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Informe de caso

Informe de un caso de un pedigrí con neuropatía motora hereditaria distal causada por una variante homocigota c.1124G>A en el gen VRK1 (Vaccinia-Related Kinase 1)

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DOI:

10.3791/72503

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14 de agosto de 2026

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1Yunnan Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine, 2The First Clinical Medical College, Yunnan University of Chinese Medicine

* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Este estudio describe un pedigrí consanguíneo chino con neuropatía motora hereditaria distal de inicio en la edad adulta (dHMN) causada por una variante homocigota c.1124G>A en el gen de la quinasa relacionada con la vacuna 1 (VRK1). Los hallazgos amplían el espectro fenotípico clínico y genético de la dHMN relacionada con VRK1 en la población china.

Resumen

Este estudio tuvo como objetivo analizar los fenotipos clínicos, las características neurofisiológicas y la patogenicidad de las variantes génicas en una familia con neuropatía motora hereditaria distal (dHMN) causada por variantes en VRK1, y proporcionar evidencia para apoyar el diagnóstico clínico y el asesoramiento genético de esta enfermedad. Presentamos una familia china consanguínea con dHMN causada por una variante homocigota c.1124G>Una variante en el VRK1 gen. Se recopilaron los datos clínicos y electrofisiológicos del probando. Se realizó secuenciación del exoma completo (WES) y validación mediante secuenciación Sanger para identificar el sitio de la variante, e interpretación de la patogenicidad de acuerdo con las guías del Colegio Estadounidense de Genética Médica y Genómica/Asociación para la Patología Molecular (ACMG/AMP). El probando era un hombre de 24 años que presentaba debilidad progresiva y atrofia en las extremidades inferiores distales de dos años de evolución, acompañadas de extremidades superiores delgadas y ausencia de alteraciones sensitivas. El examen electrofisiológico mostró una amplitud disminuida del potencial de acción muscular compuesto (CMAP) en los nervios motores de ambas extremidades superiores e inferiores, lo que indicaba un daño neurogénico periférico, mientras que la conducción nerviosa sensitiva fue normal. El análisis genético detectó una variante homocigota c.1124G>una variante (p.Trp375Ter) en el VRK1 gen. Sus padres y hermanas mayores eran portadoras heterocigotas, y el pedigrí correspondía a una herencia autosómica recesiva. Según las directrices de la ACMG, esta variante se clasificó como patógena (evidencia: PVS1, PM2, PP1). El VRK1 homocigoto c.1124G>Una variante provoca una forma de dHMN de inicio en la edad adulta, en lugar de hipoplasia pontocerebelosa tipo 1A (PCH1A), como se indica en algunas bases de datos genéticas. Este pedigrí presenta fenotipos distintivos, incluyendo extremidades superiores delgadas y amplitudes de potenciales de acción musculares compuestos (CMAP) disminuidas de forma difusa en ambas extremidades superiores e inferiores, ampliando así el espectro clínico y genético de la dHMN relacionada con VRK1 en la población china.

Introducción

La neuropatía motora hereditaria distal (dHMN) constituye un grupo genéticamente heterogéneo de trastornos hereditarios del sistema nervioso periférico, definidos patológicamente por la degeneración dependiente de la longitud de las neuronas motoras inferiores y sus axones. Clínicamente, los pacientes presentan debilidad progresiva y atrofia de los músculos distales de las extremidades, mientras que la función sensorial permanece en gran parte intacta en la mayoría de los casos1. Las manifestaciones iniciales afectan típicamente las extremidades inferiores distales, incluyendo debilidad en la flexión de los dedos del pie y atrofia de los músculos gastrocnémico y musculatura intrínseca del pie, con progresión gradual hacia los músculos interóseos de la mano y los músculos tenares/hipotenares a medida que avanza la enfermedad2. Los patrones de herencia varían entre los subtipos, con formas tanto autosómicas dominantes como autosómicas recesivas descritas. Hasta la fecha, se han relacionado más de 50 genes patógenos con la dHMN, aunque la causa genética subyacente permanece sin identificar en más de la mitad de los individuos afectados3.

