Efectos de la acupuntura en el cuero cabelludo tipo movimiento sobre la microestructura de la cápsula externa y la excitabilidad del reflejo espinal en un modelo de rata de espasticidad post-ictus

Resumen

Este protocolo describe la acupuntura del cuero cabelludo en un modelo de rata de espasticidad post-ictus y demuestra su evaluación mediante evaluaciones conductuales, de resonancia magnética, histológicas y electrofisiológicas para investigar cambios en la microestructura de la cápsula externa y la excitabilidad del reflejo espinal.

Resumen

La espasticidad post-ictus (PSS) afecta gravemente la función motora y la calidad de vida tras un ictus. La alteración de la vía cortico-reticulospinal y la inhibición descendente supraespinal deteriorada se consideran mecanismos patológicos importantes; sin embargo, los mecanismos neuronales y microestructurales subyacentes a los efectos terapéuticos de la acupuntura de cuero cabelludo en movimiento (MSSA) siguen siendo incompletamente comprendidos. Este estudio tuvo como objetivo investigar los efectos de la MSSA sobre el PSS mediante una evaluación multimodal que integra neuroimagen, electrofisiología e histología en un modelo de rata de oclusión de la arteria cerebral media. Se realizó la resonancia magnética ponderada en T2 para cuantificar el volumen del infarto cerebral, y se utilizó la imagen por tensor de difusión para evaluar la integridad microestructural de la sustancia blanca de la cápsula externa. La tinción con Luxol Fast Blue (LFB) evaluó la integridad de mielina dentro de la cápsula externa, mientras que los registros del reflejo H evaluaron la excitabilidad del reflejo espinal. Se realizaron análisis de correlación para examinar las relaciones entre el volumen del infarto, la microestructura de la sustancia blanca, la excitabilidad del reflejo espinal y la gravedad de la espasticidad. La MSSA redujo el volumen del infarto cerebral, alivió el daño microstructural de la cápsula externa y atenuó la desmielinización. Además, el MSSA mejoró parámetros anormales del reflejo H, normalizó la excitabilidad del reflejo espinal y redujo la espasticidad. Los análisis de correlación mostraron que los infartos más grandes se asociaban con una mayor lesión en la cápsula externa, mientras que una mejor integridad de la sustancia blanca se asociaba con una mejor regulación del reflejo espinal y una espasticidad menos severa. Estos hallazgos sugieren que el MSSA puede aliviar el PSS reduciendo la lesión cerebral isquémica, preservando la integridad microestructural de la cápsula externa y mejorando la función inhibitoria descendente asociada a la vía cortico-reticuloespinal, proporcionando evidencia preclínica que respalda su aplicación terapéutica.

Introducción

La espasticidad post-ictus (PSS) es una secuela prevalente y incapacitante del ictus isquémico, definida clínicamente por aumentos dependientes de la velocidad y la longitud del tono muscular. Esta condición suele provocar una postura anormal de las extremidades y patrones de movimiento disfuncionales, comprometiendo gravemente la independencia motora y la calidad de vida de los pacientes, al tiempo que impone cargas económicas y de cuidado considerables a nivel^{mundial 1,2}. Como manifestación típica del síndrome de la neurona motora superior, la patogénesis del PSS se atribuye principalmente a una hiperexcitabilidad exagerada de los reflejos de estiramiento espinal. Estudios neuroanatómicos y neurofisiológicos acumulados han demostrado que la pérdida de la modulación inhibitoria descendente desde el sistema extrapiramidal hacia los circuitos de reflejo espinal es un mecanismo patológico clave subyacente al inicio y progresión del PSS, siendo la vía cortico-reticuloespinal el circuito neural principal que media este control regulador^{descendente 3,4,5}.

La técnica de punción es un determinante clave de la eficacia de la acupuntura y ocupa un papel fundamental en la práctica clínica de la acupuntura. La acupuntura de cuero cabelludo de estilo movimiento (MSSA) es una técnica de punción distintiva desarrollada específicamente para la intervención PSS que combina acupuntura cuero cabelludo con ejercicios simultáneos de extremidades^{activas o pasivas 3}. Numerosos ensayos clínicos han demostrado que la MSSA produce mejores resultados en comparación con la acupuntura del cuero cabelludo sola o la rehabilitación por ejercicio en la reducción de la gravedad de la espasticidad, la restauración de la función locomotora y la mejora de las actividades diarias en supervivientes de ^ictus 6,7,8,9. Nuestros estudios previos en animales demostraron además que el MSSA ejerce efectos antiespásticos más pronunciados que la acupuntura convencional del cuero cabelludo en modelos de ratas con PSS. Mecanísticamente, estos efectos terapéuticos se han asociado con una mejora de la perfusión cerebral en la penumbra isquémica, una reducción de la excitabilidad del reflejo de estiramiento espinal y un aumento de la expresión del cotransportador de cloruro de potasio 2 (KCC2) en motoneuronas del cuerno anterior espinal. Esta modulación molecular puede potenciar aún más la transmisión inhibitoria espinal del ácido γ-aminobutírico (GABA)ergica, contribuyendo así al alivio de la^{espasticidad 10,11}.

Las investigaciones mecanicistas existentes sobre MSSA siguen siendo limitadas, sin estudios previos que examinen específicamente cómo la sustancia blanca intracerebral ascendente dentro de las vías descendentes extrapiramidales contribuye al PSS. La cápsula externa forma un segmento crítico de sustancia blanca de la vía cortico-reticuloespinal; Contiene fibras cortico-tegmentales que transmiten señales corticales a la formación reticular del tronco encefálico, contribuyendo así al control inhibitorio supraespinal de los circuitos del reflejo^{espinal 12,13}. En consonancia con este papel anatómico, múltiples estudios de mapeo de lesiones basados en vóxeles y síntomas han demostrado que el daño en la cápsula externa está asociado con espasticidad en las extremidades superiores e inferiores tras un^ictus 12,13,14. Estas observaciones anatómicas y clínicas apoyan la selección de la cápsula externa como la región principal de interés (ROI). Hasta la fecha, no se ha demostrado evidencia in vivo si el MSSA preserva la integridad microestructural de la cápsula externa o si tales alteraciones están asociadas con cambios en la excitabilidad del reflejo espinal. Las evaluaciones clínicas basadas en evaluaciones conductuales, resonancia magnética convencional (IRM) y pruebas electrofisiológicas solo permiten análisis correlacionales y pueden estar influenciadas por la heterogeneidad del paciente, la duración de la enfermedad y otros factores clínicos de confusión. En cambio, los modelos estandarizados de PSS en ratas permiten un control riguroso de variables experimentales y protocolos de intervención uniformes, proporcionando así una plataforma complementaria para la investigación mecanicista.

