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Artículo de investigación
La aplicación de vermiculita y Azospirillum brasilense, especialmente en combinación, mejoró el crecimiento del trigo, el rendimiento de granos, la tasa fotosintética, la conductancia estomática y el contenido de clorofila, al tiempo que reducía la fuga de electrolitos y la acumulación de Cd en los tejidos vegetales bajo estrés de cadmio (Cd).
La contaminación por cadmio (Cd) en suelos agrícolas supone una grave amenaza para la productividad de los cultivos y la salud humana. Este estudio evaluó el potencial de la vermiculita y de la bacteria promotora del crecimiento vegetal Azospirillum brasilense para aliviar la toxicidad por Cd en el trigo (Triticum aestivum L.). Se realizó un experimento con marihuana con tres replicaciones y nueve tratamientos: T0 (Control), T1 (CD 100 mg/kg), T2 (CD 100 mg/kg + Vermiculita), T3 (CD 100 mg/kg + A. brasilense), T4 (CD 100 mg/kg + Vermiculita + A. brasilense), T5 (CD 200 mg/kg), T6 (CD 200 mg/kg + Vermiculita), T7 (CD 200 mg/kg + A. brasilense), y T8 (Cd 200 mg/kg + Vermiculita + A. brasilense). Niveles más altos de CD provocaban una inhibición del crecimiento más severa en el trigo. Sin embargo, los tratamientos con vermiculita y A. brasilense mejoraron significativamente el crecimiento de las plantas, redujeron la acumulación de CD en los tejidos vegetales y mejoraron las actividades enzimáticas antioxidantes (SOD, CAT). Cabe destacar que la aplicación combinada de vermiculita y A. brasilense (T4 y T8) mostró la mitigación más eficaz del estrés por Cd. Con 100 mg/kg de Cd (T4), las plantas de trigo mostraron un aumento del 10,67% en altura, un 10,21% más longitud de la espiga y un 19,87% mayor rendimiento de grano en comparación con el tratamiento solo con Cd. Bajo 200 mg/kg de estrés de Cd (T8), la misma combinación provocó un aumento del 44,83% en la altura de la planta, una mejora del 17,63% en la longitud de la espiga y un incremento del 44,83% en el rendimiento en comparación con plantas no tratadas con estrés de Cd (T5). Estos resultados demuestran que el uso sinérgico de Vermiculita y Azospirillum brasilense mejora la tolerancia del trigo a la toxicidad por Cd. Su aplicación combinada mejora los parámetros de crecimiento, los rasgos fisiológicos y el rendimiento bajo condiciones de estrés por Cd, proporcionando un enfoque ecológico para remediar suelos contaminados con CD y mantener la productividad del trigo.
El trigo (Triticum aestivum L.) es un alimento básico vital que proporciona una fuente principal de energía para millones depersonas 1. Como fuente principal de alimento, se cultiva en vastas extensiones de tierras agrícolas, especialmente en regiones templadas. La versatilidad, el valor nutricional y la adaptabilidad del trigo a diversas condiciones ambientales lo convierten en una piedra angular de la seguridadalimentaria 2. Sin embargo, el potencial de rendimiento del trigo suele verse comprometido por diferentes factores de estrés abiótico y biótico, lo que conduce a pérdidas sustanciales de productividad. Uno de los desafíos más urgentes a los que se enfrenta la producción de trigo hoy en día es la contaminación del suelo con metales pesados, especialmente cadmio (Cd)2,3. El cadmio, un metal pesado tóxico, puede introducirse en suelos agrícolas mediante actividades industriales, fertilizantes fosfatados y riego con agua contaminada. Una vez en el suelo, el Cd es absorbido fácilmente por las plantas de trigo, donde se acumula en varios tejidos, lo que provoca estrés oxidativo, funciones fisiológicas deterioradas y reducción delcrecimiento 3. Los efectos tóxicos del CD en el trigo no solo disminuyen el rendimiento de los cultivos, sino que también causan problemas de salud humana a través del consumo de grano contaminado. La toxicidad por metales pesados y otros factores, como deficiencias de nutrientes, mala estructura del suelo, estrés por sequía y prácticas agronómicas subóptimas, contribuyen al bajo rendimiento deltrigo 4. La amenaza constante del cambio climático agrava estos desafíos, dificultando cada vez más la producción sosteniblede trigo 5.
