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Artículo de método

Purificación e identificación de proteínas antimicrobianas a partir del alga verde Tetraspora sp. CU2551

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DOI:

10.3791/70066

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17 de febrero de 2026

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1Department of Biology, School of Science, King Mongkut's Institute of Technology Ladkrabang, 2Division of Biology, Faculty of Science and Technology, Rajamangala University of Technology Thanyaburi, 3Bioenergy Research Unit, School of Science, King Mongkut's Institute of Technology Ladkrabang

En este artículo

Resumen

Este protocolo describe un flujo de trabajo para investigar proteínas antimicrobianas intactas utilizando múltiples técnicas, incluyendo la optimización de los tampones de extracción de proteínas, la alteración de células algas, la fraccionación de proteínas mediante cromatografía de intercambio iónico, la separación de proteínas mediante SDS-PAGE y ensayos de actividad antimicrobiana. La proteína activa fue posteriormente confirmada e identificada mediante análisis LC-MS/MALDI-TOF.

Resumen

La resistencia antimicrobiana (RAM) es una amenaza sanitaria global en creciente, lo que hace necesaria la búsqueda de nuevos agentes antimicrobianos. Las proteínas y péptidos derivados de algas han ganado cada vez más atención por su potencial bioactivo; sin embargo, los protocolos estandarizados para investigar péptidos antimicrobianos (AMPs) en algas verdes, especialmente Tetraspora sp. CU2551, siguen siendo limitados. Este protocolo describe un flujo de trabajo paso a paso para el aislamiento, purificación y caracterización de proteínas antimicrobianas intactas a partir del alga verde Tetraspora sp. CU2551. El procedimiento integra extracción optimizada de proteínas, fraccionamiento cromatográfico, separación electroforética, cribado de actividad antimicrobiana e identificación de proteínas. Las condiciones de extracción de proteínas se optimizan primero para reducir los efectos inhibidores de fondo originados en los componentes del tampón. Cuando se desconoce la identidad del péptido activo, se aplica un ensayo pull-down para evaluar la unión de proteínas entre diferentes resinas de intercambio iónico y para guiar la selección de una matriz de purificación adecuada. La cromatografía de intercambio iónico DEAE-Sepharose es un método adecuado para enriquecer fracciones de proteínas antimicrobianas. Todas las fracciones son evaluadas sistemáticamente en cuanto a actividad antimicrobiana y analizadas por SDS-PAGE. La banda proteica correspondiente a la mayor actividad antimicrobiana, junto con un perfil electroforético distintivo, se extirpa y se somete a análisis LC-MS/MALDI-TOF para la identificación de proteínas. El flujo de trabajo se complementa además con análisis in silico para predecir propiedades relacionadas con péptidos antimicrobianos utilizando herramientas bioinformáticas disponibles públicamente. Este protocolo proporciona un marco versátil para el descubrimiento de proteínas antimicrobianas y puede adaptarse fácilmente a otras especies de algas y aplicaciones biotecnológicas relacionadas.

Introducción

La resistencia a los antimicrobianos (RAM) representa un desafío creciente para la saludglobal 1, lo que pone de manifiesto la importancia de estrategias continuas para identificar nuevos agentes antimicrobianos a partir de fuentes naturales. Aunque hay cada vez más investigaciones sobre las propiedades antimicrobianas de proteínas y péptidos derivados dealgas 2,3. La mayoría de los estudios se centran en enfoques basados en péptidos ohidrolizados 4, y los métodos estandarizados para preservar y evaluar la actividad de proteínas de algas enteras siguen siendolimitados 5. Este artículo describe un método destinado a aislar, purificar y evaluar proteínas intactas del alga verde Tetraspora sp. CU2551 para su actividad antimicrobiana.

El protocolo describe un proceso paso a paso que abarca la extracción de proteínas completas, fraccionamiento mediante cromatografía de intercambio iónico, evaluación de propiedades antibacterianas, separación de proteínas en gel, identificación de proteínas mediante espectrometría de masas y predicción de péptidos antimicrobianos mediante técnicas in silico. La eficacia de los agentes antibacterianos se evalúa utilizando pruebas estándar de difusión en agar y inhibición del crecimiento líquido en cepas bacterianas típicas Gram-positivas yGram-negativas 4,6. Este enfoque permite conectar la actividad antimicrobiana identificada con fracciones proteicas específicas o bandas electroforéticas, en lugar de depender únicamente de mezclas de péptidos digeridas o únicamente en predicciones computacionales que pueden no identificar proteínas antimicrobianas o secuencias similares a AMP fuera de las definiciones canónicas 7,8 de la base de datos.

