El estudio se realizó en cumplimiento con la Declaración de Helsinki y las directrices éticas del hospital, y fue respaldado por el Hospital Popular Segundo de Wuxi, el Centro Médico de la Universidad de Jiangnan y los comités éticos (Ética nº 2024-Y-231). Todas las muestras biológicas humanas (sangre venosa y alícuotas séricas) se manejaron en estricta conformidad con las normativas de bioseguridad (GB 19489-2008). Todas las operaciones se realizaron en un gabinete de bioseguridad para evitar la contaminación de muestras y la exposición del personal. La eliminación de muestras biológicas usadas, puntas de pipeta contaminadas y tubos microcentrífugas se realizó conforme a las normas de gestión de residuos médicos: las muestras y materiales contaminados se autoclavaron a 121 °C durante 30 minutos, y luego se entregaron a instituciones cualificadas de eliminación de residuos médicos para un tratamiento centralizado que garantizara la bioseguridad.
Diseño de investigación
Se trató de un estudio de cohorte retrospectiva monocéntrico para investigar el valor pronóstico de los niveles séricos de HGF y el IBPS en los resultados patológicos postoperatorios de pacientes con CCOS. Este diseño de estudio sigue las directrices REMARK (Recomendaciones del Informe Prognóstico de Marcadores Tumorales). La población que asistió al Departamento Dental del Hospital Popular Segundo de Wuxi, Centro Médico de la Universidad de Jiangnan, desde enero de 2020 hasta diciembre de 2022, fue seleccionada como población de estudio. Se recopilaron un total de 170 casos de información, se incluyeron 165 casos tras la exclusión, se perdieron 7 casos durante el periodo de seguimiento y, finalmente, 79 casos en el grupo A (grupo control sano, personas sanas ingresadas en el hospital para examen físico durante el mismo periodo) y 79 casos en el grupo B (grupo OSCC, se incluyeron pacientes con OSCC). El diagrama de flujo de este estudio se ilustra en la Figura 1. Se recogieron sujetos elegibles del estudio a través del sistema de historial médico electrónico del hospital y la base de datos del centro de examen físico, y se recogieron datos clínicopatológicos detallados del grupo A (grupo control sano) y del grupo B (grupo OSCC). Se realizó un seguimiento postoperatorio a pacientes del grupo B durante el estudio para registrar recurrencia, metástasis y supervivencia. Incluyó solo un grupo control sano para identificar la expresión diferencial de marcadores inflamatorios entre pacientes con CCSO y personas sanas, proporcionando una base racional para establecer el valor de corte para el IBPS autoconstruido. Evaluaron el valor pronóstico del SII y lo verificaron dentro de la cohorte de pacientes OSCC basándose en sus resultados patológicos postoperatorios. Este diseño de estudio garantizó la precisión de los datos y la validez científica del estudio mediante criterios estrictos de agrupación, un proceso estandarizado de pruebas en laboratorio y un mecanismo sistemático de seguimiento, proporcionando un marco de investigación riguroso para analizar el valor pronóstico de los niveles de HGF y las puntuaciones IBPS en los resultados patológicos postoperatorios de la OSCC, lo que se espera que proporcione una base científica para el desarrollo de protocolos personalizados de evaluación prognóstica y terapéuticos estrategias en la clínica.
Criterios de inclusión y exclusión
Criterios de inclusión: (1) Pacientes diagnosticados conOSCC 21; (2) Edad de 40 a 65 años; (3) Con información clínica completa; (4) Recibió un plan de tratamiento secuencial integral basado en cirugía y complementado con radioterapia selectiva; (5) Pacientes con buen cumplimiento y disposición a cooperar con el plan de tratamiento desarrollado por el estudio; (6) El estado mental general de los pacientes es bueno, sus cuerpos están básicamente sanos y pueden expresar con sinceridad sus quejas sobre sus síntomas y responder preguntas relevantes de los profesionales sanitarios; (7) Los pacientes y sus familias fueron informados y aceptaron, y firmaron un formulario de consentimiento informado.
