Artículo de método

La recogida y medición de mediadores inflamatorios y nociceptivos en las heridas quirúrgicas

DOI:

10.3791/962

⸱

29 de octubre de 2008

 ,  ,  , 
1Department of Anesthesiology, Stanford University School of Medicine

En este artículo

Retraction Notice

This article has been retracted at the request of the authors due to duplication of text in J Pain (Carvalho B, Clark DJ, Angst MS (2008) Local and Systemic Release of Cytokines, Nerve Growth Factor, Prostaglandin E2, and Substance P in Incisional Wounds and Serum Following Cesarean Delivery. J Pain 9: 650-657.) due to an honest mistake of the authors. View Retraction Notice

Resumen

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Una técnica para recoger y medir los mediadores bioquímicos de la herida quirúrgica en momentos específicos.

Resumen

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Los objetivos de este estudio fue probar la viabilidad de la recogida y medición de mediadores bioquímicos inflamatorios y nociceptivos en el sitio quirúrgico, para evaluar la relación entre la herida y los niveles séricos, y determinar las asociaciones entre la liberación de mediadores, el dolor y el consumo de analgésicos post-cesárea entrega. Veinte mujeres sanas sometidas a cesárea electiva con anestesia espinal se inscribieron. Exudado de la herida y los mediadores de suero, las puntuaciones de dolor y el consumo de analgésicos se mide a 1, 6, 24 y 48 horas post-cesárea. En el exudado de la herida, 19 de los 20 mediadores se detectaban correctamente incluyendo IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, IL -17, TNFa, INFγ, G-CSF, GM-CSF, MCP-1 y MIP-1β, factor de crecimiento nervioso (NGF), la prostaglandina E2 (PG-E2) y la sustancia P. heridas PG-E2 y diversas citocinas alcanzó su punto máximo a principios , mientras que el NGF mostró una liberación más retardada. No hubo correlación entre la concentración frente al perfil temporal de la herida y citocinas séricas. Este estudio demuestra la viabilidad de la recogida y medición de mediadores inflamatorios y nociceptivos en las heridas quirúrgicas en momentos específicos. La falta de correlaciones significativas entre los niveles séricos de la herida y hace hincapié en la importancia de determinar el sitio específico de patologías localizadas en libertad si se van a estudiar.

Protocolo

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Colección bioquímicos mediador inflamatorio y nociceptivo

  1. El On-Q ® PainBuster ® sistema de alivio del dolor se inserta en la capa subcutánea por el equipo quirúrgico justo antes de cierre de la herida. El sistema proporciona continuamente una solución salina normal (o anestesia local) por vía subcutánea en la herida a una velocidad de 2 ml / h.
  2. Una llave de tres vías se incorpora a este sistema para permitir la aspiración de exudado de la herida en los puntos de tiempo especificado.
  3. En los puntos de tiempo especificado por el protocolo (por ejemplo, 1, 6, 24 y 48 horas después del parto por cesárea), 1 ml de exudado de la herida se retira en una taza de polietileno conteniendo 30 l de inhibidor de la proteasa.
  4. Al mismo tiempo, los intervalos de 10 ml de sangre se recoge en un tubo superior verde de recogida de sangre que contiene heparina de litio. 300 l de inhibidor de la proteasa se añade a las muestras de sangre.
  5. Dentro de 1 hora de la recolección, las muestras se colocan en hielo y se centrifuga a 3000 rpm durante 10 minutos.
  6. El suero y supranate herida se elimina y el lugar en un tubo de microcentrífuga estándar y se almacenan a -20 ° C.

Ensayo de análisis

  1. Una vez que las muestras sean tomadas, que se descongelan y se analizan al mismo tiempo.
  2. Las citoquinas son medidos usando A17-multiplex placa cordón inmunoensayo matriz. Multiplex inmuno-ensayo tecnología permite ensayar hasta 100 analitos en las muestras de fluidos corporales como de pequeño volumen de 50 l, y producir resultados comparables con los obtenidos por ELISA. Esta placa es capaz de medir la interleucina 1ß (IL-1ß), la interleucina 2 (IL-2), la interleucina 4 (IL-4), interleucina 5 (IL-5), la interleucina 6 (IL-6), la interleuquina 7 (IL -7), la interleucina 8 (IL-8), la interleuquina (IL-10), la interleuquina 12 (IL-12), la interleuquina 13 (IL-13), la interleuquina 17 (IL-17), factor de necrosis tumoral α (TNF) , el interferón α (INFα), factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), granulocitos y macrófagos factor estimulante de colonias (GM-CSF), proteína quimiotáctica de monocitos 1 (MCP-1) y la proteína inflamatoria de los macrófagos 1 (MIP-1β).
  3. Factor de crecimiento nervioso se mide con el anticuerpo NGF DY256 añadiéndolo a la placa de 17 complejos con ayuda del kit de amina Bio-Plex de acoplamiento.
  4. Cada medición se realiza por duplicado y de acuerdo a las especificaciones del fabricante. Las curvas de calibración para cada analito se generan mediante el uso de los analitos de referencia facilitada por los fabricantes en concentraciones de 0.20, 0.78, 3.13, 12.5, 50, 200, 800, 3200 pg / ml más un cero estándar (solución salina normal solamente). Las curvas de calibración se incluyen en cada carrera y las concentraciones de la muestra se calculó con el software de Administrador de Bio-Plex.
  5. La prostaglandina E2 y la sustancia P se miden con una gran sensibilidad kits de ELISA se lleva a cabo cada ensayo por duplicado, de acuerdo a las especificaciones del fabricante.