Seguir este protocolo permite a los lectores obtener de forma fiable fracciones de proteínas bioactivas que contienen posibles secuencias de proteínas antimicrobianas, adecuadas para futuras validaciones y evaluaciones funcionales. Los hallazgos representativos indican la identificación de fracciones bioactivas que contienen tanto candidatos a proteínas conocidos como desconocidos. Este protocolo proporciona un marco versátil y práctico para identificar sustancias antimicrobianas a partir de proteínas intactas obtenidas de algas y otras fuentes biológicas.

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Protocolo

Este estudio no incluyó participantes humanos, animales ni sujetos vertebrados. Todos los procedimientos experimentales se llevaron a cabo de acuerdo con las directrices institucionales de bioseguridad y ética en investigación de la Escuela de Ciencias, Instituto de Tecnología Rey Mongkut de Ladkrabang (KMITL), Tailandia. Todos los experimentos microbianos se realizaron bajo condiciones de laboratorio de Nivel de Bioseguridad 2 (BSL-2) siguiendo la OMS y la norma nacionalde bioseguridad 9.

Lleva el equipo de protección personal adecuado, incluyendo batas de laboratorio, guantes y mascarillas, durante todos los procedimientos experimentales. Recoger y desechar los residuos químicos y que contienen plata según las directrices institucionales de gestión de residuos peligrosos antes de enviarlos a una empresa autorizada de gestión de residuos.

Preparar soluciones concentradas de productos químicos peligrosos, incluyendo dodecilo sulfato de sodio, β-mercaptoetanol y reactivos de tinción de plata que contienen formaldehído, en una campana extractora química. Realizar experimentos utilizando bajas concentraciones de trabajo y pequeños volúmenes en la mesa de laboratorio de acuerdo con las prácticas estándar de seguridad en el laboratorio.

1. Cultivo de algas

NOTA: Mantener condiciones asépticas durante el cultivo de algas.

  1. Preparación del cultivo inicial
    1. Prepara un medio TAP estéril (pH 7,0)10 y dispensa 150 mL en matrazas Erlenmeyer estériles de 500 mL.
    2. Inocular el medio con un inóculo al 1% (v/v) durante la noche de cultivo nocturno de Tetraspora sp. CU2551 utilizando técnica aséptica en un armario de bioseguridad de Clase I.
    3. Incubar los cultivos en una incubadora agitadora con luz a 35 °C, 120 rpm y 45,9 μmol/m 2/s durante 48 horas. Utiliza la cultura completamente desarrollada como punto de partida para la cultura de escalar.
  2. Cultivo a escala y extracción celular
    1. Transfiere 25 mL de cultivo inicial a 275 mL de medio TAP estéril fresco. Incubar los cultivos bajo las mismas condiciones durante 48 horas.
    2. Extrae las células algales mediante centrifugación a 3.800 × g durante 15 minutos a 25 °C.
    3. Lava los pellets celulares una vez con agua destilada estéril y centrifuga de nuevo a 3.800 × g durante 15 minutos a 25 °C.
    4. Retirar completamente el sobrenadante y almacenar los pellets de células algales a −20 °C hasta que se produzca más.

2. Formulación del tampón de lisis y cribado de inhibición de fondo

PRECAUCIÓN: Manipula SDS y β-mercaptoetanol con guantes de goma o nitrilo. Abre la botella concentrada de β-mercaptoetanol en una campana extractora química.

  1. Preparación del tampón de lisis
    1. Preparar el tampón de liside referencia 11 , compuesto por 10 mM de Tris-HCl (pH 9,0) suplementado con 0,1 % de SDS en p/v y 38 mM de β-mercaptoetanol.
      NOTA: Paso crítico: Optimizar las concentraciones de SDS y β-mercaptoetanol para evitar la actividad antimicrobiana falsamente positiva.
    2. Preparar conjuntos factoriales completos de tampón de lisis variando dodecilo sulfato de sodio (SDS) (0, 0,01, 0,05 o 0,1% p/v) y β-mercaptoetanol (0, 0,5, 1 o 2 mM), generando 16 formulaciones.
      NOTA: Las composiciones de todas las formulaciones probadas del tampón de lisis se resumen en la Tabla 1. Añade β-mercaptoetanol justo antes de usarla.
  2. Cribado antimicrobiano de fondo
    1. Utiliza una perforadora para preparar discos de 6 mm a partir de papel Whatman nº 42. Aplicar 5 μL de cada formulación de tampón de lisis sobre el disco de papel y realizar ensayos de difusión de disco según las directricesCLSI 6. Incubar las placas de ensayo a 37 °C durante 20 horas y evaluar las zonas de inhibición.
      1. Formulaciones de prueba contra Bacillus subtilis TISTR 1248, Staphylococcus aureus TISTR 746, Escherichia coli TISTR 074 y Pseudomonas aeruginosa TISTR 2370.
    2. Selecciona la formulación que no muestre actividad inhibitoria para la extracción posterior de proteínas.