Debido a la marcada heterogeneidad genética y al amplio solapamiento fenotípico con otras afecciones neuromusculares, el diagnóstico de la dHMN basado únicamente en la evaluación clínica suele ser poco confiable4. Los enfoques convencionales de diagnóstico escalonados, que parten de la fenotipificación clínica hacia la secuenciación de genes candidatos, son ineficientes y presentan una baja tasa de diagnóstico, especialmente en casos esporádicos o con fenotipos atípicos1,2. Los paneles genéticos dirigidos ofrecen una alternativa más rentable, pero están limitados por listas predefinidas de genes y podrían pasar por alto variantes patógenas raras o novedosas. La secuenciación completa del genoma ofrece la cobertura genómica más amplia, pero se ve limitada por su alto costo, tiempos prolongados de análisis y un gran número de variantes de significado incierto en entornos clínicos rutinarios5. Para el presente estudio, empleamos un marco diagnóstico integrado que combina evaluación clínica sistemática, examen neurofisiológico, secuenciación del exoma completo (WES) y análisis de segregación familiar. Las pruebas neurofisiológicas ayudan a confirmar la afectación puramente motora del nervio periférico y a delimitar la distribución de la lesión nerviosa, reduciendo así el diagnóstico diferencial. La WES permite interrogar simultáneamente todos los genes conocidos asociados a la dHMN, detectar posibles nuevas variantes patógenas y realizar posteriormente el análisis de segregación familiar, lo que ayuda a filtrar aún más las variantes incidentales benignas y fortalece la evidencia sobre la patogenicidad de las variantes candidatas, logrando un equilibrio práctico entre la tasa de diagnóstico, el costo y la interpretabilidad.

El gen de la quinasa relacionada con la vaccinia 1 (VRK1) codifica una quinasa serina/treonina que participa en vías de transducción de señales nucleares y reparación del daño en el ADN, y su función fisiológica es esencial para mantener la homeostasis y viabilidad neuronales6. Las variantes patógenas en VRK1 dan lugar a un amplio espectro clínico: hipoplasia pontocerebelosa tipo 1A (PCH1A) de inicio en la infancia, caracterizada por microcefalia, hipotonía grave y retraso profundo del desarrollo motor; neuropatía motora distal hereditaria (dHMN) de inicio en la edad adulta con afectación predominantemente distal de las extremidades; y presentaciones más raras, incluyendo paraplejia espástica hereditaria (HSP) y fenotipos similares a la esclerosis lateral amiotrófica (ALS)7,8,9. Específicamente, la variante sin sentido homocigota c.1124G>A (p.Trp375Ter) en VRK1 ha sido documentada en múltiples pedigrees independientes con dHMN que presentan un patrón de herencia autosómica recesiva consistente, lo que respalda su asociación causal establecida con dHMN10. Esta variante introduce un codón de terminación prematuro en la región codificante del extremo C-terminal de VRK1 y se predice que provoca la pérdida de la función proteica bien sea mediante la producción de una proteína truncada o la activación de la degradación mediada por ARNm sin sentido. Aunque el mecanismo patológico preciso no ha sido validado funcionalmente para esta variante específica, se hipotetiza que la actividad quinasa VRK1 alterada podría interrumpir la reparación del ADN neuronal y las cascadas de señalización intracelular, contribuyendo así a la degeneración de las neuronas motoras y al desarrollo de la dHMN.

En la práctica clínica, se debe priorizar el análisis genético de VRK1 en los siguientes escenarios: pacientes con sospecha clínica de dHMN que presenten debilidad y atrofia motoras distales dependientes de la longitud con sensibilidad conservada, especialmente aquellos con antecedentes familiares autosómicos recesivos o inicio de la enfermedad en la edad adulta; individuos de familias consanguíneas que presenten neuropatía motora distal sin causa aparente; pacientes con manifestaciones superpuestas del sistema nervioso central y periférico que no se puedan atribuir a otros trastornos genéticos conocidos; y casos de dHMN o enfermedad de Charcot-Marie-Tooth tipo 2 (CMT2) negativos para variantes patógenas comunes en genes11,12. Debe reconocerse varias limitaciones importantes de este enfoque diagnóstico. Primero, la dHMN relacionada con VRK1 comparte una superposición fenotípica considerable con otros trastornos neuromusculares, incluyendo la atrofia muscular espinal (AME), la CMT2, la EHS y la esclerosis lateral amiotrófica en estadio temprano, lo que podría llevar a una clasificación diagnóstica errónea. Segundo, la interpretación de variantes raras en VRK1 sigue siendo un desafío, ya que la mayoría carecen de validación funcional y dependen en gran medida de herramientas computacionales de predicción, lo que resulta en clasificaciones de patogenicidad incierta para un subconjunto de variantes. Tercero, al tratarse de un estudio con una sola genealogía, la generalización de nuestros hallazgos es limitada, y las correlaciones genotipo-fenotipo requieren confirmación adicional en cohortes de pacientes más amplias.