Centrado en la microestructura de la sustancia blanca cerebral y la función neurofisiológica, este estudio integró enfoques multimodales, incluyendo la imagen ponderada en T2 (T2WI), la imagen por tensor de difusión (DTI), el registro electrofisiológico del reflejo H, la tinción dirigida con Luxol Fast Blue (LFB) de la cápsula externa y evaluaciones conductuales. Al establecer un marco integrado de correlación estructura-función-conducta, este estudio buscó investigar las relaciones entre el infarto cerebral, la microestructura de la cápsula externa, la excitabilidad del reflejo espinal y la espasticidad tras el tratamiento con MSSA en un modelo de rata de PSS. Los hallazgos tienen como objetivo proporcionar evidencia preclínica que respalde la asociación entre la integridad preservada de la cápsula externa y la reducción de la hiperexcitabilidad del reflejo espinal tras el MSSA, al tiempo que proporcionan una base teórica para la aplicación traslacional del MSSA en la rehabilitación del PSS.

Protocolo

Cuarenta ratas adultas machos Sprague–Dawley (SD) libres de patógenos específicos (SPF), que pesan entre 240 y 280 g, fueron adquiridos a Beijing Vital River Laboratory Animal Technology [Licencia nº: SCXK (Jing) 2021-0011]. Todas las ratas se alojaban en el Centro de Animales de Laboratorio de la Universidad de Medicina China de Pekín bajo condiciones controladas, con una temperatura ambiente de 23°C ± 1°C, humedad relativa del 50% ± 5%, y un ciclo de 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad, con libre acceso a comida y agua. Las ratas se aclimataron durante 5 días, durante los cuales se realizó simultáneamente entrenamiento de aclimatación en cinta de correr. Los animales se someten a la aclimatación en cinta una vez al día a una velocidad de 10 m/min durante 15 minutos por sesión sin estimulación eléctrica para reducir el estrés de manipulación.

Según nuestro estudio anterior, la tasa de éxito de la inducción de PSS mediante el método de oclusión de la arteria cerebral media (MCAO) es aproximadamente del 60^%. Utilizando una tabla de números aleatorios, 9 ratas se seleccionaron aleatoriamente de antemano como el grupo operado por simulación; las 31 ratas restantes se usaron para el establecimiento de modelos. Tras un modelado exitoso, estas ratas se dividieron aleatoriamente en el grupo modelo y el grupo MSSA. En total, se incluyeron nueve ratas en cada grupo. Este experimento se llevó a cabo conforme a los principios 3R del bienestar de animales de laboratorio y fue aprobado por el Comité de Ética Animal de la Universidad de Medicina China de Pekín (BUCM 20250915-008).

Establecimiento de modelos

El modelo MCAO se estableció en ratas utilizando una técnica modificada de filamento intraluminal. Las ratas fueron anestesiadas con isoflurano al 3% para inducción, y la anestesia se mantuvo con un 1,5% de isoflurano administrado en oxígeno a un caudal constante de 1 L/min durante todo el procedimiento quirúrgico. Se realizó una incisión cervical en la línea media, seguida de una disección roma para exponer la arteria carótida común derecha (ACC), la arteria carótida externa (ECA) y la arteria carótida interna (ICA). Se introdujo una sutura de monofilamento de nailon (diámetro, 0,36 ± 0,02 mm) en la ACI a través de la ECA y avanzó aproximadamente 18–20 mm hasta el origen de la arteria cerebral media (MCA) para lograr la oclusión arterial. Los vasos estaban ligados y la incisión cerrada. Después, las ratas fueron colocadas en una almohadilla térmica hasta la recuperación de la anestesia. Las ratas del grupo operado simulado fueron sometidas a una exposición quirúrgica idéntica a la CCA, ICA y ECA sin la inserción del filamento intraluminal.

Tras la cirugía, todas las ratas MCAO recibieron atención postoperatoria estandarizada. Los animales se mantuvieron en una almohadilla térmica a 37°C durante las primeras 12 horas para evitar la hipotermia. Se limpiaron incisiones quirúrgicas diariamente durante tres días consecutivos, se administró ampicilina (100 mg/kg) mediante inyección intraperitoneal para la profilaxis de infecciones y se administró alimentos ablandados para mantener una nutrición adecuada. La actividad general, la ingesta de alimentos, el estado de la herida y la función motora de las extremidades se monitorizaron diariamente desde los días postoperatorios 1 hasta 10.

Los déficits neurológicos fueron evaluados por investigadores cegados a la asignación de grupos utilizando la puntuación de déficit neurológico Zea Longa, y el tono muscular se evaluó mediante la Escala de Ashworth Modificada (MAS). Las evaluaciones se realizaron 1 día antes de la cirugía (día −1), el día de la cirugía antes de la MCAO (día 0) y en los días postoperatorios 1, 3, 5, 7 y 10. Se consideró que las ratas con puntuaciones de Zea Longa y MAS ≥1 en el tercer día postoperatorio habían establecido un modelo PSS exitoso.

Tratamiento MSSA

Las intervenciones comenzaron en el tercer día postoperatorio. El lugar de estimulación de la acupuntura del cuero cabelludo fue la línea ipsilesional de la EM 6 (línea oblicua parietotemporal anterior). De acuerdo con la Norma Nacional para la Manipulación Estandarizada de la Acupuntura del Cuero Cabelludo (GB/T 21709.2-2021), la línea MS 6 se extiende desde GV 21 (Qianding) hasta GB 6 (Xuanli).

Se insertaron agujas estériles desechables de acupuntura (0,25 × 13 mm) bajo la galea aponeurótica en GV 21 a un ángulo oblicuo de aproximadamente 15° respecto a la superficie del cuero cabelludo y avanzaron hacia la GB 6 a lo largo de la línea oblicua parietotemporal anterior hasta una profundidad de aproximadamente 10 mm. Se aplicó una manipulación rápida de giro (200 revoluciones/min) de forma continua durante 1 minuto. Tras 15 minutos de retención de aguja, se repitió la misma manipulación de giro una vez, resultando en un tiempo total de retención de 30 minutos. Durante todo el periodo de retención de agujas, las ratas realizaron simultáneamente ejercicio en cinta a una velocidad constante de 10 m/min.

Las ratas de los grupos de operación simulada y modelo no recibieron acupuntura ni ejercicio en cinta de correr. Para controlar el manejo inespecífico y el estrés de sujeción, fueron manipulados y sujetos suavemente en portacargas no compresivas durante 30 minutos al día, igualando la duración total diaria de la intervención del grupo MSSA.

Evaluaciones de conducta

Puntuación Zea Longa para déficits neurológicos:

Los déficits neurológicos en ratas se evaluaron utilizando el sistema de puntuación Zea^{Longa 16}. Se aplicaron los siguientes criterios: una puntuación de 0 indicó que no había deterioro neurológico y que se movía sin restricciones normal; una puntuación de 1 indicaba extensión incompleta de la extremidad anterior o posterior contralateral al lado afectado; una puntuación de 2 indicaba que giraba hacia el lado contralateral durante la locomoción; una puntuación de 3 indicaba caer hacia el lado contralateral mientras caminaban; y una puntuación de 4 indicó pérdida de conciencia con ausencia de deambulación espontánea.