3. Extracción de proteínas

NOTA: Mantener las muestras a baja temperatura durante la sonicación y centrifugación.

  1. Descongelar los pellets de algas congelados (del paso 1.2.5) a 37 °C y volver a congelar a −20 °C. Repite los ciclos de congelación-descongelación (-20 °C / 37 °C) 3 veces.
  2. Añadir el buffer de lisis óptimo (10 mM Tris-HCl, pH 9,0, SDS 0,01%, 2 mM β-mercaptoetanol) a un volumen final de 5 mL y mantener las muestras en hielo durante todo el procesamiento posterior. Altera las células mediante sonicación por sonda (25 kHz, 500 W, 40 % de amplitud, 1 s encendido/apagado, 5 minutos).
  3. Añade el cóctel inhibidor de proteasas según las instrucciones del fabricante y mezcla suavemente.
  4. La centrifugadora lisa a 3.800 × g durante 15 minutos a 4 °C y recoge el sobrenadante como extracto de proteína cruda.
  5. Clarifica los extractos por centrifugación a 10.000 × g durante 10 minutos a 4 °C. Recoge y almacena los sobrenacionantes a 4 °C.

4. Evaluación de la actividad antimicrobiana

  1. Ensayos de difusión de disco
    1. Cultivar bacterias patógenas (Bacillus subtilis TISTR 1248, Staphylococcus aureus TISTR 746, Escherichia coli TISTR 074 y Pseudomonas aeruginosa TISTR 2370) en agar nutritivo a 37 °C durante 16-18 horas.
    2. Utilizando un lazo de aluminio estéril, raspa las colonias de las superficies del agar y vuelve a suspender en un 0,9% (p/v) de NaCl. Ajusta las suspensiones bacterianas a 0,5 McFarland estándar y aplica un hisopo uniforme sobre las placas de agar Mueller-Hinton.
    3. Colocar discos de papel estériles sobre superficies de agar inoculados y aplicar 5 μL de muestras de prueba. Incuba las placas a 37 °C durante 16-20 horas y mide las zonas de inhibición usando un calibrador Vernier.
      NOTA: Mantener un espaciado igual entre todos los discos.
  2. Determinación de MIC y MBC
    1. Prepara suspensiones bacterianas a 2 × 10⁶ CFU/mL en caldo Mueller-Hinton 4x.
    2. Pipetear 50 μL de las suspensiones bacterianas y 100 μL de las muestras de proteína diluidas en serie en placas de 96 pozos y ajustar todos los pozos a un volumen final de 200 μL usando 10 mM de tampón Tris-HCl (pH 7,5).
    3. Utiliza 5 μL de estreptomicina (50 μg) como control positivo. Usa 10 mM de Tris-HCl (pH 7,5) y 0,9 % (p/v) de NaCl como controles negativos.
    4. Incubar placas a 37 °C durante 20 horas y determinar que la CMI es la concentración más baja sin crecimiento bacteriano visible.
    5. Placas aliteras de pozos claros sobre agar Mueller-Hinton para determinar MBC.
  3. Determinación de la curva de crecimiento bacteriano
    1. Prepara suspensiones bacterianas a 1 × 10⁶ UFC/mL en 2 caldos Mueller-Hinton.
    2. Incubar 100 μL de cultivo bacteriano con 100 μL de muestras de proteína en una placa de 96 pozos a 37 °C durante 20 horas.
    3. Utiliza 5 μL de estreptomicina (50 μg) como control positivo. Utiliza agua destilada estéril, 10 mM de Tris-HCl (pH 7,5) y 500 mM de NaCl en 10 mM de Tris-HCl (pH 7,5) como controles.
    4. Mide OD₆₀₀ cada 30 minutos usando un lector de microplacas con agitación intermitente orbital (2 minutos antes de la medición).
    5. Calcula las curvas de crecimiento y las tasas específicas de crecimiento.
      NOTA: Las altas concentraciones de proteínas pueden interferir con las mediciones de densidad óptica.