Actualmente, los informes sobre la HMNd asociada a VRK1 en poblaciones chinas son escasos, y aún no se han descrito completamente la heterogeneidad fenotípica completa ni las características clínicas de esta afección. En este estudio, presentamos una familia consanguínea china con HMNd causada por una variante homocigota c.1124G>A en el gen VRK1. Mediante la integración de hallazgos clínicos, electrofisiológicos y genéticos, caracterizamos las características fenotípicas y genotípicas de esta genealogía, aportando datos de referencia para apoyar el diagnóstico clínico preciso y el asesoramiento genético en la HMNd relacionada con VRK1.

PRESNTACIÓN DEL CASO:

El probando (III₁) era un varón de 24 años de edad originario de Bijie, provincia de Guizhou, nacido de padres primos hermanos. El pedigrí familiar de tres generaciones se muestra en la Figura 1 y es consistente con un patrón de herencia autosómica recesiva. II₁ y II₂ (los padres del probando) eran ambos portadores heterocigotos de la variante VRK1 c.1124G>A y eran asintomáticos. El probando (III₁) era homocigoto para la variante y presentaba síntomas clínicos. III₂ y III₄ (las hermanas mayores del probando) eran portadoras heterocigotas sin fenotipo clínico. III₃ (la tercera hermana mayor del probando) fue adoptada en la infancia y se reportó que presentaba debilidad en las extremidades inferiores y atrofia muscular similares, pero no se contaba con confirmación genética.

Manifestaciones clínicas

Motivo de consulta: Déficit progresivo y atrofia de ambas extremidades inferiores durante 2 años.

Historia de la enfermedad actual: Hace dos años, el paciente desarrolló debilidad indolora en las extremidades inferiores distales sin factores desencadenantes evidentes. Refirió caídas frecuentes al caminar sobre superficies planas, aunque era capaz de agacharse y levantarse sin ayuda. El paciente y su familia notaron un adelgazamiento progresivo de las piernas por debajo de las rodillas. Desde la infancia tuvo baja tolerancia al ejercicio, con dificultad para correr y saltar. No presentó entumecimiento, dolor ni alteraciones térmicas en las extremidades, no tuvo debilidad evidente en las extremidades superiores ni síntomas bulbares. Su inteligencia era normal y trabajaba de forma independiente como peluquero.

Examen neurológico

Fuerza muscular (escala MRC): Flexión de cadera 5/5, extensión de rodilla 4+/5, dorsiflexión del tobillo 4/5, flexión plantar del tobillo 3+/5 bilateralmente; músculos proximales de extremidades superiores 5/5, extensión de muñeca 4+/5, flexión de dedos 4/5, músculos intrínsecos de la mano 4/5 bilateralmente.

Tono muscular: Normal en las cuatro extremidades; sin aumento ni disminución del tono.

Masa muscular: Se observó una atrofia evidente de los músculos distales de la extremidad inferior (gastrocnemio, tibial anterior y músculos intrínsecos del pie) (Figura 2A). Las extremidades superiores aparecían delgadas, con una atrofia leve de los músculos intrínsecos de la mano (Figura 2B).

Fasciculaciones: No se observaron fasciculaciones visibles en los músculos de las extremidades ni del tronco.

Reflejos tendinosos: Los reflejos de las extremidades superiores estaban disminuidos; los reflejos tendinosos de las extremidades inferiores (reflejos rotuliano y aquileo) estaban ausentes bilateralmente.

Signos patológicos: Los signos de Babinski y de Chaddock bilaterales fueron negativos.

Examen sensorial: Las sensaciones superficiales (dolor, tacto, temperatura) y profundas (vibración, posición) estaban intactas en todas las extremidades.

Coordinación: Las pruebas de dedo-nariz y talón-rodilla-espinilla fueron normales bilateralmente.

