Este estudio involucró únicamente materiales vegetales y no incluyó experimentos con seres humanos ni animales. Por lo tanto, no se requirió aprobación ética. Las herramientas de investigación utilizadas en este protocolo se enumeran en la Tabla de Materiales.
1. Sitio experimental
El experimento se realizó durante las temporadas 2023/24 y 2024/25 en la Granja Experimental de la Estación de Investigación Hortícola de El-Qassassin, gobernación de Ismailia, Egipto (30°53′ N, 31°56′ E), con el fin de evaluar la respuesta de las plantas de hinojo (F. vulgare Mill.) a la fertilización orgánica y a las aplicaciones de bioestimulantes. Las condiciones climáticas durante el período de crecimiento (noviembre–abril) fueron registradas por la Estación Meteorológica de Ismailia. Las temperaturas medias mínimas y máximas del aire oscilaron entre 12–18 °C y 22–30 °C, respectivamente, mientras que la humedad relativa varió entre 50%–65%. No se registraron eventos climáticos extremos durante los períodos experimentales (Figura 1).

Figura 1: Representación esquemática del diseño experimental en parcelas divididas que muestra los niveles de té de compost asignados a las parcelas principales y los tratamientos con bioestimulantes distribuidos en las subparcelas a lo largo de tres repeticiones. Ct.1, Ct.2 y Ct.3 representan 360, 480 y 600 litros por hectárea (ha) aplicados al suelo, mientras que F.1, F.2, F.3, F.4 y F.5 representan pulverización foliar con 2 cm³/L de agua para cada uno de los extractos Control, Azolla, Spirulina, Nostoc y Chlorella, respectivamente. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
2. Material vegetal
Las semillas de hinojo se obtuvieron del Departamento de Investigación de Plantas Medicinales y Aromáticas, Instituto de Investigación Horticola, Centro de Investigación Agrícola, Dokki, Giza, Egipto. Las semillas se sembraron en camas de vivero durante la primera semana de noviembre, y las plántulas se aclarearon posteriormente a una planta por mata después del establecimiento.
3. Muestreo y análisis de suelo
Antes de la preparación del suelo, se recolectaron muestras compuestas de suelo (profundidad de 0–30 cm), se secaron al aire, se tamizaron mediante un tamiz de 2 mm y se analizaron sus propiedades físicas y químicas utilizando protocolos estándar13,14 (Tabla 1).
| Distribución del tamaño de partículas (%) | Clase textural | *M.O. (%) |
| Arena gruesa | Arena fina | Limo | Arcilla | Arenoso | 0.48 |
| 80.65 | 14.06 | 3.8 | 1.49 |
| pH | CE dS/m | PS % | Cationes (meq/l) | Aniones (meq/l) |
| Ca++ | Mg++ | Na+ | K+ | HCO3- | Cl- | SO4 |
| 8 | 0.79 | 28 | 4 | 2.68 | 1.79 | 0.61 | 1.4 | 4.38 | 2.98 |
| *M.O.(%): materia orgánica |
Tabla 1: Propiedades físicas y químicas del suelo experimental. Las características incluyen distribución del tamaño de partículas, clase textural, contenido de materia orgánica, pH, conductividad eléctrica, porcentaje de saturación, y cationes y aniones principales.
4. Configuración experimental
El experimento siguió un diseño de bloques completos al azar en parcelas divididas con tres repeticiones. Los niveles de té de compost se asignaron a las parcelas principales y los tratamientos con bioestimulantes a las subparcelas (Figura 2). Cada parcela medía 8,4 m2 y contenía 24 plantas dispuestas en tres hileras (de 4 m de longitud), con 70 cm entre hileras y 50 cm entre plantas dentro de las hileras.
Se aplicó riego por goteo utilizando emisores que suministraban 4 L h⁻1 por mata durante 1 h cada dos días. Para evitar interferencias entre tratamientos, se dejó una cresta entre parcelas sin plantar como zona de amortiguamiento.
A todas las parcelas se les aplicó 24 t ha⁻1 de compost durante la preparación del suelo, dos semanas antes de la siembra. Los fertilizantes minerales se aplicaron al 50% de la dosis recomendada (DR): 360 kg ha⁻1 de sulfato amónico (20,6 % N), 240 kg ha⁻1 de superfosfato cálcico (15,5 % P₂O₅) y 120 kg ha⁻1 de sulfato potásico (48 % K₂O). Los fertilizantes nitrogenados y potásicos se aplicaron en tres dosis iguales con intervalos de 15 días, mientras que el fertilizante fosforado se aplicó en una sola dosis basal. Durante todo el período de crecimiento se siguieron prácticas agronómicas estándar.