La vermiculita es un mineral natural que ha ganado una atención significativa en la agricultura por sus propiedades únicas y beneficios como enmienda del suelo. Compuesto principalmente por silicato hidratado de magnesio-aluminio-hierro, la vermiculita es conocida por su capacidad de expandirse al calentarse, resultando en un material ligero y altamenteporoso 6. Esta forma ampliada de vermiculita muestra excelentes capacidades de retención y aireación de agua, lo que la convierte en un medio ideal para mejorar la estructura del suelo y potenciar el crecimiento de las plantas. En aplicaciones agrícolas, la vermiculita es un componente crítico en las mezclas de suelo, especialmente en zonas con mala calidad o en condiciones que requieren una mejor gestión del aguay los nutrientes 7. La vermiculita tiene la capacidad de retener agua en el suelo y mantener la humedad bajo estrés hídrico. Es valioso para evitar el ahogamiento y garantizar un suministro constante de humedad a las raíces de las plantas. Además, la alta capacidad de intercambio catiónico (CEC) de la vermiculita le permite proporcionar los nutrientes, como potasio (K), calcio (Ca) y magnesio (Mg), que están disponibles para las plantas a lo largo del tiempo 8. El papel de la vermiculita en la mitigación de factores de estrés ambiental, como la contaminación por metales pesados, es de particular interés en la agriculturasostenible 6. Debido a su alta superficie y afinidad por los metales pesados, la vermiculita puede adsorber e inmovilizar elementos tóxicos como el cadmio (Cd) en el suelo, reduciendo su biodisponibilidad para las plantas. Esto no solo protege a los cultivos de los efectos negativos perjudiciales de la toxicidad por metales, sino que también ayuda a mantener la salud del suelo al eliminar las sustanciasnocivas 6,9.
Azospirillum brasilense es un conocido rizobacterio promotor del crecimiento vegetal (PGPR) que ha despertado un interés considerable en la investigación y práctica agrícola debido a su capacidad para mejorar el crecimiento y la resistencia de las plantas bajo diversas condiciones deestrés 10. Originalmente aislada de la rizosfera de gramíneas tropicales, A. brasilense es una bacteria de vida libre que coloniza las raíces de una amplia variedad de cultivos, incluido el trigo (Triticum aestivum L.), donde establece una relación beneficiosa con la plantahospedadora 11. Los principales mecanismos por los cuales A. brasilense promueve el crecimiento de los cultivos son fijar el nitrógenoN2 atmosférico, que puede absorber fácilmente y utilizar para las funciones de la planta. Esta fijación biológica de nitrógeno reduce los requerimientos de fertilizantes sintéticos para el crecimiento de las plantas, contribuyendo a prácticas agrícolas mássostenibles 1,11. A. brasilense es conocida por producir ácido indol-3-acético (IAA), que es una fitohormona y puede mejorar el desarrollo radicular; Este desarrollo radicular puede mejorar la absorción de nutrientes. Más allá de sus efectos que favorecen el crecimiento, A. brasilense también puede mejorar la tolerancia de las plantas a la toxicidad de metalespesados 12. En suelos contaminados, A. brasilense puede modular las respuestas fisiológicas y bioquímicas de la planta, reduciendo la absorción y acumulación de metales como el cadmio (Cd). La bacteria logra esto mediante varios mecanismos, como alterar los patrones de exudación de las raíces, potenciar la actividad enzimática antioxidante y producir sustancias poliméricas extracelulares que pueden unirse a metales pesados, reduciendo así su disponibilidad para las plantas13. El potencial de A. brasilense para mitigar la toxicidad por Cd en el trigo es especialmente significativo en el contexto de la agricultura moderna, donde la contaminación del suelo con metales pesados supone una amenaza creciente para la productividad de los cultivos y la seguridad alimentaria. Aprovechando las capacidades naturales de A. brasilense, los agricultores pueden mejorar la salud y el rendimiento de los cultivos de trigo incluso en entornos difíciles, contribuyendo a la seguridad alimentaria y la sostenibilidadmedioambiental 11,13,14.