Nervios craneales: Pupilas iguales y reactivas a la luz; movimientos extraoculares completos; simetría facial; elevación normal del paladar; movimiento normal de la lengua sin atrofia ni fasciculaciones; ausencia de disfagia o disartria.

Marcha: Marcha en escalón bilateral.

Exámenes complementarios de laboratorio: La creatina quinasa sérica (CK), el nivel de vitamina B₁₂ y las pruebas de función tiroidea (TSH, FT3, FT4) estaban todos dentro de los rangos de referencia normales.

Neuroimagen: No se realizó resonancia magnética (RM) craneal ni espinal en este paciente.

Diagnóstico diferencial

PCH1A: Excluido. El paciente presentaba enfermedad de inicio en la edad adulta, sin microcefalia, hipotonía, displasia cerebelosa ni retraso del desarrollo, lo cual era inconsistente con el fenotipo clásico de PCH1A en la infancia.

SMA: Excluido. El paciente presentaba inicio en la edad adulta con afectación puramente distal y fuerza normal en las extremidades proximales, sin el patrón típico de debilidad predominante proximal del SMA.

CMT2: Descartado mediante neurofisiología. El paciente presentaba afectación exclusivamente motora de los nervios, con potenciales de acción normales en los nervios sensitivos, por lo que no cumplía los criterios diagnósticos para CMT2.

ELA: Excluida. No hubo afectación de neuronas motoras superiores, ni síntomas bulbares, ni fasciculaciones en músculos inervados por nervios cervicales o bulbares; el curso crónico progresivo con afectación puramente distal era atípico para la ELA.

HSP: Excluido. El paciente no presentaba espasticidad, ni hiperreflexia ni signos patológicos, con afectación puramente del motoneurona inferior.

Enfermedad de Kennedy (atrofia muscular espinal y bulbar, SBMA): Excluida. No hubo afectación bulbar, ni fasciculaciones periorales, ni manifestaciones endocrinológicas; el patrón de herencia no era consistente con una transmisión ligada al cromosoma X.

Diagnóstico, Evaluación y Plan

Diagnóstico

1. dHMN, confirmado por la variante patógena homocigota c.1124G>A (p.Trp375Ter) en el gen VRK1 (herencia autosómica recesiva).

2. Neuropatía periférica axonal motora pura, que afecta predominantemente las extremidades inferiores distales.

Evaluación

El paciente presentó debilidad motora distal progresiva lenta y atrofia muscular con sensibilidad conservada, compatible con el fenotipo clásico de inicio en la edad adulta de la dHMN relacionada con VRK1.

Los hallazgos neurofisiológicos indicaron una lesión axonal motora difusa con conducción sensitiva normal, lo que respalda una neuropatía motora pura.

La gravedad de la enfermedad fue leve a moderada en la presentación actual: el paciente permaneció ambulatorio y capaz de realizar sus actividades diarias de forma independiente, sin afectación bulbar ni respiratoria.

El árbol genealógico mostró herencia autosómica recesiva, con portadores heterocigotos que permanecen asintomáticos.

Plan de manejo y seguimiento

1. Manejo sintomático: Recetar órtesis de tobillo-pie para mejorar la estabilidad de la marcha y prevenir lesiones por caídas; derivar a medicina de rehabilitación para programas individualizados de entrenamiento de fuerza y ejercicios de estiramiento con el fin de mantener el rango de movimiento articular y prevenir contracturas.

2. Seguimiento regular: Programar evaluaciones neurológicas anuales, incluyendo estudios repetidos de conducción nerviosa, para monitorear la progresión de la enfermedad.

3. Consejería genética: Proporcionar consejería genética detallada al caso índice y a los miembros de la familia sobre el riesgo de recurrencia, las opciones de planificación reproductiva y las pruebas genéticas presintomáticas para familiares en riesgo.

4. Educación del paciente: Aconsejar la evitación de medicamentos neurotóxicos y la fatiga excesiva; proporcionar apoyo psicológico para abordar la ansiedad relacionada con la enfermedad.

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Protocolo

Este estudio fue aprobado por el Comité de Ética del Hospital Provincial de Medicina Tradicional China de Yunnan (número de aprobación: YYLW-2026-006). Se obtuvo el consentimiento informado por escrito del probando y de todos los miembros participantes de la familia antes del reclutamiento.

