Ensayo ELISpot para la cuantificación de células secretoras de anticuerpos totales y específicas de antígenos en sangre y médula ósea de macacos rhesus inmunizados

Manivannan Nandhagopal; Nawal Ouguirti; Kenneth A. Rogers; Daniel P. Leaman; Michael B. Zwick; Francois J. Villinger; Deepanwita Bose

doi:10.3791/71836

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Artículo de método

Ensayo ELISpot para la cuantificación de células secretoras de anticuerpos totales y específicas de antígenos en sangre y médula ósea de macacos rhesus inmunizados

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DOI:

10.3791/71836

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21 de agosto de 2026

Manivannan Nandhagopal¹ , Nawal Ouguirti¹ , Kenneth A. Rogers² , Daniel P. Leaman³ , Michael B. Zwick³ , Francois J. Villinger¹ , Deepanwita Bose¹

¹Department of Comparative Medicine, Michale E. Keeling Center for Comparative Medicine and Research, University of Texas, ²New Iberia Research Center, University of Louisiana at Lafayette, ³Department of Immunology and Microbiology, Scripps Research Institute

En este artículo

Resumen

ELISpot para células B es un método validado para cuantificar la magnitud y durabilidad de las células plasmáticas de larga duración específicas para antígenos IgG, IgM e IgA, así como de las células secretoras de anticuerpos (ASC) totales, tanto en sangre (que refleja plasmablastos de corta duración tras la inmunización) como en las ASC de médula ósea más duraderas.

Resumen

La evaluación de nuevos antígenos y adyuvantes vacunales tradicionalmente depende de la medición de títulos de anticuerpos, lo cual requiere tiempo para desarrollarse tras la inmunización. La cuantificación de células secretoras de anticuerpos (ASCs) tras inmunizaciones primaria y de refuerzo proporciona una medida temprana e informativa desde el punto de vista mecanicista de la inmunidad humoral inducida por la vacuna, y puede facilitar la optimización de formulaciones vacunales y estrategias de inmunización. Aquí se describe un protocolo para enumerar ASCs a partir de células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) y células de médula ósea (BM) de macacos rhesus, un modelo preclínico importante para la investigación de vacunas contra el VIH. Este ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISpot) permite cuantificar tanto ASCs específicos para antígenos como ASCs totales de IgG, IgM e IgA, midiendo sus frecuencias absolutas y relativas. En sangre periférica, el ensayo capta la respuesta máxima de plasmablastos tras la inmunización, mientras que en la médula ósea detecta la acumulación de células plasmáticas específicas para antígenos de diferentes isotipos, evaluando así la durabilidad de las ASCs de larga vida. Este protocolo ofrece un enfoque robusto y reproducible para evaluar combinaciones de inmunógenos y adyuvantes en estudios preclínicos de vacunas, y proporciona datos valiosos para apoyar la transición de candidatos vacunales prometedores al desarrollo clínico.

Introducción

Las células secretoras de anticuerpos (ASC) son componentes clave de la inmunidad adaptativa e incluyen tanto a los plasmablastos de vida corta, que se generan rápidamente tras la inmunización, como a los plasmocitos de vida larga, responsables de la producción sostenida de anticuerpos. Los plasmablastos son detectables transitoriamente en sangre periférica y en órganos linfoides secundarios, alcanzando frecuencias máximas en momentos definidos tras la inmunización, que varían según la formulación de la vacuna y la especie del huésped (típicamente entre los días 4 y 5 en macacos rhesus y aproximadamente el día 7 en humanos). En contraste, los plasmocitos maduros son d....