El creciente desafío de la contaminación por cadmio (Cd) en suelos agrícolas representa una amenaza significativa para la sostenibilidad de la producción agrícola, especialmente en cultivos básicos como eltrigo 3. El CD es un metal pesado tóxico que no solo dificulta el crecimiento de las plantas, sino que también puede acumularse en las partes comestibles de los cultivos. A medida que las prácticas agrícolas se enfrentan cada vez más a la doble presión de la contaminación ambiental y la necesidad de mayor productividad, se requieren estrategias innovadoras y sostenibles para mitigar el impacto de metales pesados como el CD en la saludde los cultivos 15. La aplicación combinada de vermiculita y azospirillum brasilense ofrece un enfoque prometedor para abordar la toxicidad por Cd enel trigo 7,9,14,16. La vermiculita, con su alta capacidad de intercambio catiónico y propiedades de retención de agua, mejora la estructura del suelo, aumenta la disponibilidad de nutrientes y reduce la movilidad de metales como el Cd en elsuelo. Por otro lado, A. brasilense, un rizobacterio que promueve el crecimiento vegetal, mejora la tolerancia vegetal a la toxicidad por metales pesados modulando la fisiología radicular, produciendo fitohormonas y reduciendo la biodisponibilidad de metales tóxicos mediante diversas víasbioquímicas 14. La integración de la vermiculita y A. brasilense en una única estrategia de gestión aprovecha las fortalezas de ambos componentes, creando un efecto sinérgico que es más eficaz que el uso de cualquiera de los dos componentes por sí solo. La capacidad de la vermiculita para inmovilizar el Cd en el suelo complementa el papel de A. brasilense en el fortalecimiento de los mecanismos de defensa de las plantas frente al estrés por Cd. Además, la vermiculita puede crear un entorno más propicio para que A. brasilense prospere al mejorar la aireación del suelo y los niveles de humedad, que son fundamentales para la supervivencia y actividad de la bacteria en larizosfera 11,14. Sin embargo, el efecto combinado de la vermiculita y A. brasilense sobre el crecimiento y el rendimiento fisiológico del trigo bajo estrés Cd no ha sido investigado sistemáticamente.
La necesidad de esta aplicación combinada surge de las limitaciones de los enfoques convencionales para gestionar la toxicidad por Cd. Los métodos tradicionales, como el uso de enmiendas químicas, a menudo ofrecen solo un alivio temporal y pueden tener consecuencias ambientales adversas. El uso combinado de vermiculita y A. brasilense puede ofrecer una solución más sostenible que no solo mitiga la toxicidad por el C, sino que también puede mejorar la salud general del suelo y el crecimiento de las plantas, conduciendo a una mejora en el rendimiento, fisiología y calidad del trigo. La aplicación combinada de vermiculita y A. brasilense en el crecimiento del trigo y el rendimiento fisiológico bajo estrés Cd no ha sido investigada sistemáticamente. Para cubrir esta brecha de conocimiento, el presente experimento en marihuana probó las siguientes hipótesis: (H₁) La aplicación de vermiculita reducirá la acumulación de Cd en los tejidos del trigo y mejorará el crecimiento y el rendimiento; (H₂) La inoculación con A. brasilense mejorará el rendimiento fisiológico (tasa fotosintética, conductancia estomática, contenido de clorofila) y la absorción de nutrientes; y (H₃) La aplicación combinada producirá mejoras mayores que cualquiera de las enmiendas por sí sola, asociadas a una mayor colonización radicular bacteriana. Este estudio no pretende proporcionar directrices directas para la aplicación en el campo, ya que esas preguntas requieren ensayos de campo más allá del alcance de este experimento controlado.
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Se cumplieron todas las directrices y legislación locales, nacionales e internacionales para el uso de plantas en este estudio. Los reactivos y el equipo utilizado se enumeran en la Tabla de Materiales.