1. Preparación del participante y evaluación clínica

  1. El probando y los miembros disponibles de la familia fueron incluidos tras obtener el consentimiento informado por escrito.
  2. Se recopiló información demográfica detallada, historial de enfermedades, antecedentes familiares e información sobre consanguinidad mediante un cuestionario estandarizado.
  3. Se realizó un examen neurológico sistemático, que incluyó evaluaciones de la fuerza muscular, el tono muscular, los reflejos tendinosos, la función sensorial, la coordinación, la marcha y la función de los nervios craneales.
  4. La fuerza de todos los grupos musculares principales se documentó utilizando la escala del Medical Research Council (MRC).
  5. Se obtuvieron fotografías clínicas de las extremidades tras recibir el consentimiento por escrito del participante.
    NOTA: Todas las evaluaciones clínicas fueron realizadas por un neurólogo certificado por el consejo especializado en trastornos neuromusculares para garantizar la consistencia diagnóstica.

2. Examen neurofisiológico

  1. Preparación del paciente
    1. Se instruyó al participante para que evitara la cafeína y el ejercicio intenso al menos 2 h antes del examen.
    2. La temperatura de la sala de examen se mantuvo entre 24 y 26 ºC, y la temperatura de la piel del miembro se mantuvo por encima de 32 ºC utilizando una lámpara de calor cuando fue necesario.
    3. Se colocó al participante en posición supina en una sala de examen tranquila y con poca iluminación.
  2. Estudio de la velocidad de conducción nerviosa
    1. Se limpió la piel en los sitios de los electrodos con hisopos con alcohol para reducir la impedancia.
    2. Se colocaron electrodos de registro superficiales sobre el punto motor del músculo objetivo, y el electrodo de referencia se posicionó distalmente sobre el tendón correspondiente.
    3. Se colocaron los electrodos de estimulación a lo largo del trayecto del nervio en puntos anatómicos estándar.
    4. Se realizaron estudios de conducción nerviosa motora en los nervios mediano, cubital, tibial y peroneo común bilaterales. Se registraron la latencia distal, la amplitud del potencial de acción muscular compuesto (CMAP) y la velocidad de conducción motora.
    5. Se realizaron estudios de conducción nerviosa sensitiva en los nervios mediano, cubital, peroneo superficial y sural bilaterales, utilizando técnicas ortodrómicas o antidrómicas, según correspondiera. Se registraron la amplitud del potencial de acción del nervio sensitivo (SNAP) y la velocidad de conducción sensitiva.
    6. El filtro de banda pasante se ajustó a 20 Hz–10 kHz para los estudios motores y a 20 Hz–2 kHz para los estudios sensitivos. Se utilizaron velocidades de barrido de 2 ms/división y 1 ms/división para los estudios motores y sensitivos, respectivamente.
  3. Electromiografía con aguja
    1. Se insertó un electrodo de aguja concéntrico en cada músculo objetivo en condiciones estériles.
    2. Se evaluó la actividad espontánea en reposo, incluyendo ondas positivas agudas, potenciales de fibrilación y potenciales de fasciculación.
    3. Se evaluó la morfología del potencial de unidad motora (MUP) durante una contracción voluntaria leve. Se midieron la duración, la amplitud y la polifasia.
    4. Se evaluó el patrón de reclutamiento durante la contracción voluntaria máxima.
    5. Se examinaron bilateralmente los músculos tibial anterior, gastrocnemio medial, abductor del meñique, primer interóseo dorsal, deltoides y recto femoral. También se examinaron los músculos esternocleidomastoideo y paravertebrales T10.
      NOTA: Todos los exámenes neurofisiológicos fueron realizados por un electromiografista experimentado. La impedancia de la piel se mantuvo por debajo de 5 kΩ para asegurar la calidad de la grabación. Se confirmó la reproducibilidad de todas las formas de onda en al menos dos estimulaciones consecutivas.

3. Recolección de muestras de sangre periférica y extracción de ADN genómico

  1. Se recogió sangre venosa periférica (3–5 mL) de cada participante en un tubo con anticoagulante de ácido etilendiaminotetraacético (EDTA).
  2. Las muestras de sangre se almacenaron inmediatamente a 4 ºC tras la recolección y se procesaron dentro de las 24 h.
  3. El ADN genómico se extrajo de los leucocitos sanguíneos periféricos utilizando un kit de extracción de ADN genómico.
  4. La concentración y pureza del ADN se midieron mediante un espectrofotómetro.
  5. La integridad del ADN se evaluó mediante electroforesis en gel de agarosa al 1 %.
    NOTA: Se aceptaron muestras de ADN con una relación A260/A280 de 1,8–2,0 y una concentración de ≥50 ng/µL. Las muestras que no cumplieron con los criterios de control de calidad se re-extrajeron.

