Hacer patch pipetas y electrodos de Sharp con un extractor programable

Summary

Este vídeo muestra cómo usar un extractor de programación para pipetas de parches y electrodos para electrofisiología fuerte. El mismo procedimiento puede ser utilizado para hacer una variedad de herramientas de vidrio, incluyendo agujas de inyección.

Abstract

Microelectrodos de vidrio (también llamado pipetas) han sido un caballo de batalla de la electrofisiología durante décadas. Hoy en día, las pipetas son hechas de capilares de vidrio con un extractor programables. El calor de esos instrumentos el capilar utilizando un filamento de metal o un láser y sacar el cristal con la gravedad, un motor o ambos. Pipetas para la grabación de patch-clamp se forman con el calor y sólo la gravedad, mientras que los electrodos de registro intracelular fuerte uso de una combinación de calor, la gravedad, y un motor. El procedimiento utilizado para pipetas intracelular de grabación es similar a la utilizada para fabricar agujas de inyección para una variedad de aplicaciones, incluyendo la inyección de cRNA en ovocitos de Xenopus. En vidrio en general, capilar <1,2 mm de diámetro se utiliza para hacer las pipetas para la grabación de patch clamp, mientras más estrecho de vidrio se utiliza para el registro intracelular (diámetro externo = 1,0 mm). Para cada herramienta, el tirador está programado de forma ligeramente diferente. Este video muestra cómo hacer que los dos tipos de pipetas de grabación mediante programas preestablecidos extractor.

Protocol

Pipetas tirando

El uso de un extractor de microelectrodos como el Sutter P-97 Flaming / Brown, tirar de un conjunto de aproximadamente 10 a 20 pipetas.

1. Seleccione su vaso capilar. Usamos borosilicato capilares (Sutter BF150-110-10, 1,5 mm de diámetro exterior, diámetro interior 1,1 mm, 10 cm de largo). Almacenar el vidrio con cuidado para que permanezca limpia y libre de polvo.
2. Diseñar un programa de extracción. Nosotros usamos un programa de cinco pasos, con el calor y la velocidad desciende a cada paso, y un sofá pequeño en el paso final. Libro de cocina de Sutter pipeta es una excelente referencia para el desarrollo....

Discussion

El protocolo se ilustra aquí es de uso diario en los laboratorios de electrofisiología, y también se utiliza para fabricar agujas de inyección de células y animales. Con un extractor de programación, es fácil de hacer pipetas para una variedad de usos. Con atención y cuidado, el filamento en su extractor tendrá una duración de un año o más. Buena suerte con sus experimentos.

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Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Instrumento extractor de micropipetas		Sutter Instrument Co.	P-97	O instrumento similar (por ejemplo, Sutter, P-87 o P-2000)
Reactivo capilar de vidrio		Sutter Instrument Co.	BF150-86-10	O, vidrio capilar similar. Para facilitar el llenado de la pipeta, utilice un capilar con un filamento de vidrio.