Diseño experimental y material
Se organizó un experimento con maceta en la azotea del edificio del departamento de ingeniería agrícola de la Universidad de Ingeniería y Tecnología de la Información Khwaja Fareed, Pakistán (28,42° N, 70,30° E) para investigar el papel de la vermiculita y el azospirillum brasilense en la mitigación de la toxicidad del cadmio (Cd) en el cultivo de trigo durante la temporada de invierno de 2023–2024. Para este experimento se utilizó un diseño completamente aleatorizado (CRD), con tres replicaciones. Se obtuvo una variedad de trigo aprobada de "Dilkash-20" de la Granja de Investigación Adoptiva Rahim Yar Khan, que es adecuada para la región local. Se utilizó una maceta de 1 x 1 x 1 pie (30,48 cm × 30,48 cm × 30,48 cm), con 12 kg de tierra. La esterilización de semillas se realizó antes del experimento en el laboratorio de agronomía con un 70% de etanol. Las semillas se plantaron el 10de noviembre de 2023. Se colocaron 8 semillas de trigo en cada maceta y se mantuvieron 4 plantas en la fase de cultivo. La vermiculita se obtenía del mercado local y se aplicaba durante la adición del suelo a una dosis de 150 g/kg de suelo. Azospirillum brasilense se obtuvo en la Government College University Lahore (GCUL), Lahore, Pakistán. Azospirillum brasilense se aplicó junto con la inoculación de semillas en el cultivo de trigo mediante el procedimiento estándar, según informaron Zaheer et al.17. El experimento consistió en 9 tratamientos (T0 = Control (Sin enmienda del suelo, sin toxicidad por CD), T1 = Toxicidad por CD 100 mg/kg de suelo, T2 = CD 100 mg/kg de suelo + Vermiculita, T3 = CD 100 mg/kg de suelo + A. brasilense, T4 = Cd 100 mg/kg de suelo + Vermiculita + A. brasilense,T 5 = Toxicidad CD 200 mg/kg de suelo, T6 = Cd 200 mg/kg de suelo + Vermiculita, T7 = Cd 200 mg/kg de suelo + A. brasilense, T8 = Cd 200 mg/kg de suelo + Vermiculita + A. brasilense). La temperatura media mensual en °C y la humedad en % en el sitio experimental se muestran en la Tabla 1. Antes del inicio del experimento, se realizó un análisis del suelo y las propiedades del suelo se muestran en la Tabla 2. El riego se aplicó según lo necesario en las etapas de cultivo, botaje, anthesis y llenado de grano, y los fertilizantes también se aplicaron de forma uniforme según las recomendaciones. El riego se aplicaba manualmente con un tarro de agua y mantenía un 70% de humedad del suelo en cada maceta, sin estrés por sequía. Se aplicaron fertilizantes según las recomendaciones del departamento de agricultura (120-80-60 kg NPK ha-1). Los fertilizantes se calculaban según el tamaño de cada maceta. Se aplicaron dosis completas de P y K y media dosis de N en el momento de la siembra, y la media dosis restante de N se aplicó en la etapa de cultivo. Se realizó muestreo destructivo para medir la longitud de raíces y brotes (30 días después de la siembra) en macetas separadas designadas para la cosecha en etapas tempranas; Estos POTS no se utilizaron para las mediciones finales de rendimiento, por lo que el muestreo destructivo temprano no afectó a los datos posteriores de rendimiento. Un cronograma esquemático del experimento es el siguiente: Día 0 (preparación del suelo, pinchado de Dc, mezcla de vermiculita, inoculación de semillas, siembra), Día 10–30 (muestreo de raíces para qPCR), Día 30 (longitud de raíz y brote), Día 85 (antesis: mediciones fisiológicas) y Día 120 (cosecha: parámetros de rendimiento). Se recogieron muestras de plantas en tres momentos de identidad. A los 10, 20 y 30 días después de la siembra (DAS), se recogieron raíces de macetas separadas. En 30 DAS, se cosechaban macetas separadas de forma destructiva para obtener la longitud de raíces y brotes. A 85 DAS (antesis), se midieron los parámetros fisiológicos de forma no destructiva. En 120 DAS, se registraron los parámetros finales de fluencia. No se utilizaron macetas usadas para muestreos destructivos tempranos (10–30 DAS) para las mediciones de rendimiento.
El cadmio se aplicó como cloruro de cadmio (CdCl₂•2,5H₂O, grado analítico, ≥98% de pureza). Las cantidades requeridas para concentraciones objetivo de 100 mg Cd kg⁻1 de suelo y 200 mg Cd kg⁻1 de suelo se calcularon en función del peso seco del suelo (12 kg por maceta). El CdCl₂ se disolvió en 500 mL de agua desionizada por maceta y se mezcló cuidadosamente con el suelo usando un mezclador mecánico durante 15 minutos para asegurar una distribución homogénea. Tras la mezcla, la tierra con pinchos se colocaba en macetas revestidas de plástico y se dejaba equilibrar durante 14 días a temperatura ambiente (25 ± 2 °C), mezclando periódicamente cada 3 días para estabilizar la especiación Cd y permitir el envejecimiento. La humedad del suelo se mantuvo en el 70% de la capacidad del campo durante el periodo de equilibrio. Tras el equilibrio, se recogieron muestras representativas de suelo (10 g por maceta), se secaron al aire, se digirieron con HNO₃/HClO₄ (4:1, v/v) y se analizaron para obtener la concentración total de Cd utilizando un espectrofotómetro de absorción atómica para verificar los niveles reales de Cd. Las concentraciones medidas de CD fueron 98,4 ± 3,2 mg kg⁻1 para el tratamiento de 100 mg kg⁻1 y 197,6 ± 5,1 mg kg⁻1 para el tratamiento de 200 mg kg⁻1 , confirmando que se alcanzaron los niveles objetivo. Las propiedades fisicoquímicas y el contenido de metales pesados de la vermiculita utilizada en este estudio se muestran en la Tabla 3.