MAS para el tono muscular:

El tono muscular se evaluó utilizando el MAS¹⁷. Los criterios se definieron de la siguiente manera: grado 0, sin aumento del tono muscular; grado 1, ligero aumento del tono muscular, con un bloqueo transitorio o resistencia mínima al final de la flexión y extensión pasivas; grado 1+, aumento marcado del tono muscular, con un bloqueo transitorio en el rango medio del movimiento y resistencia persistente durante la segunda mitad del movimiento; grado 2, aumento pronunciado del tono muscular, con resistencia evidente en la mayor parte del rango de movimiento, aunque la extremidad seguía siendo fácilmente móvil; grado 3, aumento sustancial del tono muscular que dificultaba la flexión y extensión pasiva; y grado 4, movimiento pasivo limitado debido a la rigidez de las articulaciones. A Grade 1+ se le asignó una puntuación de 2 puntos, lo que dio una puntuación máxima MAS de 5 puntos en este estudio¹⁰.

Neuroimagen T2WI para la cuantificación del volumen del infarto cerebral

Todas las exploraciones T2WI se adquirieron utilizando un escáner de resonancia magnética PharmaScan operado con el software ParaVision 360 (versión 3.5). Se aplicó a ratas MCAO una secuencia de pulsos de adquisición turbo rápida ponderada en T2 con mejora de relajación (T2_TurboRARE, también denominada RARE/eco rápido de espín [FSE]) a ratas MCAO para cuantificar el volumen del infarto cerebral. Los parámetros de imagen se configuraron de la siguiente manera: tiempo de repetición (TR) = 3000,0 ms, tiempo de eco (TE) = 33,0 ms, campo de visión (FOV) = 35,00 × 35,00^{mm 2}, tamaño de la matriz = 250 × 250, grosor de corte = 0,80 mm, número de cortes = 35, número de excitaciones (NEX) = 3,0 y ángulo de giro (FA) = 180,0°. Las regiones del infarto cerebral fueron delimitadas manualmente por corte en el software ITK-SNAP (versión 4.4.0) por un solo investigador cegado ante la asignación en grupo, utilizando cambios en la intensidad de la señal y características morfológicas compatibles con el infarto isquémico. El volumen del infarto cerebral se calculaba automáticamente por el software.

DTI Neuroimaging para la evaluación de la integridad microestructural de la sustancia blanca

Los datos de la resonancia magnética se obtuvieron utilizando un escáner de resonancia magnética PharmaScan de 7,0 T. La anestesia se indujo con isoflurano al 3% administrado en aire comprimido (0,4–0,6 L/min) y se mantuvo con isoflurano al 1% durante toda la adquisición del DTI. La temperatura corporal central se mantuvo mediante un baño maria controlado termostáticamente durante todo el procedimiento de imagen.

Durante la resonancia magnética, se aplicó primero una secuencia de localización en tres planos para posicionar el cerebro de rata dentro del imán. DTI se realizó utilizando una secuencia axial de imagen ecoplanar de eco de espín de un solo disparo con los siguientes parámetros: TR/TE = 3000/27 ms, matriz = 90 × 75, FOV = 20 × 15^{mm 2}, grosor de corte = 0,7 mm, 30 direcciones de gradiente de difusión y valores b de 0 y 1000 s/^{mm 2}. Para el análisis DTI, se dibujaron regiones de interés en la cápsula externa en cortes cerebrales 1,3 mm posteriores al bregma. Se reconstruyeron mapas paramétricos de anisotropía fraccionaria (FA), difusividad media (DM), difusividad axial (AD) y difusividad radial (RD) utilizando el software ParaVision 360. Los datos se expresan como la proporción del hemisferio afectado respecto al hemisferio sano contralateral.

Tinción LFB para evaluación de lesión de mielina y remielinización

Se realizó tinción con LFB para evaluar el daño estructural a axones mielinizados en la cápsula externa. La lesión de mielina, caracterizada por rarefacción y vacuolación de mielina, se cuantificó midiendo la densidad óptica integrada (IOD) de fibras mielinizadas teñidas con LFB dentro del ROI en la cápsula externa utilizando el software ImageJ (versión 6.0; umbral en escala de grises, 35–225). Según el atlas estereotáxico cerebral^{de rata 18}, se analizaron tres secciones coronales para cada animal en bregma +1,0 mm, −1,3 mm y −1,6 mm, correspondientes a las porciones anterior, media y media-posterior de la cápsula externa. La DIO media en las tres secciones se calculó para representar a cada animal (n = 4 por grupo). Los valores de la IOD ipsilateral se normalizaron al lado contralateral y se expresaron como un^{porcentaje 19}.

Registros electrofisiológicos para la evaluación de la excitabilidad del reflejo espinal

El reflejo H monosináptico espinal se registró mediante un sistema experimental de función biológica. Las ratas fueron ligeramente anestesiadas con α-cloralosa (50 mg/kg, intraperitoneal) para preservar la excitabilidad del reflejo espinal durante los registros electrofisiológicos. El nervio ciático izquierdo fue expuesto mediante disección contusiva y colocado sobre electrodos bipolares para estimulación eléctrica. Se aplicó una solución vitamínica aceitosa de forma intermitente al nervio expuesto para mantener la hidratación de los tejidos y la viabilidad neural. Se insertó un par de electrodos de grabación de acero inoxidable en los músculos interóseos de la pata trasera izquierda y se colocó un electrodo de tierra en la cola. El reflejo H se evocó mediante un estimulador de pulso monopolar-bipolar con una duración de pulso de 100 μs. El umbral del reflejo H y el umbral motor (MT) se determinaron mediante estimulación eléctrica incremental, aumentando la corriente en pasos de 0,05 mA hasta una intensidad máxima de 3,0 mA para evitar una lesión irreversible de los nervios periféricos.

Utilizando la misma intensidad de estimulación que provocó el reflejo H máximo (H_máx), se administraron estímulos pulsativos de frecuencias variables (0,3, 5 y 10 Hz) para obtener amplitudes del reflejo H en diferentes frecuencias de estimulación. Se aplicó estimulación repetida de pulsos a 0,3 Hz para verificar que la amplitud de la onda M se mantenía dentro del 95% de su valor inicial; de lo contrario, el conjunto de datos se descartaba. La depresión dependiente de la frecuencia (FDD) del reflejo H se calculó como el porcentaje de la relación de amplitud H/M-onda (relación H/M) a 5 Hz y 10 Hz respecto a 0,3 Hz, siendo la relación H/M a 0,3 Hz la referencia^{base 10}.