4. Secuenciación del exoma completo

  1. Preparación de la biblioteca
    1. El ADN genómico (1 μg) se fragmentó en fragmentos de 150–200 pb mediante sonicación.
    2. Se realizó la reparación de extremos, la adición de cola de A y la ligación del adaptador según el protocolo del kit de preparación de bibliotecas.
    3. Las regiones exónicas se enriquecieron utilizando un kit de captura de exoma completo humano según el protocolo del fabricante.
    4. La biblioteca capturada se amplificó mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR), y los productos resultantes se purificaron.
  2. Secuenciación
    1. Se realizó una secuenciación de lecturas emparejadas en una plataforma de secuenciación de alto rendimiento utilizando una longitud de lectura de 150 pb.
    2. Se buscó una profundidad media de secuenciación de ≥100 Χ en todo el exoma objetivo, con ≥98% de las bases objetivo cubiertas a una profundidad de ≥10Χ y ≥95% cubiertas a una profundidad de ≥20Χ.
    3. NOTA: Se confirmó una concentración de la biblioteca de ≥2 nM y una distribución del tamaño del inserto de 250–350 pb antes de la secuenciación. Después de la secuenciación, se evaluaron las puntuaciones Q30, el contenido de GC y la profundidad de cobertura para confirmar la calidad de los datos.

5. Análisis bioinformático y filtrado de variantes

  1. Se realizó el análisis primario de los datos, incluyendo la llamada de bases, la evaluación de la calidad y el recorte de adaptadores.
  2. Las lecturas limpias se alinearon al genoma de referencia humano GRCh37 (hg19) utilizando software de alineación de secuencias.
  3. Se realizó la identificación de variantes para detectar variantes de un solo nucleótido (SNVs) e inserciones y deleciones pequeñas (indels).
  4. Las variantes se anotaron utilizando bases de datos públicas, incluyendo la Base de Datos de Agregación del Genoma (gnomAD), el Proyecto 1000 Genomas, ClinVar y la Herencia Mendeliana en Línea en el Hombre (OMIM).
  5. Las variantes se filtraron y priorizaron utilizando los siguientes criterios.
    1. Se conservaron las variantes ubicadas en regiones exónicas o de sitios de empalme canónicos.
    2. Se excluyeron las variantes comunes con una frecuencia del alelo menor (MAF) de >0.01 en las bases de datos poblacionales.
    3. Se priorizaron las variantes sin sentido, por corrimiento del marco de lectura, de sitios de empalme y las variantes de sentido erróneo predichas como perjudiciales.
    4. Los genes candidatos se compararon con listas conocidas de genes asociados a trastornos neuromusculares. Se priorizaron aún más los genes compatibles con un patrón de herencia autosómica recesiva.
    5. El transcrito VRK1 NM_003384.3 se utilizó como secuencia de referencia para la nomenclatura de las variantes.

6. Validación mediante secuenciación Sanger y análisis de segregación familiar

  1. Se diseñaron cebadores de PCR que flanquean el sitio del variant candidato utilizando software de diseño de cebadores.
  2. Se amplificó la región genómica diana del ADN de cada miembro de la familia mediante PCR.
  3. Se purificaron los productos de PCR y se realizó secuenciación Sanger bidireccional.
  4. Los cromatogramas de secuenciación se alinearon con la secuencia de referencia utilizando software de alineación de secuencias.
  5. Se verificó el genotipo de cada miembro de la familia y se evaluó la cosegregación del variant con el fenotipo de la enfermedad en el pedigrí.
    NOTA: Se confirmaron cromatogramas limpios con picos únicos y sin ruido de fondo. Se repitieron la amplificación por PCR y la secuenciación para las muestras que produjeron resultados ambiguos.