| Mes | Temperatura (°C) | Humedad (%) |
| Noviembre de 2023 | 28 | 56 |
| Diciembre, 2023 | 18 | 62 |
| Enero de 2024 | 17 | 63 |
| Febrero de 2024 | 18 | 32 |
| Marzo de 2024 | 21 | 25 |
| Abril, 2024 | 24 | 20 |
Tabla 1: Temperatura media y humedad del sitio experimental durante 2023–2024.
| Parámetros | Valores (2023-24) |
| Materia orgánica | 0.56% |
| pH | 7.42 |
| EC | 227 μS/cm |
| T.S.S. | 0.54% |
| Available-P | 5,21 ppm |
| Available-K | 119 ppm |
| Porcentaje de saturación | 34 |
| Separaciones del suelo: arena, limo, arcilla (%) | 36%, 40 %, 24 % |
Tabla 2: Propiedades del suelo del suelo utilizado para el experimento antes de la siembra del cultivo.
| Propiedad | Valor | Metal | Concentración (mg kg⁻¹) |
| Grado | Grado hortícola | Cadmio (Cd) | < 0,01 (por debajo del límite de detección) |
| Tamaño de partícula | 2-4 mm | Ventaja (PB) | 2.1 |
| pH (1:5 en H₂O) | 7.2 | Cobre (Cu) | 1.8 |
| Capacidad de intercambio catiónico (CEC) | 85,4 cmolc kg⁻¹ | Zinc (Zn) | 5.3 |
| Capacidad de retención de agua (WHC) | 450% (c/mierda) | - | - |
| Densidad volumétrica | 0,12 g cm-3 | - | - |
| Tasa de solicitud | 150 g kg⁻¹ de suelo (15% p/w) | - | - |
| Cantidad por maceta (12 kg de tierra) | 1,8 kg | - | - |
Tabla 3: Propiedades fisicoquímicas y contenido de metales pesados de la vermiculita utilizada en este estudio.
Rasgos estudiados
Todos los parámetros relacionados con el crecimiento de la planta, como la altura de la planta, la longitud de la espiga, el número de espiguillas por espigón, granos por espiga, el peso de 1000 granos y el rendimiento de grano por planta, se registraron manualmente mediante el uso de una varilla medidora y un balance de peso mediante un procedimiento estándar. Se realizaron análisis bioquímicos (determinación de las actividades enzimáticas antioxidantes) y análisis fisiológicos (tasa fotosintética, conductancia estomática, contenido de clorofila, fuga de electrolitos (EL), tasa de crecimiento del cultivo (CGR) e índice de área foliar (LAI)) en la fase de antésis tras 85 días de siembra. La longitud de raíces y brotes se observó tras 30 días de crecimiento de plantas de trigo, cuando se retiraron las plantas para mantener 4 plantas en la maceta tras 20 días de siembra. Se utilizaron un analizador de gases infrarrojos (Cl-340) y un medidor de clorofila (CL-1) para observar la tasa fotosintética, la conductancia estomática y el contenido de clorofila, respectivamente. La fuga de electrolitos (EL) se midió con la ecuación reportada por Mussell yStaples 18 según el procedimiento estándar reportado por Zaheer et al.14. EL se calculó como: EL (%) = (EC inicial / EC final) × 100, donde la CE inicial es la conductividad eléctrica medida tras 24 horas de incubación a 25 °C, y la CE final es la conductividad medida tras autoclavar las muestras a 121 °C durante 20 minutos.
El nitrógeno orgánico disuelto (COD), el carbono orgánico disuelto (COD) y el carbono orgánico del suelo (SOC) se midieron con el procedimientoestándar 19. Se detectaron LAI y CGR según el procedimiento20. Se observó la absorción de N, P y K por parte de la planta de trigo, según se informa en el procedimiento descrito en el informeanterior 21.