Análisis de datos

Los análisis estadísticos se realizaron utilizando el software SPSS (versión 20.0). Los datos continuos se presentan como la media ± desviación estándar (DS). La normalidad de los datos se evaluó utilizando la prueba de Shapiro–Wilk. Se utilizó el análisis unidireccional de la varianza (ANOVA) para comparar los resultados convencionales de imagen y otras variables cuantitativas entre grupos. Cuando se cumplió la homogeneidad de la varianza, se realizaron pruebas post hoc de Bonferroni; de lo contrario, se aplicó la prueba T3 de Dunnett. Los datos conductuales se analizaron utilizando ANOVA bidireccional, con el grupo experimental y el punto de tiempo postoperatorio como factores fijos. El análisis de correlación de Spearman se utilizó para evaluar las asociaciones entre variables del estudio. Se consideró estadísticamente significativo un valor de p < 0,05.

Resultados

MSSA mejora los déficits funcionales neurológicos

La ANOVA de medidas repetidas bidireccionales reveló efectos principales significativos del tiempo (F[2,613, 62,71] = 315,3, p < 0,001) y del grupo (F[2, 24] = 142,9, p < 0,001), así como una interacción significativa de grupo en el tiempo × (F[12, 144] = 99,94, p < 0,001) para las puntuaciones neurológicas de Zea Longa. Un día antes de la cirugía, todas las ratas de los grupos de operación simulada, modelo y MSSA tenían una puntuación Zea Longa de 0, lo que indica una función neurológica basal intacta sin déficits neurológicos. A partir del primer día postoperatorio, las puntuaciones de Zea Longa aumentaron gradualmente tanto en el grupo modelo como en el MSSA. No se observaron diferencias significativas entre estos grupos desde el día 1 hasta el día 5 postoperatorio (p > 0,05). Con la intervención continuada, las puntuaciones de Zea Longa en el grupo MSSA fueron significativamente más bajas que en el grupo modelo en los días 7 y 10 postoperatorios (p < 0,001), lo que indica una mejora en la función neurológica (Figura 1A).

Figura 1. La acupuntura en movimiento mejora los déficits neurológicos y reduce el tono muscular en ratas con espasticidad tras un ictus. (A) Puntuaciones de déficit neurológico de Zea Longa medidas antes de la oclusión de la arteria cerebral media (MCAO; día −1), inmediatamente antes de MCAO (día 0) y en los días postoperatorios 1, 3, 5, 7 y 10. (B) Puntuaciones modificadas de la Escala de Ashworth medidas en los puntos de tiempo correspondientes. La línea vertical discontinua indica MCAO en el día 0. Los datos se presentan como la media ± desviación estándar (DS). Las barras de error representan SD. ***p < 0,001 para las comparaciones indicadas entre corchetes. Por favor, haz clic aquí para ver una versión ampliada de esta figura.

MSSA reduce el volumen del infarto cerebral

Las ratas operadas simuladamente mostraron hallazgos normales de T2WI, con intensidad homogénea de señales parénquimatosas en todo el cerebro. No se observaron hiperintensidad patológica, infarto cerebral, anomalías morfológicas ni dilatación ventricular (Figura 2A). En contraste, el grupo modelo mostró una hiperintensidad T2 prominente en el hemisferio cerebral ipsilateral, correspondiente a la región del infarto isquémico, junto con evidente agrandamiento ventricular (Figura 2A). El análisis morfométrico cuantitativo demostró que el volumen del infarto cerebral se redujo significativamente en el grupo MSSA en comparación con el grupo modelo (p < 0,001; Figura 2B). La intervención MSSA se ilustra en la Figura 2C.

Figura 2. La acupuntura de movimiento en el cuero cabelludo reduce el volumen de infarto cerebral en ratas con espasticidad tras un ictus. (A) Imágenes cerebrales representativas con imagen ponderada T2 (T2WI) de los grupos de acupuntura simulada, modelo y de acupuntura de movimiento (MSSA) en 1,00, 0,20, −0,92 y −1,88 mm respecto al bregma. (B) Cuantificación del volumen del infarto cerebral a partir de T2WI. Los símbolos individuales representan animales individuales. (C) Fotografía de la intervención MSSA realizada simultáneamente con el ejercicio en cinta de correr. Los datos se presentan como la media ± SD. Las barras de error representan SD. ***p < 0,001 frente al grupo de modelos. Por favor, haz clic aquí para ver una versión ampliada de esta figura.

MSSA atenúa la espasticidad muscular tras un ictus

Para las puntuaciones MAS, la ANOVA de medidas repetidas bidireccionales reveló efectos principales significativos del tiempo (F[2,158, 51,79] = 183,7, p < 0,001) y del grupo (F[2, 24] = 57,68, p < 0,001), junto con una interacción significativa en el tiempo × grupo (F[10, 120] = 58,70, p < 0,001). Todas las ratas mostraron una puntuación MAS de 0 un día antes de la cirugía y el primer día postoperatorio, reflejando un tono muscular basal normal sin espasticidad. Desde el tercer día postoperatorio, las puntuaciones MAS aumentaron progresivamente en los grupos modelo y MSSA, lo que indica el desarrollo de espasticidad de la extremidad tras un ictus, sin observar diferencias significativas entre ambos grupos en este momento. Desde el día 5 hasta el día 10 postoperatorio, las puntuaciones MAS en el grupo MSSA fueron significativamente más bajas que en el grupo modelo (p < 0,01 a p < 0,001), lo que indica que MSSA alivió el PSS (Figura 1B).

MSSA preserva la integridad microestructural de la sustancia blanca en la cápsula externa

Los mapas representativos de parámetros DTI se muestran en la Figura 3A. En el día 10 postoperatorio, en comparación con el grupo simulado, el grupo modelo mostró una reducción notable en la proporción de anisotropía fraccionada (rFA) dentro de la cápsula externa (p < 0,001; Figura 3B), acompañados de aumentos significativos en las proporciones de difusividad media (rMD) y difusividad radial (rRD) (ambas p < 0,001; Figura 3C,D). En comparación con el grupo modelo, MSSA aumentó significativamente la rFA (p < 0,001; Figura 3B) y una disminución significativa de la rMD y la rRD (ambas p < 0,01; Figura 3C,D). No se observó una diferencia significativa en la proporción de difusividad axial (rAD) entre los grupos (p > 0,05; Figura 3E). La posición de las ratas durante la adquisición del DTI y la ubicación anatómica del ROI de la cápsula externa se muestran en la Figura 3F, G.

Figura 3. La acupuntura del cuero cabelludo de estilo movimiento altera los parámetros de imagen del tensor de difusión en ratas con espasticidad tras un ictus. (A) Mapas representativos de anisotropía fraccional (FA), difusividad media (DM), difusividad axial (DA) y difusividad radial (RD) de los grupos de acupuntura simulada, modelo y de tipo de movimiento (MSSA) en −1,30 mm respecto al bregma. (B–E) Cuantificación de las proporciones de FA ipsilesional a contralateral (rFA), DM (rMD), RD (rRD) y AD (rAD), respectivamente. Los símbolos individuales representan animales individuales. (F) Fotografía de una rata posicionada para imagen tensorial de difusión (DTI). (G) Imagen esquemática y correspondiente de resonancia magnética que muestra las regiones de la cápsula externa contralateral e ipsilesional de interés. Los datos se presentan como la media ± SD. Las barras de error representan SD. #p < 0,05 y ###p < 0,001 frente al grupo operado simuladamente; **p < 0,01 y ***p < 0,001 frente al grupo de modelos. Por favor, haz clic aquí para ver una versión ampliada de esta figura.

