Obtención de imágenes de muestras biológicas con microscopía óptica y confocal

1. Imágenes confocales

1. Cargue la muestra en el escenario. Entiébelo debajo de la lente. No debe exceder la limitación de peso de la etapa, que en este caso es de 5 kg. La muestra no debe tener más de 100 mm de espesor.
2. Abra el software de imágenes y seleccione "Crear trabajo."
3. En la columna Topografías, elija el botón asistente.
4. Cree una imagen general con el aumento más bajo, 2.5X. Antes de cambiar las ampliaciones, asegúrese de que la muestra esté enfocada cambiando la posición Z hasta que vea una imagen clara. Esto se puede hacer empujando hacia abajo o tirando hacia arriba en el manipulador del microscopio 3D. El movimiento Z más fino se logra activando el botón en el lado, lo que provoca una luz azul alrededor de los bordes.
5. Aumente lentamente el aumento de la lente, jugando continuamente con la intensidad de la luz y el enfoque hasta que esté en el aumento deseado. Si lo desea, elija un área de interés diferente moviendo la etapa en las direcciones x e y utilizando el manipulador.
6. Una vez que se toma una imagen general en el aumento bajo, pulse el botón siguiente para continuar con el paso Punto de referencia. Si lo desea, especifique un punto de referencia determinado para la medición (es decir, la esquina de la muestra), aunque para ello el punto de referencia predeterminado está bien.
7. Pulse la flecha siguiente para pasar a la siguiente parte del asistente.
8. Cambie el objetivo como desee para ver una resolución adecuada para su muestra. En este caso, la lente objetivo 50X se utiliza para visualizar las celdas de la muestra. El 50X es la lente más cercana a la muestra, por lo que se mueve gradualmente hasta el objetivo 50X asegurando que todavía hay espacio para disminuir la distancia de trabajo después de la lente 20X.
9. En la página "Definición de rango de medición", mueva ligeramente la posición Z (haciendo clic en el botón lateral del manipulador para ajustes finos) para que solo la parte superior de la muestra esté enfocada y haga clic en "Set Last". A continuación, mueva la etapa en la dirección Z (hacia abajo) hasta que solo la parte inferior de la muestra esté enfocada y pulse "Set First". Asegúrese de que el número de sectores calculados no supere los 1000 o que el programa falle.
10. Asegúrese de que la intensidad de la luz no se sobresatura (causa píxeles rojos) en la imagen en cualquiera de los niveles y luego se golpea hecho. Esto tomará la imagen de la tomografía y abrirá el software de tomografía.
11. En el software de tomografía, abra pestañas como la pestaña Estudios para ver los datos en 3D y tomar medidas en espacio 2D o 3D.

2. Imágenes de microscopio óptico digital

1. Cargue la muestra en el escenario. Centra la muestra debajo de la lente. El peso de la muestra no debe exceder la limitación de peso de la etapa, que en este caso es de 4 kg. La muestra no debe ser superior a 12 cm.
2. Abra el software de imágenes.
3. Seleccione un trabajo de la lista de plantillas proporcionadas. También es posible trabajar fuera de un trabajo presionando Examen Gratuito, que le permite estudiar una muestra fuera de un trabajo.
4. Adquiera una imagen de vista general que muestre toda la etapa. Esto servirá como mapa más adelante para mostrar la parte de la muestra que se está visualizando. Al adquirir la imagen, utilice el controlador para cambiar el enfoque y la posición de la imagen.
5. Coloque un sistema de coordenadas. El sistema de coordenadas predeterminado es de la esquina posterior izquierda del escenario y está bien para esta aplicación. Si la muestra está torcida, puede ajustar las coordenadas aquí.
6. Asigne un nombre al ejemplo y al trabajo, esto lo agrega a la lista de trabajos para que otros usuarios puedan volver a él.
7. Seleccione el botón de la cámara en Adquirir. Tome una imagen inicial y, a continuación, presione el botón live mientras navega por la muestra.
8. Mueva el foco hacia abajo hasta que la muestra esté claramente enfocada. También puede ser necesario ajustar la iluminación en la pestaña Iluminación y Apertura".
9. Optimice la imagen con las herramientas del panel Optimización de imagen. Puede jugar con diferentes parámetros en la pestaña Mejoras de imagen, como la inclinación de la lente, los niveles de iluminación de la muestra y el brillo y el contraste, hasta que la imagen tenga la nitidez deseada.
10. Realice mediciones tocando la herramienta Lápiz en el software. Desde allí, tiene acceso a varias herramientas de medición, incluidas distancias, ángulos y área. Utilice las herramientas de distancia y área para medir el tamaño de la muestra.
11. Vaya a la pestaña Flujo de trabajo de resultados y compruebe el diseño del flujo de trabajo para configurar el diseño del informe
12. Toque el botón Guardar para guardar el trabajo de modo que otros puedan usar el mismo flujo de trabajo.