Análisis estadístico
Todos los datos de esta investigación se recogieron a partir de tres replicaciones, se recopilaron y promediaron. Los datos se analizaron estadísticamente mediante el uso de Statistic 8.1 y Microsoft Excel 2010. Los datos se analizaron utilizando ANOVA unidireccional seguido de la prueba de Diferencia Mínima Significativa (LSD) de Fisher en p ≤ 0,05 para la separación media. Diferentes letras que aparecen con los datos/resultados muestran la diferencia estadística entre cada tratamiento.
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La altura de la planta (HP) se vio significativamente afectada por las enmiendas del suelo en todos los tratamientos estudiados (Tabla 4). El pH más alto se observó en T0 (199,44 cm), cuando no hubo enmienda del suelo ni toxicidad por Cd, seguido por T4 (98,44 cm) cuando la toxicidad por Cd fue de 100 mg/kg de suelo con la aplicación de vermiculita y A. brasilense. El pH más bajo (82,37 cm) se observó en T5 cuando había 200 mg/kg de toxicidad por CD en el suelo....
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La toxicidad por CD redujo significativamente todos los parámetros de crecimiento y rendimiento medidos en eltrigo 22. Esta supresión del crecimiento puede atribuirse al estrés oxidativo inducido por el Cd, que interrumpe la división y elongación celular, afecta la absorción de nutrientes y reduce la eficiencia fotosintética. De manera similar, el número de espiguillas por espigón, granos por espigón, peso de grano y rendimiento por planta disminuyeron significati...
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Los autores declaran que no tienen intereses en competencia. Durante la preparación de este manuscrito, el(los) autor(es) utilizaron ChatGPT y Grammarly para mejorar el lenguaje técnico e inglés del artículo. Tras utilizar esta herramienta/servicio, el/los autor revisaban y editaban el contenido según fuera necesario y asumían toda la responsabilidad del contenido de la publicación.
Los autores reconocen el apoyo financiero proporcionado por el Decano de Investigación Científica, Vicepresidencia de Estudios de Posgrado e Investigación Científica, Universidad King Faisal, Arabia Saudí, para esta investigación (Grant No. KFU263053).
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| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Espectrofotómetro de absorción atómica (AAS) | PerkinElmer, EE. UU. | AAnalyst 800 | Verificación de concentración de Cd en suelo |
| Azospirillum brasilense | Government College University Lahore (GCUL), Pakistán | Cepa disponible desde la colección de cultivos GCUL | Inoculación de semillas |
| Cloruro de cadmio (CdCl2·2.5H2O) | Merck, Alemania | Número CAS 7790-78-5 | Inducción de estrés por Cd |
| Medidor de clorofila | No especificado | CL-1 | Medición del contenido de clorofila |
| Kit DNeasy PowerSoil | QIAGEN, Hilden, Alemania | Número de cat. 12888-100 | Extracción de ADN de raíces |
| Excel 2010 | Microsoft, EE. UU. | Versión 14.0 | Compilación de datos y estadísticas básicas |
| Analizador de gases por infrarrojos (IRGA) | No especificado | CI-340 | Tasa fotosintética y conductancia estomática |
| Primers específicos de nifH | Sintetizados a medida | Secuencias proporcionadas en el texto | Amplificación qPCR |
| Ninhidrina | Sigma-Aldrich, EE. UU. | Número CAS 485-47-2 | Determinación del contenido de prolina |
| Sistema de PCR en tiempo real QuantStudio 5 | Applied Biosystems, EE. UU. | QuantStudio 5 | Análisis qPCR |
| Espectrofotómetro | No especificado | No especificado | Medición del contenido de prolina |
| Statistik 8.1 | Analytical Software, EE. UU. | Versión 8.1 | Análisis estadístico (ANOVA, LSD) |
| SYBR Green Master Mix | Applied Biosystems, EE. UU. | Número de cat. 4309155 | Detección qPCR |
| Vermiculita (grado hortícola) | Mercado local, Rahim Yar Khan, Pakistán | No aplicable | Enmienda del suelo |
| Variedad de trigo “Dilkash-20” | Granja de Investigación Adaptativa, Rahim Yar Khan, Pakistán | Variedad local aprobada | Material vegetal |