MSSA mejora la integridad de la mielina en la cápsula externa

Se realizó una tinción con LFB para evaluar la integridad de la mielina en la cápsula externa. Histológicamente, las fibras mielinizadas mostraron morfología intacta y disposición regular en el grupo operado por simulación, mientras que se observó pérdida evidente de mielina y desorganización estructural en la cápsula externa de ratas modelo MCAO (Figura 4A). El análisis cuantitativo mostró que el IOD relativo de la tinción por LFB fue significativamente menor en el grupo modelo que en el grupo operado simulado (p < 0,001; Figura 4B). En comparación con el grupo modelo, el grupo MSSA mostró valores relativos de IOD significativamente más altos (p < 0,001; Figura 4B), indicando una mejora de la integridad de la mielina en la cápsula externa tras el tratamiento con MSSA.

Figura 4. La acupuntura de movimiento en el cuero cabelludo atenúa la lesión de la mielina en cápsulas externas en ratas con espasticidad tras un ictus. (A) Secciones cerebrales panorámicas representativas tintidas con Luxol Fast Blue (LFB) y vistas ampliadas de las regiones de la cápsula externa contralateral e ipsilesional de interés (ROIs) de los grupos de acupuntura cerebral simulada, modelo y de tipo movimiento (MSSA). Las cajas azul y roja en las imágenes panorámicas indican respectivamente los ROI contralaterales e ipsilesionales. Barras de escala en las imágenes ampliadas = 50 μm. (B) Cuantificación de la densidad óptica relativa integrada (IOD) de la tinción con LFB en la cápsula externa ipsilesional normalizada al lado contralateral. Los símbolos individuales representan animales individuales; n = 4 por grupo. Los datos se presentan como la media ± SD. Las barras de error representan SD. ###p < 0,001 frente al grupo operado simuladamente; p < 0,001 frente al grupo de modelos; △p < 0,05 para la comparación indicada por el corche. Por favor, haz clic aquí para ver una versión ampliada de esta figura.

MSSA inhibe la hiperexcitabilidad del reflejo H espinal

Las grabaciones representativas de ondas M y H se muestran en la Figura 5A, y el montaje de registro electrofisiológico se muestra en la Figura 5B. En el décimo día postoperatorio, la evaluación electrofisiológica demostró que, en comparación con el grupo simulado, el grupo modelo mostró un umbral motor significativamente aumentado (MT; p < 0,001) y la relación máxima de onda H/amplitud máxima de onda M (H_máx/_{M máx}) (p < 0,001), un aumento modesto en la latencia de la onda M (p < 0,05) y una correspondiente disminución de la latencia del reflejo H (p < 0,05; Figura 5C–H). En comparación con el grupo modelo, el grupo MSSA mostró una MT significativamente menor (p < 0,001) y una relación H_máx/_{M máximo} (p < 0,001), junto con un umbral de reflejo H significativamente más alto (p < 0,001; Figura 5C–H). No se observó una diferencia significativa en la intensidad de estimulación necesaria para provocar H_máximo expresado como múltiplo de MT entre el modelo y los grupos MSSA (Figura 5H). Además, cuando se normaliza a la relación H/M a 0,3 Hz, la FDD del reflejo H disminuyó progresivamente con el aumento de la frecuencia de estimulación en los tres grupos (Figura 5I). Tanto a 5 Hz como a 10 Hz, la relación H/M fue significativamente menor en el grupo MSSA que en el grupo modelo (ambos p < 0,001), lo que indica una restauración parcial de la FDD del reflejo H hacia el patrón fisiológico (Figura 5J; Tabla 1).

Figura 5. La acupuntura del cuero cabelludo al estilo de movimiento reduce la hiperexcitabilidad del reflejo espinal en ratas con espasticidad tras un ictus. (A) Trazas representativas superpuestas de ondas M y ondas H de los grupos de acupuntura cerebral simulada, modelo y de estilo de movimiento (MSSA). (B) Fotografía del sistema de registro electrofisiológico que muestra el sitio de estimulación del nervio ciático, los electrodos de registro y el electrodo de tierra. (C–H) Cuantificación del umbral motor (MT), la relación máxima de amplitud de onda H/máxima de onda M (H_máx/_{M máx}), la latencia de la onda H, el umbral del reflejo H, la latencia de la onda M y la intensidad de la estimulación que provoca H_máx , expresada como múltiplo de la MT, respectivamente. Los símbolos individuales representan animales individuales. (I) Trazas representativas del reflejo H obtenidas a frecuencias de estimulación de 0,3 Hz, 5 Hz y 10 Hz en cada grupo. (J) Depresión dependiente de la frecuencia del reflejo H, expresada como la relación H/M a 5 Hz y 10 Hz normalizada a la relación H/M a 0,3 Hz. Las regiones sombreadas representan la DS de los valores medios. Los datos se presentan como la media ± SD. Las barras de error representan SD. #p < 0,05 y ###p < 0,001 frente al grupo operado simulado; p < 0,001 frente al grupo de modelos. Por favor, haz clic aquí para ver una versión ampliada de esta figura.

Grupo	MT (mA)	Mmax (mV)	Hmax (mV)	Latencia M (ms)	Latencia H (ms)	Umbral del reflejo H (×MT)	Hmax (×MT)	Relación H/M (0,3 Hz)	Relación H/M (5 Hz)	Relación H/M (10 Hz)
Sham (n = 9)	0,808 ± 0,218	11.119 ± 7.802	2,804 ± 2,896	4,567 ± 0,731	11.311 ± 0.849	1.296 ± 0.251	1.554 ± 0.264	0,452 ± 0,264	0,304 ± 0,155	0,176 ± 0,137
Modelo (n = 9)	1.855 ± 0.203###	3.282 ± 2.040##	2.307 ± 1.296	5,333 ± 0,893	10.456 ± 1.056	0,729 ± 0,299	1.517 ± 0.303	0,826 ± 0,120##	0,741 ± 0,129###	0,684 ± 0,131###
MSSA (n = 9)	0,663 ± 0,236	5.908 ± 2.751	1,497 ± 0,688	4.744 ± 0.590	10.978 ± 0.602	1.939 ± 0.819	1.832 ± 1.557	0,556 ± 0,238*	0,390 ± 0,193**	0,142 ± 0,134

Tabla 1: Parámetros electrofisiológicos del reflejo H en ratas con espasticidad post-ictus. Mediciones electrofisiológicas obtenidas de los grupos de acupuntura simulada, modelo y acupuntura de movimiento (MSSA), incluyendo umbral motor (MT), amplitud máxima de onda M (M_máx), amplitud máxima de onda H (_{H máx}), latencia de onda M, latencia de onda H, umbral del reflejo H expresado como múltiplo de MT (×MT), intensidad de estimulación que provoca_{H máx} . expresado como múltiplo de MT (×MT) y relaciones H/M medidas a frecuencias de estimulación de 0,3, 5 y 10 Hz. Los datos se presentan como media ± SD. ##p < 0,01 y ###p < 0,001 frente al grupo operado por simulación; *p < 0,05, **p < 0,01 y ***p < 0,001 frente al grupo de modelos.

