4 monoclonal de conejo | Abcam | ab109273 | Anticuerpo específico |
| RNAiso Plus Kit | Takara | 9109 | Reactivos RT-PCR |
| Kit de reactivos RT | Takara | RR037A | Reactivos RT-PCR |
| Anticuerpo secundario | Beyotime Biotecnología | — | Anticuerpo específico |
| Pentobarbital sódico | Sigma-Aldrich | 69020100 | Anestesia animal |
| Clip de aneurisma Yasargil | Rebstock Instruments GmbH | — | Construcción de un modelo de lesión medular en rata |
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