7. Clasificación de la patogenicidad de variantes y confirmación diagnóstica

  1. La variante verificada fue clasificada según las normas y directrices de 2015 del Colegio Estadounidense de Genética Médica y Genómica (ACMG).
  2. Se integraron los fenotipos clínicos, los hallazgos neurofisiológicos, los resultados de las pruebas genéticas y los datos de segregación familiar para establecer el diagnóstico molecular final.
  3. Se ofreció asesoramiento genético a la familia sobre el riesgo de recurrencia, las opciones reproductivas y el pronóstico a largo plazo.

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Resultados

Resultados genéticos

Se realizó WES en el probando, con una profundidad media de la región diana de 112 ×; el 98,7 % de las bases diana tuvieron una cobertura de al menos 10 × y el 96,2 % de al menos 20 ×. Tras el filtrado y la priorización de las variantes, se identificó una variante sin sentido homocigótica c.1124G>A (p.Trp375Ter) en el gen VRK1 (transcrito NM_003384.3, ensamblaje del genoma GRCh37/hg19) como la variante patógena candidata.

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Discusión

En este estudio, aplicamos un flujo de trabajo diagnóstico integrado que combina fenotipificación clínica, examen neurofisiológico, WES y análisis de segregación familiar para identificar una variante patógena homocigótica VRK1 c.1124G>A en una familia consanguínea china con dHMN de inicio en la edad adulta. Esta genealogía amplía el espectro fenotípico de los trastornos relacionados con VRK1 y proporciona datos de referencia para el diagnóstico del dHMN en la población china.

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Divulgaciones

Los autores no tienen conflictos de intereses que declarar.

Agradecimientos

Este trabajo fue apoyado por el Proyecto de Construcción de la Especialidad Ventajosa Nacional de Medicina Tradicional China 2026 (Encefalopatía) (Yuncaishe [2025] N.º 219) y por el Programa de Investigación Básica del Departamento de Ciencia y Tecnología de la Provincia de Yunnan (Convenio N.º 202401AZ070001-057).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Reactivos &y Consumibles
Tubo al vacío para la recolección de sangre con anticoagulante EDTA (5 mL)BD Biosciences (Becton, Dickinson and Company)367861
Kit de extracción de ADN genómico (formato de columna de centrifugación) para sangre periféricaQIAGEN; Kit QIAamp DNA Blood Mini51106
Kit de Amplificación de Sondas Dependiente de la Ligadura Múltiple (MLPA)MRC HollandConjunto personalizado de sondas para el gen diana
Kit de amplificación por PCR (incluye polimerasa Taq, dNTPs y tampón de reacción)Takara Bio; Kit de PCR LA TaqRR002A
Polvo de agarosa (grado electroforesis)Biowest111860
Kit de reacción de secuenciación Sanger (BigDye Terminator v3.1)Thermo Fisher Scientific; Applied Biosystems4337455
Kit de purificación de productos de secuenciaciónThermo Fisher Scientific; Kit de Purificación BigDye XTerminator4376484
Tampón de electroforesis TAEGrado comercial / preparado en laboratorio—
Tubos en tira de 8 para PCR, tubos para centrífuga y otros consumibles de rutinaAxygen—
Instrumentos &y Equipo
Analizador genético de electroforesis capilar (plataforma de secuenciación Sanger)Applied Biosystems, Thermo Fisher Scientific3500 Dx
Ciclador térmico de gradiente (instrumento de PCR)Bio-Rad LaboratoriesC1000 Touch
Espectrofotómetro ultramicro (para cuantificación de ácidos nucleicos)NanoDrop One, Thermo Fisher ScientificND-ONE-W
Sistema de electroforesis en gel de agarosa horizontalBeijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.DYY-6C
Sistema de documentación y análisis de gelesBio-Rad LaboratoriesGelDoc Go
Centrífuga refrigerada de alta velocidad para banco de laboratorioEppendorf5424 R
Sistema de velocidad de conducción nerviosa / electromiografía (VCN/EMG)Natus MedicalKeypoint 9033A07
Baño metálico / baño de agua a temperatura constanteDLAB Scientific—
Software de análisis
Software de análisis de datos de MLPA (Coffalyser.Net)MRC Hollandv140
Análisis de picos de secuenciación Sanger y software de alineamiento de secuenciasApplied Biosystems, Thermo Fisher ScientificAnálisis de secuenciación v6.0
Software de diseño de cebadoresPremier BiosoftPrimer Premier 6
Herramientas de alineamiento de secuencias e interpretación de variantesNCBI BLAST (en línea), base de datos ClinVar—

Referencias

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