Correlaciones entre el volumen de infartos de T2WI, métricas DTI de la cápsula externa, índices electrofisiológicos y puntuaciones MAS

Primero se examinaron las correlaciones entre el volumen del infarto cerebral medido por T2WI y métricas DTI de la cápsula externa. En el análisis agrupado, el volumen de infartos estuvo fuertemente correlacionado negativamente con la rFA (ρ = −0,902, p < 0,001) y positivamente correlacionado con la rMD y la rRD (ρ = 0,511, p = 0,03; ρ = 0,661, p = 0,003; Figura 6A–D). No se observaron correlaciones significativas entre el volumen del infarto y los parámetros DTI en los análisis de subgrupos. A continuación, se evaluaron las relaciones entre las métricas DTI de la cápsula externa, los índices electrofisiológicos de excitabilidad del reflejo espinal y el tono muscular evaluado por el MAS. En el análisis agrupado, una menor rFA se asoció con una mayor relación H_max/M_max (ρ = −0,895, p < 0,001), mientras que una rRD más alta se asoció con un umbral más bajo del reflejo H (ρ = −0,504, p = 0,03; Figura 6E, F). Además_{, se} asociaron mayores proporciones_máx/M máximas y umbrales más bajos del reflejo H con puntuaciones MAS más altas (ρ = 0,760, p < 0,001; ρ = −0,479, p = 0,01; Figura 6G,H). Los análisis de subgrupos demostraron una correlación negativa significativa entre el umbral del reflejo H y la puntuación MAS solo en el grupo modelo (ρ = −0,736, p = 0,03), mientras que no se observaron correlaciones significativas en los grupos operados por simulación o MSSA.

Figura 6. Asociaciones entre el volumen del infarto cerebral, parámetros de imagen del tensor de difusión, índices del reflejo H y tono muscular en ratas con espasticidad post-ictus. (A–D) Asociaciones del volumen del infarto cerebral ponderado por T2 (T2WI) con las proporciones ipsilesional-contralateral de anisotropía fraccionada (rFA), difusividad media (rMD), difusividad radial (rRD) y difusividad axial (rAD), respectivamente. (E) Asociación entre rFA y la relación máxima de amplitud de onda H/máxima de onda M (H_máx/M_máx). (F) Asociación entre el umbral de rRD y el reflejo H. (G) Asociación entre H_máx/_{M máximo} y la puntuación de la Escala de Ashworth Modificada (MAS). (H) Asociación entre el umbral del reflejo H y la puntuación MAS. Los círculos, cuadrados y triángulos representan, respectivamente, los grupos de acupuntura de cuero cabelludo de tipo simulado, modelo y de tipo movimiento (MSSA). Las líneas discontinuas corresponden a la curva de ajuste de regresión lineal generada a partir de los datos medidos. Los coeficientes de correlación de Spearman (ρ) y los valores p correspondientes se muestran en cada panel. Por favor, haz clic aquí para ver una versión ampliada de esta figura.

Disponibilidad de datos:

Todos los datos generados o analizados durante este estudio se incluyen en este artículo publicado y en el Material Suplementario. Los conjuntos de datos en bruto que respaldan los hallazgos de este estudio se proporcionan en la Tabla Suplementaria 1.

Tabla suplementaria 1. Conjuntos de datos en bruto que respaldan los análisis cuantitativos presentados en este estudio. El cuaderno contiene los datos experimentales en bruto utilizados para las evaluaciones conductuales, el análisis de volumen de infartos ponderado por T2 (T2WI), las métricas de imagen por tensor de difusión (DTI), la cuantificación de tinción con Luxol Fast Blue (LFB) y las mediciones electrofisiológicas del reflejo H para todos los grupos experimentales. Por favor, haga clic aquí para descargar este archivo.

Discusión

Desde la perspectiva de la medicina tradicional china, el PSS entra en la categoría de trastornos músculo-tendones, con una patogénesis central descrita como la lesión cerebral como causa raíz y la espasticidad de las extremidades como manifestación^{superficial 20}. Por tanto, las estrategias terapéuticas deben abordar tanto la lesión cerebral primaria como las manifestaciones periféricas^{secundarias 21}. La razón subyacente al MSSA enfatiza la regulación holística desde el cerebro isquémico hasta las extremidades espásticas, con los objetivos terapéuticos de promover la circulación sanguínea, desbloquear los meridianos, relajar tendones y aliviar la espasticidad. La técnica de punción es fundamental para la eficacia de la acupuntura, y seleccionar una técnica adecuada adaptada al patrón de la enfermedad es fundamental para lograr resultados clínicos favorables. La MSSA es una modalidad característica de acupuntura para el cuero cabelludo que combina acupuntura con movimiento activo o pasivo de las extremidades durante la retención^{de agujas 3}. Una revisión sistemática y metaanálisis reciente demostró que el MSSA produce efectos superiores en la reducción de la espasticidad muscular, la mejora de la función motora y la mejora de las actividades diarias en pacientes con PSS en comparación con acupuntura convencional del cuero cabelludo o la rehabilitación del ejercicio^{por sí sola.} Cabe destacar que la administración simultánea de acupuntura del cuero cabelludo y rehabilitación por ejercicio, tal como se implementa en la MSSA, produce mejores resultados que la intervención asincrónica, como respalda la evidencia clínica de calidad^{moderada 9}. La EM 6, según la definición GB/T 21709.2-2021, es una línea de acupuntura oblicua parietotemporal anterior del cuero cabelludo seleccionada por su relevancia anatómica y su utilidad clínica^{establecida 9}. Está sobre las cortezas motoras primaria y secundaria, que son las principales fuentes de proyecciones corticofugales descendentes que moldean la salida reticular del tronco encefálico y modulan la excitabilidad del reflejo espinal. Clínicamente, la EM 6 es la línea de acupuntura del cuero cabelludo más utilizada para el PSS, como confirma el metaanálisis mencionado, lo que la convierte en un objetivo óptimo para modular las vías motoras en el presente estudio. Estos hallazgos destacan las características procedimentales distintivas y las posibles ventajas clínicas de la MSSA en el manejo del PSS. Los estudios preclínicos han demostrado además que el MSSA mejora la perfusión cerebral en la penumbra isquémica y modula la excitabilidad de las motoneuronas del cuerno anterior espinal, proporcionando un apoyo mecanicista preliminar para su aplicación^{terapéutica 10,11}.