Criterios de exclusión: (1) Pacientes con tumores malignos combinados distintos de OSCC; (2) Pacientes con una combinación de enfermedades sistémicas graves o enfermedades del sistema inmunitario; (3) Pacientes con disfunción hemorrágica combinada de coagulación, o defectos funcionales cardíacos, hepáticos o renales graves, enfermedades cardiovasculares graves u otras enfermedades más graves; (4) Enfermedades infecciosas crónicas combinadas, combinadas con otras enfermedades de transmisión sexual (por ejemplo, sífilis, gonorrea, etc.); (5) Anomalías combinadas en la función cerebral, cardíaca, hepática y renal; (6) Pacientes que han participado en ensayos clínicos de medicamentos o estudios clínicos; (7) Solicitar la suspensión del tratamiento o la alta automática por motivos personales; (8) Otras condiciones que, en opinión del médico del estudio, no deberían incluirse; (9) Otras circunstancias que afectan los indicadores de observación de seguimiento.
Método de agrupación
Se dividieron los sujetos del estudio en dos grupos: grupo A: grupo control sano (n = 79), grupo B: grupo OSCC (n = 79).
Recogida de indicadores
Recopiló la información básica sobre los pacientes de ambos grupos.
Recogida de muestras
Se recogieron muestras de sangre venosa en ayunas (5 mL) de todos los participantes a primera hora de la mañana antes de la cirugía y se mantuvieron a temperatura ambiente (25 ± 2 °C) durante el traslado. Procesé las muestras de sangre en un plazo de 30 minutos (1.800 s) tras la recogida. Se transfirió el suero sobrenadante a aalícuotas de 0,5 mL utilizando tubos estériles de microcentrífuga de polipropileno tras la centrifugación a 3.000 × g durante 15 minutos a temperatura ambiente (25 ± 2 °C). Inmediatamente se colocaron todas las alicuotas en un congelador de temperatura ultra baja a -80 °C para su almacenamiento a largo plazo hasta el análisis, y evitaron ciclos repetidos de congelación-deshielo (no se permitía más de 1 ciclo de congelación-deshielo si era necesario).
Nivel suero de HGF
Se determinaron las concentraciones séricas de HGF usando un kit comercial de inmunoabsorbente enzimático (ELISA) según las instrucciones delfabricante 22. Brevemente, descongela muestras de suero a 4 °C durante 30 minutos para evitar la desnaturalización de proteínas, y luego diluye en una proporción 1:1 con el buffer de dilución proporcionado por el kit. Añadimos estándares, controles y muestras de suero diluido (100 μL por pozo) a la placa ELISA e incubé a 37 °C durante 60 minutos. Después de lavar la placa 5 veces con el tampón de lavado proporcionado, añadí el conjugado primario de anticuerpos y incubé a 37 °C durante otros 30 minutos. Tras una segunda ronda de lavado, se añadió el sustrato cromogénico y la reacción se incubó a 37 °C en la oscuridad durante 15 minutos, terminando la reacción con la solución de parada. Medí la absorbancia en 450 nm usando un lector ELISA dentro de los 10 minutos posteriores a la terminación. Se implementaron procedimientos estándar de control de calidad durante todo el ensayo, incluyendo el uso de calibradores y controles proporcionados por el kit. El coeficiente de variación (CV) intraensayo fue < 5% y el CV entre ensayos fue < 8%, lo que confirma un desempeño analítico fiable.
Cálculo IBPS
Analizaron las muestras de suero utilizando el analizador automático de hematología XN3000 y los reactivosacompañantes 23. Descongelaron las muestras de suero a 4 °C durante 20 minutos y se equilibraron a temperatura ambiente (25 ± 2 °C) durante 10 minutos antes de la prueba. Se realizaron análisis de sangre rutinarios a 25 ± 2 °C para obtener el recuento de leucocitos, neutrófilos, linfocitos y plaquetas, y luego se calcularon los NLR (recuento de neutrófilos/linfocitos) y PLR (recuento de plaquetas/linfocitos). Se realizó una calibración regular de los instrumentos de prueba a 25 °C, con CV intralote < 3% y CV interlote < 5% para indicadores de rutina sanguínea. Utilizó un ensayo inmunoturbidimétrico para medir el contenido de PCR en suero en el analizador bioquímico automático. Las muestras de suero se descongelaron a 4 °C durante 20 minutos y se equilibraron a 37 °C durante 5 minutos antes de su detección. Se realizó el ensayo a 37 °C con un tiempo de incubación de 10 minutos, y monitorizé la reacción de forma continua a 546 nm. El instrumento se operaba estrictamente conforme al manual de instrucciones para completar la prueba. La detección de PCR con CV intralote < 4% y CV interlote < 6%. La puntuación se realizó según nuestra escala IBPS casera. El sistema de puntuación IBPS se refiere al método de construcción de puntuaciones previas de pronóstico de inflamación y ajusta los pesos de los indicadores en función de los resultados preexperimentales de este estudio. El valor NLR ≤3,0 se puntuaba como 0 puntos, 3,0–5,0 como 1 punto, >5,0 como 2 puntos. Los valores de PLR ≤150 se puntuaban como 0 puntos, 150–300 como 1 punto y >300 como 2 puntos. El contenido de CRP ≤50 mg/L era de 0 puntos, 50–100 mg/L de 1 punto y >100 mg/L de 2 puntos. Puntuación total IBPS = puntuación CRP + puntuación NLR + puntuación PLR. Criterios de estratificación: ≤ 4 puntos para riesgo medio-bajo, 5–6 puntos para alto riesgo. Los valores de corte y los criterios de puntuación para NLR, PLR y CRP se determinaron en base a puntuaciones pronósticas inflamatorias previamente publicadas, combinadas con análisis exploratorio de datos en la población del presente estudio, en lugar de utilizar optimización estadística como el índice de Youden o el análisis de la curva de características de funcionamiento del receptor.
