Este estudio ha sido revisado y aprobado por el Comité de Ética en Investigación Médica del Hospital Popular de Heyuan (Número de aprobación: YXYJLL-SFKJ202461; Fecha de aprobación: 15 de mayo de 2024). El certificado ético ha sido subido como archivo complementario. El paciente, padre o tutor de un menor ha firmado una declaración durante el registro en la que se afirma: "Acepto que mis muestras y datos biológicos clínicos se utilizarán para investigación científica, innovación tecnológica e investigación clínica aprobada por el Comité de Ética en Investigación Médica tras la eliminación de información personal identificable", y este análisis no supondrá riesgos adicionales para el paciente y cumple con las normativas pertinentes. Todos los materiales utilizados en este estudio están listados en la Tabla de Materiales.
Asignaturas
Un total de 1.559 pacientes varones que visitaron el departamento ambulatorio del Hospital Popular de Heyuan y se sometieron a pruebas de VPH entre enero de 2021 y diciembre de 2024 fueron incluidos en el estudio. Los sujetos tenían entre 2 y 80 años (La población del estudio está compuesta por todos los pacientes masculinos con resultados válidos de pruebas de ácido nucleico por VPH obtenidas de visitas ambulatorias en esta institución médica entre 2021 y 2024; El objetivo principal es ofrecer una visión completa de las pruebas de VPH y los patrones de infección entre pacientes masculinos en la región; Además, las vías de infección por VPH no solo incluyen la actividad sexual, sino también la fricción o contacto con la superficie de la piel y las mucosas, así como la transmisión vertical de madre a hijo. Por ello, no se impusieron restricciones de edad, con una edad media de (34,2 ± 10,7) años.
Métodos
Este estudio empleó un diseño transversal retrospectivo para analizar a todos los pacientes masculinos que visitaron el departamento ambulatorio de nuestro hospital y se sometieron a pruebas de VPH; solo se incluyeron los resultados iniciales de muestreo para quienes se sometieron a pruebas repetidas.
Colección de especímenes
Las muestras de células exfoliadas fueron obtenidas por clínicos formados utilizando cepillos estériles y especializados. Los lugares de recogida incluían las superficies dorsal y ventral del pene, los surcos coronales internos y externos, el glande del pene, la uretra distal y cualquier lesión verrucosa visible, con la selección del lugar determinada según los hallazgos individuales del paciente; Tras la recogida, las cabezas de cepillo se rompieron en una solución dedicada para la conservación de muestras. Condiciones de conservación de la muestra: Tras la muestra, las muestras se almacenaban inmediatamente en un frigorífico a 2–8 °C, y la prueba se completaba en un plazo de 3 días.
Extracción de ADN
Tras oscilar y mezclar cada muestra, se añadieron secuencialmente 200 μL al reactivo de extracción o purificación de ácidos nucleicos. La extracción de ADN se realizó utilizando tecnología de perlas magnéticas con el reactivo de extracción en el instrumento de extracción totalmente automatizado de ácidos nucleicos SP96.
Detección del VPH
La prueba de VPH-ADN se realizó utilizando el kit de detección de genotipado del virus del papiloma humano (tipo 23), que emplea una combinación de amplificación in vitro basada en PCR y hibridación reversa por dot blot de ADN para la genotipificación del VPH. Se diseñaron cebadores específicos basándose en características genéticas del VPH, y se amplificaron fragmentos objetivo de 23 genotipos del VPH. Los productos amplificados se hibridaron con las sondas de tipificación fijadas en la membrana, incluyendo 17 HR-HPV (HPV16,51,52,53,18,58,59,31,33,45,56,66,35,39,68,73,82) y 6 LR-VPH (HPV6,11,42,43,81,83). En función de la presencia o ausencia de señales de hibridación, se determinó el estado de infección de estos genotipos de VPH. El procedimiento específico de laboratorio consistía en utilizar una punta de pipeta filtrada para añadir 5 μL de ADN extraído a la mezcla de reacción PCR, llevando el volumen total a 25 μL. Posteriormente, se realizó una amplificación por PCR. Tras la amplificación, todos los productos amplificados se añadieron a las tiras de membrana que contenían el hibridador isotérmico para la hibridación colorimétrica. Al completar el desarrollo del color, los resultados pueden interpretarse.
Análisis estadístico
Se utilizó el software SPSS 23.0 para análisis estadísticos. Los datos de recuento se expresaron como el número de casos (n) y el porcentaje (%). La comparación entre grupos se realizó mediante la prueba χ2 . P < 0,05 se consideró estadísticamente significativo. Entre los 23 genotipos de VPH, la positividad de cualquier genotipo individual indica infección por VPH; la positividad para un solo genotipo indica una sola infección; y la positividad para dos o más genotipos indica una infección múltiple. Las infecciones múltiples se clasifican además según el número de genotipos coexistentes en doble infección, triple infección, cuádruple infección, infección pêntipla, infección hexúxona y superiores." La relación con frecuencia total de detección se calculó utilizando el número total de detecciones de genotipos (1.238) como denominador, ya que los pacientes con múltiples infecciones contribuyeron con múltiples genotipos.