En la teoría neurológica moderna, la patogénesis de la PSS se atribuye principalmente a tres procesos patológicos interrelacionados: inhibición descendente supraespinal deteriorada, procesamiento anormal de la señal intraespinal y alteración de las propiedades intrínsecas del músculo. Entre ellas, los mecanismos por los cuales las vías descendentes supraespinales regulan la excitabilidad del reflejo espinal siguen siendo incompletamente comprendidos². El tracto reticuloespinal (TSR) desempeña un papel esencial en el mantenimiento del equilibrio del arco del reflejo de estiramiento. La TSR lateral recibe estímulos excitatorios de la corteza premotora contralateral y del área motora suplementaria a través de la vía cortico-reticular, desciende dentro del funículo dorsolateral de la médula espinal y ejerce un control inhibitorio sobre la actividad del reflejo de estiramiento espinal. En cambio, la TSR medial no está regulada por la corteza contralateral, desciende dentro del funículo ventromedial y facilita la actividad refleja de estiramiento. El ictus cortical altera la vía cortico-reticular, reduce la entrada excitatoria a la formación reticular medular y da lugar a la predominancia de la actividad medial. Este desequilibrio contribuye a la hiperexcitabilidad del reflejo de estiramiento espinal y a la manifestación clínica de la espasticidad de las extremidades³. Los estudios clínicos de neuroimagen han vinculado la PSS con lesiones que afectan a la corteza premotora, el putamen, la extremidad posterior de la cápsula interna y la cápsula externa^12,14,22. Entre ellas, la cápsula externa representa un conducto clave de sustancia blanca dentro de la vía cortico-reticulospinal, un tracto extrapiramidal principal que integra entradas corticales, sinapsis en los núcleos reticulares del tronco encefálico y proyecta hacia la médula espinal para ejercer un control inhibitorio descendente sobre las α-motoneuronas e interneuronas²³. Este marco anatómico está respaldado por estudios de trazado neural y DTI, que identifican de forma constante la cápsula externa como una conexión principal entre la corteza cerebral, los ganglios basales y el tronco encefálico^23,24. Cabe destacar que la espasticidad se reconoce cada vez más como un trastorno a nivel de red que resulta de la alteración del equilibrio entre múltiples sistemas motores descendentes, incluyendo tanto las vías corticoespinales como extrapiramidales, más que de la disfunción de un solo tracto. En este contexto, la cápsula externa sirve como estructura representativa para sondear las contribuciones extrapiramidales a la PSS, ya que su implicación se ha asociado consistentemente con una actividad exagerada del reflejo espinal, mientras que las lesiones corticoespinales aisladas suelen producir debilidad sin espasticidad proporcional. En consecuencia, seleccionamos la cápsula externa como el ROI principal para investigar los cambios microestructurales de la sustancia blanca asociados con la gravedad de la espasticidad. De acuerdo con este marco, la Infección T2WI no reveló infartos cerebrales evidentes en el grupo simulado, mientras que en el grupo modelo se observaron lesiones prominentes del infarto. El tratamiento con MSSA mejoró significativamente la función neurológica, según la escala Zea Longa, lo que sugiere un efecto neuroprotector contra la lesión cerebral isquémica. El efecto de preservación de infartos de MSSA puede implicar múltiples mecanismos sinérgicos. En primer lugar, se ha demostrado que el MSSA mejora la perfusión cerebral regional en la penumbra isquémica¹⁰, creando así un microambiente más favorable para la supervivencia neuronal. Además, aunque la evidencia directa de la MSSA es actualmente limitada, los estudios mecanicistas sobre la acupuntura del cuero cabelludo han sugerido varias otras vías que también pueden contribuir, incluyendo la promoción de la angiogénesis mediante la activación de la vía de señalización MATN2/WNT3a/β-catenina²⁵ y la atenuación de la neuroinflamación post-isquémica mediante la supresión de la diferenciación Th17 mediada por RORγt y la restauración del equilibrio Th17/Treg²⁶. Estos hallazgos plantean la posibilidad de que la MSSA pueda implicar mecanismos neuroprotectores similares más allá de sus efectos hemodinámicos. Sin embargo, la contribución relativa de cada vía aún está por determinarse y merece una investigación más profunda.

La DTI permite una evaluación cuantitativa sensible de la microestructura de la sustancia blanca, con la FA reflejando la integridad de la fibra, la RD sirviendo como marcador de desmielinización y la AD reflejando la integridad^{axonal 23}. En el presente estudio, la cápsula externa fue seleccionada como ROI para evaluar alteraciones microestructurales asociadas a la vía cortico-reticulospinal en el PSS. En comparación con el grupo operado por simulación, las ratas modelo mostraron reducciones significativas en la FA relativa, junto con aumentos notables en la DM y RD relativas, indicativo de alteración de la integridad de la sustancia blanca, edema cerebral y desmielinización dentro de la cápsula externa. La tinción con LFB demostró además una pérdida evidente de mielina y desorganización de los haces de sustancia blanca, proporcionando apoyo histológico a los hallazgos DTI. En conjunto, los hallazgos de neuroimagen e histologia indican que la lesión isquémica está asociada con un marcado deterioro microestructural de la cápsula externa, que se atenuó tras el tratamiento con MSSA. El H-reflejo es una medida electrofisiológica bien establecida para evaluar la excitabilidad del pool de α-motoneuronas espinales y la regulación descendente^{supraespinal 27}. La proporción H_máx/_{M máximo} refleja la excitabilidad global de las motoneuronas espinales, mientras que el umbral del reflejo H refleja la inhibición presináptica mediada por interneuronas espinales junto con entradas descendentes supraespinales^{integradas 27}. La alteración inducida por un ictus de la vía cortico-reticulospinal debilita la regulación inhibitoria descendente, lo que resulta en una hiperexcitabilidad de las motoneuronas espinales caracterizada por un aumento de la proporción H_máx/M_máximo y un umbral reducido del reflejo^{H 27}. Nuestros experimentos preliminares exploraron los mecanismos moleculares subyacentes a los efectos antiespásticos de la MSSA, demostrando que esta terapia puede aumentar la expresión espinal de KCC2 y restaurar la función inhibitoria^{GABAérgica 10}. Basándose en estos hallazgos moleculares espinales, el presente estudio elucida aún más los mecanismos supraespinales aguas arriba responsables de los reflejos espinales exagerados al demostrar que la lesión microestructural de la cápsula externa dentro de la vía cortico-reticulospinal está asociada a un aumento notable de la excitabilidad espinal. En conjunto, estos hallazgos sugieren que la MSSA puede promover la reconstrucción de las vías inhibitorias descendentes supraespinales y revertir la hiperexcitabilidad del reflejo espinal en ratas con PSS.