Visitas de seguimiento
En este estudio, se realizó un seguimiento estandarizado a los 20 meses para evaluar los resultados postoperatorios en los pacientes. La hora de inicio de la revisión fue el día de la operación quirúrgica para los pacientes del grupo B (grupo OSCC), y la hora de finalización fue el 31 de agosto de 2024. Se adoptó una combinación de seguimiento ambulatorio y seguimiento telefónico. Se realizó el examen físico y el examen por imagen en cada seguimiento para confirmar la presencia de recurrencia o metástasis tumoral. Los principales indicadores pronósticos fueron la supervivencia global (SO) y la supervivencia libre de enfermedad (DFS). La OS se definía como el tiempo desde el día de la cirugía hasta la muerte por cualquier causa. DFS se definió como el tiempo desde el día de la cirugía hasta la recurrencia, progresión o muerte tumoral por causas relacionadas con el tumor.
Cálculo del tamaño de la muestra
Este estudio utilizó G*Power 3.1.9.7 para estimar el tamaño de la muestra y así aclarar el valor pronóstico de los niveles de HGF y las puntuaciones IBPS para los resultados patológicos postoperatorios en pacientes con OSCC. Se estableció un nivel de prueba de α de 0,05 (bilateral), una eficacia del 85% y un factor inflamatorio AUC previsto de 0,75, según el cálculo del software, y se necesitaban 75 casos en cada grupo para cumplir los requisitos estadísticos de análisis de curvas ROC y regresión multifactorial. Teniendo en cuenta las incertidumbres sobre la posible pérdida de datos y abandonos, el tamaño de la muestra de este estudio se fijó finalmente en 79 casos por grupo para asegurar que el estudio tuviera suficiente eficacia estadística para sacar conclusiones fiables.
Análisis estadístico
Utilizé el software estadístico SPSS 28.0 para el análisis de datos. GraphPad Prism 9.0 se utiliza para dibujar curvas de supervivencia, mientras que Lucidchart se emplea para dibujar diagramas de flujo. Primero probé los datos del estudio para ver la distribución normal. Comparar las características de la línea base entre el grupo A y el grupo B utilizando una prueba t de muestras independientes para los datos de medición y una prueba χ2 para los datos de conteo. Describieron características de referencia como recuento [n (%)] y datos de medición (expresados como x ± s). Indicadores como HGF, NLR, PLR y CRP se expresaron como x ± s, y también se realizaron comparaciones intergrupales de estos indicadores mediante una prueba t de muestras independientes. Se utilizó un análisis de regresión logística binaria para investigar la asociación entre los niveles de HGF, las puntuaciones IBPS y los resultados patológicos postoperatorios (variable dependiente, 1 = adversa, 0 = favorable), con coeficientes de regresión positivos que indican una correlación positiva entre indicadores y resultados adversos. Se utilizó el método de Kaplan-Meier para graficar las curvas OS y DFS del grupo A y B, y se aplicó la prueba logarítmica para comparar las diferencias estadísticas en las tasas de supervivencia entre grupos. El valor pronóstico de las métricas anteriores para pacientes con OSCC se analizó utilizando la curva de característica operativa del receptor (ROC) y el área bajo la curva (AUC) para determinar el valor de corte óptimo, la sensibilidad y la especificidad. Los datos de recuento se presentaron como n (%), y la comparación entre el grupo A y el grupo B se analizó utilizando la prueba χ2 . Todas las pruebas estadísticas fueron bidireccionales, y P < 0,05 indicó una diferencia estadísticamente significativa.