5. Ensayo de pull-down y purificación de proteínas

  1. Ensayo de pull-down
    1. Equilibrar resina DEAE-Sepharose con 10 mM de tampón Tris-HCl (pH 8,0) o resina CM-Sepharose con 10 mM de tampón fosfato (pH 7,0).
    2. Mezcla 100 μL de resina equilibrada con 500 μL de extracto de proteína cruda, y luego añade 100 μL del tampón de equilibrio correspondiente (10 mM Tris-HCl, pH 8,0 para DEAE; 10 mM tampón de fosfato, pH 7,0 para CM). Incubar con inversión suave (10 inversiones).
    3. Centrifugar brevemente, recoger el sobrenadante y evaluar la actividad antimicrobiana mediante un ensayo de difusión de disco.
    4. Selecciona la resina de trabajo (DEAE-Sepharose). Para optimizar el pH, equilibra la resina con 10 mM de Tris-HCl a pH 7.0, 7.5, 8.0, 8.5 o 9.0 y sigue los pasos 5.1.1-5.1.3.
    5. Selecciona la condición de pH que muestre actividad antimicrobiana para la cromatografía de intercambio iónico.
  2. Purificación de proteínas basada en cromatografía por intercambio iónico
    1. Empaquetar la resina DEAE-Sepharose en una columna de cromatografía de vidrio (volumen de 16 mL) y equilibrar con 10 mM de tampón Tris-HCl (pH 7,5) a 25 °C para 10 volúmenes de columna.
    2. Carga 15 mL de extracto de proteína cruda (sección 3.6) a un caudal de 8 mL/min.
    3. Lava la columna con un buffer de equilibrio hasta que la absorbancia a 280 nm caiga por debajo de 0,05.
    4. Proteínas unidas a elutos usando un gradiente lineal de 0-500 mM de NaCl en 10 mM Tris-HCl (pH 7,5) sobre 500 mL a 8 mL/min.
    5. Recoge 5 mL fracciones, monitoriza la absorbancia a 280 y 220 nm, y mantén las fracciones en hielo. Almacenar fracciones a 4 °C hasta el cribado antimicrobiano y el análisis de proteínas.

6. SDS-PAGE y tinción de plata

NOTA: Prepara soluciones para manchar plata en una campana extractora química y usa el equipo de protección personal adecuado. Prepara todas las soluciones de forma fresca.

  1. Separa las fracciones de proteínas usando SDS-PÁGINA12 al 12% y visualiza las bandas teñiendo laplata 13.
  2. Elimina las bandas de proteínas objetivo y envía muestras para el análisis de la EM.
  3. Identificar proteínas mediante búsqueda en bases de datos contra NCBInr.

7. Predicción de péptidos antimicrobianos

  1. Recuperar secuencias de proteínas candidatas del análisis NCBInr.
  2. Evalúa el potencial antimicrobiano utilizando herramientas públicas de predicción de AMP (por ejemplo, DBAASP, APD3, AMPScanner, CAMPR4) y bases de datos.
  3. Extraer resultados de predicción, incluyendo puntuaciones de probabilidad antimicrobianas, clasificación predicha y propiedades fisicoquímicas (carga neta, contenido de residuos hidrofóbicos, índice GRAVY [ExPASy ProtParam] y anfipatidad).
  4. Integrar resultados computacionales entre plataformas para priorizar proteínas antimicrobianas candidatas para validación posterior.
    NOTA: Las predicciones in silico apoyan la selección candidata y no constituyen una clasificación definitiva de péptidos antimicrobianos.

8. Pruebas estadísticas

  1. Realiza todos los experimentos en triplicado biológico (triplicato). Analizar los datos usando ANOVA unidireccional seguida de la prueba de múltiples rangos de Duncan o análisis post hoc apropiados con un nivel de confianza del 95%.

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Resultados

El flujo de trabajo desarrollado basado en proteínas intactas, que integra extracción optimizada de proteínas, fraccionamiento por intercambio iónico, cribado antimicrobiano e identificación de proteínas, permitió con éxito la detección de fracciones bioactivas de proteínas de Tetraspora sp. CU2551. Este protocolo está diseñado para minimizar los artefactos de fondo preservando la integridad de las proteínas nativas, permitiendo que la actividad antimicrobiana se asocie directam...