Dada la naturaleza transversal de los datos actuales, todos los análisis de correlación deben interpretarse como exploratorios y generadores de hipótesis, más que como evidencia de relaciones causales. Se realizaron análisis de correlación para investigar las relaciones entre la carga del infarto, la integridad microestructural de la cápsula externa, la excitabilidad del reflejo espinal y la gravedad de la espasticidad. En todos los animales, volúmenes de infartos mayores se asociaron con una alteración microestructural derivada de DTI más grave dentro de la cápsula externa, lo que sugiere una relación entre la lesión isquémica primaria y los cambios secundarios de sustancia blanca a lo largo de la vía cortico-reticuloespinal. Cabe destacar que estas correlaciones generales parecían estar impulsadas principalmente por diferencias entre grupos más que por la variación individual dentro del grupo, ya que no se observaron correlaciones significativas dentro de ningún grupo individual. Una mayor FA relativa (rFA) se asoció con una menor relación_máxima/M_máxima , mientras que una mayor RD relativa (rRD) se asoció con un umbral más bajo del reflejo H, consistente con la idea de que la integridad preservada de la cápsula externa se asocia a una regulación inhibitoria descendente más efectiva. Además, las proporciones más altas de H_máx/M_máximo y los umbrales más bajos del reflejo H se asociaron con puntuaciones MAS más altas, lo que apoya una asociación entre alteraciones electrofisiológicas y gravedad de la espasticidad. Los análisis de subgrupos revelaron además que los patrones generales de correlación se debían predominantemente a diferencias entre grupos. Cabe destacar que se observó una correlación negativa significativa entre el umbral del reflejo H y la puntuación MAS solo en el grupo modelo, lo que sugiere que la inhibición presináptica deteriorada puede estar asociada con una mayor espasticidad bajo condiciones patológicas no tratadas.

Deben reconocerse varias limitaciones. En primer lugar, la ausencia de grupos control solo con acupuntura y solo ejercicio impide la disección de sus contribuciones independientes y sinérgicas. Futuros estudios que incorporen estos grupos de comparación ayudarían a clarificar los mecanismos subyacentes a la intervención combinada. En segundo lugar, el periodo de observación se limitó a la fase aguda (días postoperatorios 0–10), seleccionada en función de la ventana de espasticidad máxima en el modelo permanente MCAO. Si la MSSA confiere beneficios terapéuticos sostenidos más allá de la fase aguda sigue siendo desconocido, y la validación en modelos crónicos de PSS será importante para determinar su potencial traslacional a largo plazo. En tercer lugar, aunque la MAS se utiliza ampliamente para evaluar el tono muscular, es inherentemente subjetiva y semicuantitativa. Para complementar esta limitación, el reflejo H fue evaluado simultáneamente como una medida electrofisiológica objetiva de la excitabilidad del reflejo espinal. En cuarto lugar, el tamaño de la muestra era modesto debido a las exigencias técnicas asociadas a las evaluaciones multimodales, y los estudios que incluyeran un mayor número de animales mejorarían el poder estadístico y la robustez de los hallazgos. Finalmente, todos los criterios finales se evaluaron únicamente en el día 10 postoperatorio. Estudios futuros que incorporen evaluaciones longitudinales en múltiples momentos proporcionarían una comprensión más completa de la trayectoria temporal de los cambios neuroplásticos inducidos por la MSSA.

Futuros estudios podrían investigar los mecanismos de neurogénesis y remielinización tras la intervención con MSSA. Dado que la DTI no puede visualizar directamente la regeneración neuronal, enfoques complementarios como el trazado neuronal y la inmunohistoquímica pueden caracterizar aún más la plasticidad neuronal y la remielinización. Desde una perspectiva traslacional, las métricas DTI de la cápsula externa, especialmente FA y RD, pueden ayudar a estratificar a los pacientes con ictus según la gravedad de la lesión de la vía cortico-reticuloespinala e identificar aquellos con mayor probabilidad de beneficiarse del MSSA. Este enfoque impulsado por biomarcadores podría facilitar la selección de pacientes y la estratificación de tratamientos en futuros ensayos clínicos, aunque su utilidad clínica aún está por validarse en cohortes prospectivas de ictus. En conclusión, este estudio investigó los mecanismos neuronales asociados al tratamiento MSSA para el PSS utilizando un marco integrado que comprende la evaluación de infartos basada en T2WI, la evaluación DTI de la microestructura de la sustancia blanca, la electrofisiología del reflejo H y el análisis histológico de la LFB. Los hallazgos sugieren que el MSSA está asociado con una reducción del volumen del infarto cerebral, la preservación de la integridad microestructural de la cápsula externa y una mejora en la regulación inhibitoria descendente de la vía cortico-reticuloespinal. Estos cambios se acompañaron de la normalización de la excitabilidad del reflejo espinal y una reducción de la espasticidad. En conjunto, los hallazgos aportan conocimientos mecanicistas y evidencia preclínica que respalda la posible aplicación traslacional de la MSSA en el manejo del PSS.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
α-Chloralose	GoldBio	C-118-250	Anestésico para grabaciones de reflejo H
Etanol Absoluto	Beijing Tong Guang Fine Chemicals Co., Ltd.	VS104021-500 mL	Reactivo histológico
Agujas de acupuntura (0,25 × 13 mm)	Beijing Zhongyan Taihe Acupuncture Needle Co., Ltd.	NA	Agujas desechables estériles para acupuntura del cuero cabelludo
Ampicilina	Beijing Rui Da Heng Hui Technology Development Co., Ltd.	HD-3018-500g	Antibiótico para profilaxis de infección postoperatoria
Sistema de Experimentos de Función Biológica (BL420N)	Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd.	NA	Sistema de registro electrofisiológico
Software de análisis de imagen de tensor de difusión (ParaVision 360)	Bruker	NA	Adquisición de RM y reconstrucción DTI
Solución de desengrase y despeje ecológica	Servicebio	G1128-500ML	Reactivo histológico
Microtomo rotatorio completamente automático	Leica Microsystems	RM2255	Cortes de tejido
Almohadilla térmica	Suzhou Caiyang Electric Heating Technology Co., Ltd.	TT180×150-1XD	Mantenimiento de temperatura postoperatoria
ImageJ 6.0	Institutos Nacionales de Salud	NA	Análisis cuantitativo de imágenes
Isoflurano	Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.	I8000-25g	Anestésico inhalatorio
ITK-SNAP 4.4.0	Universidad de Pensilvania	NA	Segmentación de infarto cerebral
Solución de Azul Rápido de Luxol	Servicebio	G1030-100ML	Tinción de mielina
Sutura de nylon monofilamento (0,36 ± 0,02 mm)	Beijing Cinontech Co., Ltd.	NA	Inducción de MCAO
Paraformaldehído (4% en PBS)	Servicebio	TBAB0102	Fijación de tejido
Escáner de resonancia magnética PharmaScan 7.0 T	Bruker	NA	Adquisición de RM
SPSS Statistics 20.0	IBM	NA	Análisis estadístico
Ratas Sprague–Dawley (SPF, macho)	Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.	NA	Animales experimentales
Sistema de baño de agua con termostato	Shanghai Zhixin Experimental Instrument Technology Co., Ltd.	ZX-5A	Mantenimiento de temperatura durante la RM
Corredor para roedores	Clever	TreadScan	Entrenamiento de ejercicio durante la aclimatación y MSSA