Estándares internos

1. manejo de muestras correcta: Lo que una solución

1. Toma un vaso limpio y masa la cantidad correcta de la muestra en él. Registro real utilizado masa. En este ejemplo, se hace una solución de la adenina en un matraz aforado para uso como estándar interno para el análisis siguiente. La masa de la adenina es 100 mg. Hacer masa no directamente en un matraz aforado ya que tiene un cuello largo y la adenina no puede añadir o quitar fácilmente.
2. Añadir aproximadamente 25 mL de solvente (en este caso dimetilsulfóxido (DMSO)) en el vaso y dejar mezclar para disolver. En este ejemplo, la solución final se hace en un matraz aforado de 50 mL, así que sólo añadir unos 25 mL por lo que se puede enjuagar el vaso y la solución para el volumen final.
3. Una vez que el sólido se disuelva, verter la solución en el matraz aforado.
4. Enjuague el vaso y la barra de agitación con pequeñas cantidades de solvente, aproximadamente 10 mL y verter el enjuague al matraz volumétrico. Repetir dos veces más. Esto ayuda a asegurar a la transferencia de la solución adecuada.

2. preparación de una curva de calibración estándar interno

1. Preparar las muestras estándar deseadas para el análisis de cromatografía de gases. En este ejemplo, la cafeína se extrae del café usando acetonitrilo y entonces adenina se utiliza como estándar interno para la medición.
2. Para las muestras de cafeína, pesar la cantidad de muestra necesaria para hacer 1 mg/mL de muestra. Si se utiliza un matraz aforado de 10 mL, es de 10 mg.
3. Pesar el analito en un vaso de precipitados, agregar unos mL de disolvente (metanol aquí) para disolver y luego trasvasar al matraz volumétrico utilizando 3 enjuagues.
4. Hacer 3 más estándares en una manera similar con 0.2, 0.5 y 2 mg/mL cafeína.
5. Poner 1 mL de cada cafeína estándar en un frasco de la muestra.
6. Añadir 0,2 mL de estándar interno de la adenina de 2 mg/mL en cada frasco de la muestra.
7. Ejecutar el experimento de cromatografía de gases con cada estándar de cafeína. De cada cromatograma, calcular la relación de zonas de pico para el cafeína vs el estándar.
8. Hacer un diagrama de la relación de área vs la tasa de concentración. La pendiente de esa trama es el factor de respuesta.

3. preparación de una muestra Real con estándar interno para cromatografía de gases

1. Preparar la muestra deseada para el análisis de cromatografía de gases. En este ejemplo, se extrae la cafeína de café con acetrontrile.
2. Para la muestra de café, masa 2 g de café en un vaso de precipitados de 100 mL. Registrar el peso exacto del café.
3. Añadir 20 mL de acetonitrilo en el vaso.
4. Déjelo reposar 20 minutos, revolviendo frecuentemente.
5. El café molido hacia fuera usando un papel de filtro en un embudo de filtro.
6. Enjuague el filtro de papel de 3 x con pequeñas cantidades de acetonitrilo (5 mL).
7. Medir el volumen final del filtrado. Debe ser alrededor de 35 mL.

4. ejecutar la muestra y calcular la concentración

1. Tomar 1 mL de la muestra de extracto de café y agregar 0.2 mL del estándar interno en un frasco. Coloque el frasco en el estante del muestreador automático.
2. Realizar un análisis de GC de la muestra. Asegúrese de que las condiciones de la GC son tales que la cafeína y la adenina por separado. En este ejemplo, isotermos separaciones se realizan a 200 º C.
3. Después del análisis, calcular el área de pico para el pico de estándar interno y el pico del analito. Sus proporciones, calcular la cantidad de cafeína en la muestra.

5. resultados: Análisis de GC de cafeína con estándar interno

1. Análisis de GC de la cafeína se muestran en la figura 1. Adenina se utiliza como estándar interno. La relación de zonas de pico puede ser medida y trazado vs la relación de las concentraciones. La pendiente de la parcela es el factor de respuesta (en este caso 1.8).
2. La figura 2 muestra un cromatograma de una muestra de café con estándar interno de adenina. La relación entre el área de pico es 1,78. Utilizando el factor de respuesta y la concentración conocida de la adenina (0,33 mg/mL), se calcula la concentración de cafeína en la muestra desconocida a 0,33 mg/ml.

Figura 1. Parcela de calibración utilizando un patrón interno. Una parcela de los cocientes de concentración de área ratios vs 3 muestras estándar de cafeína (1, 0,5 y 0,2 mg/mL) con estándar interno de adenina de 0,33 mg/mL añadido a cada uno. La pendiente de la recta es 1.8, que es el factor de respuesta.

Figura 2. Cromatograma de café con estándar interno adenina. Una parcela de la respuesta del detector FID a las muestras. Los tres picos principales son adenina (IS), cafeína y ácido palmítico.