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Discusión

Para obtener lecturas antimicrobianas fiables utilizando este protocolo, se deben controlar cuidadosamente varios pasos críticos, especialmente durante la extracción de proteínas y el cribado temprano de bioactividad. Optimizar el tampón de lisis es esencial, ya que la inhibición de fondo por parte de los componentes del tampón es una fuente frecuente de resultados falsos positivos en el cribado de proteínas antimicrobianas. La actividad antimicrobiana observada con la formulación origin...

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Divulgaciones

Los autores no tienen conflictos de interés que declarar.

Agradecimientos

Este trabajo fue apoyado por subvenciones de investigación de la Escuela de Ciencias del Instituto de Tecnología King Mongkut de Ladkrabang, otorgadas a C. Maneeruttanarungroj (RA/TA-2566-M-013) y del Instituto de Tecnología del Rey Mongkut de Ladkrabang, proporcionadas a Y. Tonawut (KREF016329). El análisis espectrométrico de masas fue realizado por la Unidad de Servicio de Proteómica, Facultad de Tecnología Médica, Universidad Mahidol, Tailandia.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Solución de acrilamida/bis-acrilamidaLaboratorios Bio-Rad1610156Para preparación en gel SDS-PAGE
Categoría: Química
Lámpara de alcohol / Fuego BunsenVarios—Para la técnica aséptica
Categoría: Instrumento
AMPScannerUniversidad George Mason (Veltri et al.)—Herramienta de predicción de AMP basada en aprendizaje profundo
Categoría: Software / Base de datos
Herramientas de predicción de péptidos antimicrobianos (DBAASP, APD3, AMPscanner, CAMPR4)Diversas fuentes académicas—Análisis AMP in silico
Categoría: Software / Base de datos
APD3Laboratorio Wang, Universidad de Nebraska—Base de datos de péptidos antimicrobianos
Categoría: Software / Base de datos
AutoclaveTomy—Esterilización de medios y materiales
Categoría: Instrumento
Armario de Bioseguridad Clase I/IIVarios—Manipulación aséptica
Categoría: Instrumento
BioTool 2.0Bruker Daltonics—Herramienta para visualizar espectros y péptidos de EM
Categoría: Software
Reactivo de BradfordMerckB6916Cuantificación de proteínas
Categoría: Química
CAMPR4Instituto Indio de Tecnología de Bombay—Colección de péptidos antimicrobianos
Categoría: Software / Base de datos
Centrífuga, Microcentrífuga refrigerada Eppendorf 5415REppendorf—Microcentrifugación
Categoría: Instrumento
Centrífuga, Thermo Scientific Megafuge 8RThermo Fisher Scientific—Centrifugación de gran volumen
Categoría: Instrumento
Columna de Cromatografía (Vidrio)Varios—Cromatografía de intercambio iónico
Categoría: Cristalería
CM-Sepharose ResinaMerckCEF100Resina de intercambio catiónico
Categoría: Química (Resina)
Bastoncillo de algodónVarios—Inoculación bacteriana
Categoría: Plásticos
Cubeta, CuarzoHellma Analytics—Espectrofotometría UV
Categoría: Cristalería
DBAASPInstituto de Química Bioorgánica (Rusia)—Base de datos de actividad antimicrobiana y estructuras peptídicas
Categoría: Software / Base de datos
DEAE-Sepharose ResinaMerckDEFF100Resina de intercambio aniónico
Categoría: Química (Resina)
Matraz Erlenmeyer, 100 mLVarios—Cultivo de algas
Categoría: Cristalería
Matraz Erlenmeyer, 500 mLVarios—Cultivo de algas
Categoría: Cristalería
Escherichia coli TISTR 074TISTR, Tailandia—Microorganismo de prueba
Categoría: Material biológico
ExPASy ProtParamInstituto Suizo de Bioinformática—Herramienta en línea para calcular propiedades fisicoquímicas de proteínas
Categoría: Software / Base de datos
FormaldehídoMerck1.04002Tinción de plata
Categoría: Química
Congelador (-20 ºC; C)Varios—Almacenamiento de muestras
Categoría: Instrumento