    Figura 1
    Figura 1

    Figura 1: Los niveles de exudado y el suero de diversas citoquinas pro-y anti-inflamatorios (interleucina 1ß (IL-1ß), la interleucina 2 (IL-2), la interleucina 4 (IL-4), interleucina 5 (IL-5), la interleucina 6 (IL-6), la interleuquina 7 (IL-7), la interleucina 8 (IL-8), la interleuquina (IL-10), la interleuquina 12 (IL-12), la interleuquina 13 (IL-13), la interleuquina 17 (IL -17), factor de necrosis tumoral α (TNF-α), interferón γ (INFγ), factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), granulocitos y macrófagos factor estimulante de colonias (GM-CSF), la proteína quimiotáctica de monocitos 1 (MCP-1 ) y la proteína inflamatoria de los macrófagos 1 (MIP-1ß), factor de crecimiento nervioso (NGF), la prostaglandina E2 (PG-E2) y la sustancia P (SP) niveles (pg / mL) medidos al inicio, 6 y 24 horas post-parto por cesárea .

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Discusión

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El On-Q ® PainBuster Dolor ® Sistema de seguridad deben ser insertados a través de toda la incisión en la capa subcutánea justo antes de cierre de la herida. Esto facilita la aspiración a través de la llave de tres vías en los intervalos de tiempo especificados. El On-Q ® sistema de forma continua proporciona una solución salina normal por vía subcutánea en la herida a una velocidad de 2 ml / h. Esto evita que el catéter de la coagulación y mejora la fiabilidad del sistema para producir muestras de exudado. Si la aspiración de exudado es di...

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Divulgaciones

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Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

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El trabajo del Dr. Carvalho se apoya en un edificio Carrera Interdisciplinaria de conceder Salud de la Mujer de investigación de la Oficina de Investigación en Salud de la Mujer y el Instituto Nacional de Salud Infantil y Desarrollo Humano de los Institutos Nacionales de Salud (5K12 HD043452). Angustia Dr. recibieron suministros (el on-Q ® PainBuster ® Post-Op Sistema de Alivio del Dolor) y la financiación para la realización de los ensayos bioquímicos de I-Flow (Lake Forest, CA).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Sistema On-Q® PainBuster® para alivio del dolor postoperatorio I-Flow, Lake Forest, CA
Inhibidor completo de proteinasas Roche Group
Placa Bio-PlexTM de inmunoensayo con microesferas de 17 analitos múltiplesBio-Rad
Kit de acoplamiento de aminas Bio-PlexBio-Rad
El anticuerpo anti-NGF DY256R&D Systems
Kits ELISA de prostaglandina E2 y péptido PAssay Designs

Referencias

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  1. Elshal, M. F., McCoy, J. P. Multiplex bead array assays: performance evaluation and comparison of sensitivity to ELISA. Methods. 38, 317-323 (2006).
  2. Heijmans-Antonissen, C., Wesseldijk, F., Munnikes, R. J., Huygen, F. J., van der Meijden, P., Hop, W. C., Hooijkaas, H., Zijlstra, F. J. Multiplex bead array assay for detection of 25 soluble cytokines in blister fluid of patients with complex regional pain syndrome type 1. Mediators Inflamm.. 28398, 1-8 (2006).
  3. Buvanendran, A., Kroin, J. S., Berger, R. A., Hallab, N. J., Saha, C., Negrescu, C., Moric, M., Caicedo, M. S., Tuman, K. J. Upregulation of prostaglandin E2 and interleukins in the central nervous system and peripheral tissue during and after surgery in humans. Anesthesiology. 104, 403-410 (2000).
  4. Holzheimer, R. G., Steinmetz, W. Local and systemic concentrations of pro- and anti-inflammatory cytokines in human wounds. Eur J Med Res. 5, 347-355 (2000).

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