Figura 2: Rendimiento de aceite por hectárea (kg ha⁻¹) y su aumento relativo en comparación con el tratamiento control (T1: Ct1 × F1) durante la primera (S1) y segunda (S2) temporadas. Ct1 representa el nivel más bajo de té de compost (360 L ha⁻¹), y F1 representa el control sin aspersión. Los tratamientos se definen de la siguiente manera: T1 (Ct1 × F1), T2 (Ct1 × F2), T3 (Ct1 × F3), T4 (Ct1 × F4), T5 (Ct1 × F5), T6 (Ct2 × F1), T7 (Ct2 × F2), T8 (Ct2 × F3), T9 (Ct2 × F4), T10 (Ct2 × F5), T11 (Ct3 × F1), T12 (Ct3 × F2), T13 (Ct3 × F3), T14 (Ct3 × F4) y T15 (Ct3 × F5). Las barras de error representan los errores estándar de la media (SEM). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
5. Tratamientos con té de compost
El compost maduro de origen vegetal se extrajo bajo condiciones aeróbicas en agua dulce durante 24–48 h. El té de compost resultante presentó una conductividad eléctrica de 1,2–1,6 dS m⁻1 y un pH ligeramente alcalino (7,5–8,0). El té de compost se aplicó mediante riego por goteo a tasas de 360, 480 o 600 L ha⁻1 durante un período de 16 semanas, comenzando un mes después de la siembra.
6. Preparación y aplicación del bioestimulante
La biomasa fresca de Azolla caroliniana, Spirulina platensis, Nostoc muscorum y Chlorella vulgaris se homogenizó en agua destilada en una proporción de 1:10 (p/v), se filtró y se diluyó hasta una concentración final de 2 cm3 L⁻1 (aproximadamente 1200 L ha⁻1). Los extractos se prepararon recién antes de su aplicación y se aplicaron como pulverizaciones foliares tres veces durante la temporada de crecimiento (30, 60 y 90 días después de la siembra) utilizando un pulverizador manual hasta el escurrimiento.
7. Datos registrados
Parámetros de crecimiento vegetativo
Se cosecharon seis plantas seleccionadas al azar de cada unidad experimental a los 65 días después de la siembra. Se midió la altura de la planta (cm) desde la base hasta la punta del tallo principal. Se registró el peso fresco total de la hierba (g) y el peso seco (g), determinándose el peso seco tras secar las muestras en horno a 70 °C durante 48 h hasta alcanzar peso constante. El número de ramas por planta se calculó como el promedio obtenido en las plantas muestreadas.
Extracción del aceite esencial (AE)
Se extrajo aceite esencial de 40 g de frutos cosechados mediante hidrodestilación durante 3 h, siguiendo el método descrito por Miller15. Se dejó reposar el aceite extraído sin perturbar para asegurar una separación completa16.
Determinación del contenido y rendimiento de aceite esencial
El contenido de aceite esencial (% p/p) se calculó como:

Donde:
WEO = peso del aceite esencial extraído (g)
Wmuestra = peso seco de la muestra de planta sometida a hidrodestilación (g)
El rendimiento de aceite esencial por planta se calculó como:

Donde:
DWplant = peso seco de la planta entera por planta (g)
EO content = porcentaje de aceite esencial en base al peso seco (% p/p)
Nota: Se asumió que la densidad del aceite esencial era aproximadamente 1 g cm⁻3, lo que permitió la conversión de gramos a centímetros cúbicos.
El rendimiento de aceite esencial por hectárea se calculó como:

Donde:
rendimiento de EOpor planta - 1 = rendimiento de aceite esencial por planta (cm3)
Nplantas = número de plantas por hectárea
1000 = factor de conversión de cm3 a L
Nota: Todos los cálculos de rendimiento de aceite se basaron en materia seca para evitar la variabilidad asociada con el contenido de humedad de la planta.
Atributo de rendimiento
El número de umbelas por planta se registró en la etapa de maduración del fruto contando todas las umbelas en cada planta.
8. Análisis estadístico
Para cada rasgo y temporada, las observaciones a nivel de réplica se probaron para normalidad utilizando la prueba de Shapiro-Wilk. Como no se observaron desviaciones significativas respecto a la normalidad (p > 0,05), se aplicó un análisis paramétrico. Los datos se analizaron mediante un análisis de varianza (ANOVA) para un diseño de parcelas divididas con Statistix 8.1 (Analytical Software, 2008), y las medias de los tratamientos se compararon utilizando la prueba de diferencia mínima significativa (LSD)17.
Se realizó un análisis de componentes principales (PCA) como herramienta multivariada para resumir las relaciones entre los caracteres medidos. Se utilizaron los valores propios para determinar la contribución relativa de cada componente, y se empleó la visualización mediante biplot para comparar tratamientos y asociaciones entre caracteres18.