Sistema de electroforesis en gel (Tetra Mini-PROTEAN)Laboratorios Bio-Rad—SDS-PAGE
Categoría: Instrumento
Tubo de ensayo de vidrio (16 y 150 mm)Pyrex / Duran—Manipulación de muestras
Categoría: Cristalería
Guantes, nitriloVarios—Protección personal
Categoría: Plásticos
Detener el cóctel de inhibidores de proteasas (100 veces)Thermo Fisher Scientific87786Inhibición de proteasas
Categoría: Química
IncubadoraVarios—Cultivo bacteriano
Categoría: Instrumento
IncubadoraVarios—Cultivo de algas
Categoría: Instrumento
Bucle inoculanteCualquier proveedor de laboratorio—Transferencia microbiana
Categoría: Consumibles
KClMerckP5405Preparación de tampón
Categoría: Químico 
Espectrómetro de Masas MALDI-TOF (Reflex IV)Bruker Daltonics—Identificación de proteínas
Categoría: Instrumento
MASCOTACiencia de Matrices—Motor de búsqueda para identificación de proteínas a través de datos MS
Categoría: Software / Base de datos
MASCOTA 2.2Ciencia de Matrices—Identificación de proteínas
Categoría: Software
Cilindro de mediciónPyrex—Medición de volumen
Categoría: Cristalería
Tubo microcentrífuga (1,5 mL)-—Procesamiento de muestras
Categoría: Plásticos
Tubo microcentrífuga (2,0 mL)-—Procesamiento de muestras
Categoría: Plásticos
Micropipeta (100– 1000 y micro; L)-—Manejo de líquidos
Categoría: Instrumento
Micropipeta (1&nn; 10 & micro; L)-—Manejo de líquidos
Categoría: Instrumento
Micropipeta (1&nn; 5 & micro; L)-—Manejo de líquidos
Categoría: Instrumento
Micropipeta (1&nn; 5 mL)-—Manejo de líquidos
Categoría: Instrumento
Micropipeta (20&n; 200 y micro; L)-—Manejo de líquidos
Categoría: Instrumento
Lector de microplacasBioTek —Medición OD600
Categoría: Instrumento
Mueller y dash; Agar/Caldo de HintonVarios—Ensayos antimicrobianos
Categoría: Medio
Nanodrop / Espectrofotómetro BiodropVarios—Medición de proteínas
Categoría: Instrumento
Base de datos NCBInrCentro Nacional de Información Biotecnológica—Base de datos de proteínas no redundantes
Categoría: Software / Base de datos
Agar nutritivo-—Cultivo bacteriano
Categoría: Medio
Disco de papel (6 mm)Whatman nº 42—Ensayo de difusión en disco
Categoría: Plásticos
Placa de PetriVarios—Cultivo microbiano
Categoría: Plásticos
Medidor de pHMettler Toledo—Ajuste de pH
Categoría: Instrumento
Amortiguador de fosfato (10 mM, pH 7,0)-—Buffer de cromatografía
Categoría: Buffer
Sonda Sonicadora (VCX500)Sonics & Materials Inc.—Interrupción celular 500 W, 20 kHz, con sonda
Categoría: Instrumento
Frigorífico (4 y grados; C)Varios—Almacenamiento de muestras
Categoría: Instrumento
Nitrato de plataLaboratorios de Investigación Sisco94118Tinción de plata
Categoría: Química
Cloruro de sodio (NaCl)MerckS9888Elution buffer
Categoría: Química
Dodecilo sulfato de sodio (SDS)Laboratorios Bio-Rad11667289001Lisis y PAGE
Categoría: Química
EspectrofotómetroShimadzu—Medición de absorbancia
Categoría: Instrumento
Centrifugadora de centrifugación de centrifugaciónEppendorf—Centrifugación rápida
Categoría: Instrumento
Staphylococcus aureus TISTR 746TISTR, Tailandia—Microorganismo de prueba
Categoría: Material biológico
EstreptomicinaMerckS9137-25GControl positivo
Categoría: Química
Tetraspora sp. CU2551Colección Cultural KMITL—Cepa de algas
Categoría: Material biológico
Medio de fosfato de acetato de tris (TAP)-—Cultivo de algas
Categoría: Medio
Tris-HClMerck—Preparación de buffer
Categoría: Buffer 
Pinza vernierVarios—Medición de zona
Categoría: Instrumento
Baños de aguaVarios—Control de temperatura
Categoría: Instrumento
XMASSBruker Daltonics—Software de espectrometría de masas MALDI-TOF
Categoría: Software
ácido &alfa;-ciano-4-hidroxicinnámico (CHCA)Bruker Daltonics—Matriz MALDI
Categoría: Química

Referencias

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