En la diferenciación in vitro de la madre embrionarias de ratón (MES), las células con el método de gota

Resumen

Este vídeo demuestra cómo llevar a cabo en la diferenciación in vitro de células madre embrionarias de ratón a cuerpos embrioides utilizando el método de gota.

Resumen

Las células madre tienen el potencial extraordinario para convertirse en muchos tipos celulares diferentes. Cuando una célula madre se divide, cada nueva célula tiene la capacidad de seguir siendo una célula madre o convertirse en otro tipo de célula con una función más especializada, Esta prometedora de la ciencia está llevando a los científicos a investigar la posibilidad de terapias basadas en células para tratar la enfermedad. Cuando la cultura en suspensión sin factores de antidiferenciación, las células madre embrionarias se diferencian y espontánea forma tridimensional agregados multicelulares. Estos agregados de células se llaman cuerpos embrioides (EB). Colgando cultura gota es una formación muy utilizado EB método de inducción. La parte inferior redondeada de gota colgante permite la agregación de células madre embrionarias que pueden proporcionar las células MES un buen ambiente para la formación de EBS. El número de células madre embrionarias aggregatied en una gota se puede controlar variando el número de células en la suspensión inicial de la célula para ser colgado como una gota de la tapa de la placa de Petri. El uso de este método que puede reproducible forma homogénea EBs de un número determinado de células madre embrionarias.

Protocolo

1. Gelatinizar T75 frasco con una solución de gelatina al 0,1% y la placa se incuba en un 37 ° C, 5% de CO ₂ incubadora de cultivo de tejidos durante la noche un día antes.
2. Saque las células MES de incubar, se aspira el medio, enjuague el cultivo de células ES con PBS, se añaden 0,05% de solución de tripsina para cubrir el fondo del plato (2 placas ml/100mm).
3. Se incuba a 37 ° C durante aproximadamente un minuto, hasta que las células son desprendimiento de la placa.
   
4. Suavemente triturar (pipeta de arriba y abajo) de las células trypsinized cuatro a seis veces para dispersar las células madre embrionarias con una pipeta Pasteur conectada,. T....

Discusión

Las desventajas del método de gota son los siguientes: el volumen de líquido de una caída se limita a menos de 50 ul por el mantenimiento de las gotas colgando de la tapa por la tensión superficial, y es imposible cambiar el medio para colgar gotas. La observación de la formación de EBS en gotas directamente con el microscopio es también muy difícil durante el cultivo. Más aún, el método de la gota colgante consta de dos pasos, por lo tanto, una serie de pasos del método de gota puede ser un problema.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
DMEM	Reactivo	GIBCO, by Life Technologies	11965-092
Suero bovino fetal (FBS)	Reactivo	Hyclone	SH30070.03
L-Glutamina	Reactivo	GIBCO, by Life Technologies	25030
Ácidos aminos no esenciales	Reactivo	GIBCO, by Life Technologies	11140-050
Penicilina / Estreptomicina	Reactivo	GIBCO, by Life Technologies	15140-122
Piruvato de sodio	Reactivo	GIBCO, by Life Technologies	11360-70
β-mercapto–etanol	Reactivo	Chemicon International	ES-007-E
factor inhibidor de la leucemia (LIF)	Reactivo	Chemicon International	LIF2005
placa de 96 pocillos con adherencia ultrabaja	Herramienta	Corning	3474